姚琴
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：厦门大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 抗骨肉瘤细胞系MG63特异性单链抗体的制备及功能鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的从全人源噬菌体抗体库中筛选与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的单链抗体（scFv）并进行表达、纯化及鉴定。方法采用噬菌体表面展示技术,以正常人成骨细胞系hFOBl.19为阴性筛选细胞,人骨肉瘤细胞系MG63为阳性筛选细胞,经过＂吸附-洗脱-扩增＂过程筛选并富集特异性抗体,ELISA检测并进行PCR扩增及测序鉴定。获得的阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导后经镍亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定表达、纯化效果,ELISA检测可溶性特异性单链抗体的亲和力、特异性及稳定性。MTT法检测纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。结果通过筛选、PCR扩增和序列分析确定scFv4的片段包含免疫球蛋白序列,其表达产物可与抗原结合;纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖有明显的抑制作用,且其抑瘤作用与质量浓度成正相关。未加蛋白保护剂的纯化抗体4℃下其抗体活性可保持约5周,添加蛋白保护剂的纯化抗体则可在4℃下保持6-7周。结论利用噬菌体表面展示技术成功筛选出能与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的scFv,在大肠杆菌中成功表达并获得基因序列,抗体能抑制MG63细胞的增殖且稳定性良好。
- 谢柏臻姚琴华强赵慧毅
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体可溶性表达
- Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响被引量：6
- 2015年
- 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein,HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70.重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆.荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Eznn和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用.结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体.较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01％±0.22％上升至24.28％±0.50％,增殖速度则自395.14％±2.24％减少至310.00％±2.83％.另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达.而Ezrin-shRNMHSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果.MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT＋IL-2＋HSP70组的杀伤活性高于CT＋IL-2组,最高达56.33％±1.95％.结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用.
- 姚琴赵慧毅谢柏臻
- 关键词：骨肉瘤HSP70热休克蛋白质类
- 抑制自噬增强KPT-185抗套细胞淋巴瘤效应
- 目的 本研究旨在探讨抑制自噬对CRM1 抑制剂抗套细胞淋巴瘤效应的影响。方法 首先探讨CRM1 抑制剂,KPT-185,对MCL 细胞自噬流的影响,采用的方法主要有：MDC 染色分析自噬体的形成;Western-blot...
- 虞洁妮张可杰张永利陈昱函卓慧钦姚琴
- 关键词：MCL
- 异源基因α1,3半乳糖转移酶与增强型绿色荧光蛋白融合对荧光蛋白表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究异源(猪)基因α1,3半乳糖转移酶(α1,3GT)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因形成的融合蛋白对其荧光表达量的影响。方法 BamHI,EcoRI酶切pcDNA3.1-α1,3GT重组载体后,回收含α1,3GT的片段,与BamHI、EcoRI酶切回收的pEGFP-N1载体连接,并酶切、测序鉴定重组真核表达载体pEGFP/α1,3GT。将该表达载体转染人肺癌细胞A549、人胚肾细胞293FT,EGFP的表达用荧光显微镜观察和流式细胞仪进行荧光定量分析。结果 pEGFP-N1载体转染A549和293FT后48h的转染阳性率分别80.5﹪和86.5﹪;pEGFP/α1,3GT载体转染A549和293FT细胞后48h的转染效率则为75.8﹪和81.2﹪。A549细胞空白对照,转染pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的A549细胞平均荧光强度分别为1.21、0.956;293FT细胞空白对照,pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的293FT细胞平均荧光表达量分别为7.66、1.00。结论 pEGFP/α1,3GT融合蛋白的生成抑制了绿色荧光蛋白的表达强度。
- 唐晶谢柏臻李鹏飞姚琴赵涣阁卓慧钦刘祖国赵永祥
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白融合蛋白荧光强度
- 靶向抑制CRM1对套细胞淋巴瘤细胞自噬流和自噬相关蛋白BECN1的影响
- 张可杰张永利陈昱函卓慧钦姚琴
- 聚乙二醇-聚乙烯亚胺负载超顺磁纳米Fe_3O_4的合成及其基因转染应用被引量：1
- 2018年
- 采用单甲基醚聚乙二醇(mPEG-OH)改性聚乙烯亚胺(PEI),得到水溶性接枝共聚物聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺(mPEG-g-PEI),并利用离子交换法制备了负载超顺磁性氧化铁的聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEISPIO).然后合成了α-羧基-ω-马来酰亚胺聚乙二醇(mal-PEG-COOH)和多功能负载SPIO的抗体-聚乙二醇-聚乙烯亚胺(Ab-PEG-PEI-SPIO).PEG-PEI-SPIO与质粒DNA(pDNA)的复合物(Ab-PEG-PEI-SPIO/pDNA)粒径约105nm.体外实验结果显示:T细胞能特异性地吸收Ab-PEG-PEI负载的SPIO,靶向组在基因转染实验中有较好的效果,在基因转染的过程中可用磁共振手段进行实时无创观测.
- 姚琴谢柏臻裴一花
- 关键词：聚乙烯亚胺聚乙二醇基因转染
