吴晓强
- 作品数：8 被引量：25H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学自然科学总论更多>>
- 电激仪研制及高效快速电激转化大肠杆菌
- 1993年
- 高效快速进行转化实验是基因重组的一个重要环节,而电转化已成为目前转化真核及原核细胞的一种通用方法川.电转化又称电激,指活细胞受快速变化的高强度电场作用的过程.电激使得E.‘011细胞外膜产生瞬间穿孔,该电激孔可以足够大并维持一定时间使外源质粒DNA分子、蛋白质分子或其它分子进入细胞.
- 吴晓强李庚白
- 关键词：电转化大肠杆菌
- 微波处理在满江红鱼腥藻原位杂交中的作用被引量：1
- 1993年
- 为快速简便地筛选转基因光合丝状固氮蓝细菌满江红鱼腥藻(蓝藻),我们使用了原位杂交技术。本文对生长固着在硝酸纤维素膜(NC-膜)上的满江红鱼腥藻(Anabaenaazollae)藻群落裂解方法、原位杂交条件等进行了摸索。其中尝试了液氮冻融、微波处理、高温高压处理、温育等物理条件,三乙醇胺月桂基硫酸盐(TLS)、TENS试剂、Sarkosyl,NaOH。
- 刘祥林吴晓强印莉萍汪洪杰邱泽生
- 关键词：微波原位杂交满江红鱼腥藻
- NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响
- 1993年
- 本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。
- 吴晓强施定基刘祥林汪洪杰邱泽生张承谦印莉萍赵微平
- 关键词：满江红鱼腥藻NPTII基因
- 叶绿体发育和光对小麦叶谷氨酰胺合成酶基因表达的影响被引量：22
- 1994年
- 利用电镜、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析技术和小麦叶谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）酶活性测定，研究了小麦叶片不同发育梯度的叶绿体超微结构和ＧＳ同功酶活性之间的关系。结果表明，从叶基至叶尖，随着叶绿体的成熟，净光合率增加，ＧＳ活性增加。各发育阶段离体叶绿体的３Ｈ－Ｕｒａ，３Ｈ－Ｌｅｕ 掺入试验和ＧＳ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，基部是基因表达活性最高的部位。ＧＳｍ ＲＮＡ 在叶绿体发育阶段最多，而ＧＳ酶活性则在成熟叶绿体的部位最高。对黄化苗进行光照，ＧＳｍ ＲＮＡ 和ＧＳ活性明显增加，７２小时达到正常绿苗同等水平。由此说明核编码的叶绿体ＧＳ基因为光调控基因，明显促进了叶绿体ＧＳ基因的转录。
- 印莉萍柴晓清刘祥林李欣李司达吴晓强张承谦赵微平
- 关键词：谷氨酰胺合成酶叶绿体小麦
- 满江红鱼腥藻glnA基因上游调控区的克隆及其序列分析
- 1998年
- 以满江红鱼腥藻（Ａａｃ）提取总ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ技术，扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因（ｇｌｎＡ）上游区．经酶切得到４０９ｂｐ的片段，并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡｋｓ＋上测序．将测序结果与Ａｎａｂａｅｎａ７１２０调控序列比较，有９８２％的同源性．在上游调控中也具有ｎｉｆｌｉｋｅ和Ｅ．ｃｏｌｉｌｉｋｅ启动子，值得注意的是，调节蛋白ＶＦ１的结合位点正好位于ｎｉｆｌｉｋｅ启动子上．所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义，也对表达载体的构建具有实用价值．
- 高志环刘祥林印莉萍吴晓强邱泽生
- 关键词：满江红鱼腥藻AAC上游调控区克隆谷氨酰胺合成酶总DNA
- NPTⅡ在glnA位点的定点整合对转基因满江红鱼腥藻细胞形态和超微结构的影响
- 1994年
- 本文用透射电镜结合扫描电镜观察了转基因满江红鱼腥藻细胞形态和超微结构的变化。与对照细胞相比较，转基因满江红鱼腥藻细胞外被有粘性分泌物堆集，不如对照光滑。转化藻丝较对照藻丝短。此外，异细胞分布频率也有较大变化，５＃转基因藻比对照高出２５％。透射电镜观察发现转基因藻细胞外壁结构，内膜系统和内含物等成份均发生了显著变化。尤其发现大量颗粒，或围绕质膜成规则排列，或呈非规则聚积散布细胞内。这些对形态和超微结构观察的结果较好地说明了转基因藻细胞光合固氮生理生化活性的变化。
- 汪洪杰吴晓强刘祥林施定基
- 关键词：满江红鱼腥藻转基因藻超微结构
- 满江红鱼腥藻glnA启动区的克隆及在烟草中的活性表达被引量：2
- 2000年
- 利用ＰＣＲ技术获得满江红鱼腥藻ｇｌｎＡ启动区，经克隆测序后构成谷氨酰胺合成酶基因启动于驱动的ＧＵＳ基因表达载体。用基因枪转化，将表达载体导入烟草中，在其叶片和茎中检测到ＧＵＳ活性，而在烟草根中未见表达。实验结果对真核生物与原核生物间基因表达调控、转录因子识别的研究以及构建实用载体具有一定价值。
- 刘祥林印莉萍吴燕川高志环吴晓强
- 关键词：满江红鱼腥藻烟草基因表达PCR
- 转基因满江红鱼腥藻细胞内颗粒体的变化
- 1997年
- 用透射电镜观察 NPTⅡ(新霉素磷酸转移酶ⅡNeomycin phosphotransferaseⅡ)在满江红鱼腥藻染色体glnA(谷氨酰氨合成酶基因)位点定点整合后藻细胞内颗粒体的变化.转基因后的满江红鱼腥藻细胞内的代谢发生了很大的变化,为了快速适应和自我调节这一变化,细胞内的储藏颗粒处在积聚与解积聚的动态转化过程中.通过了解储藏颗粒的结构变化,可为研究转基因藻细胞光合固氮及生理生化的变化提供物质结构方面的信息.
- 汪洪杰吴晓强刘祥林施定基
- 关键词：红鱼转基因满江红鱼腥藻藻细胞
