马娇颖
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化被引量：4
- 2012年
- 目的研究重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白(Tα1-HSA)基因工程菌在30 L发酵罐中高密度发酵表达Tα1-HSA融合蛋白的发酵工艺及产物的分离纯化方法。方法采用两步发酵法进行重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌的高密度发酵。发酵液经超滤浓缩,阴离子交换色谱,亲和色谱,凝胶过滤色谱等步骤进行分离纯化。结果发酵结束后,菌体细胞湿重达到350 g/L,发酵液中蛋白产量达到2.0 g/L。发酵液经分离纯化后获得了纯度较高的重组Tα1-HSA融合蛋白,HPLC分析纯度达97.5%。结论重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌高密度发酵的成功及分离纯化方法的建立为Tα1-HSA的进一步研究和开发奠定了基础。
- 马娇颖章成昌仇黎鹏姜玉涛闫璐颖陈菁陈建华
- 关键词：胸腺肽Α1人血清白蛋白毕赤酵母高密度发酵分离纯化
- HPLC法测定猪尿酸酶活性被引量：3
- 2012年
- 建立了一种测定重组猪尿酸酶活性的高效液相色谱方法。将重组猪尿酸酶基因工程菌的粗酶液与尿酸溶液反应5min,加入高氯酸溶液终止,经超滤后以体系中尿酸浓度的降低值为指标,采用HPLC法[色谱条件:AgilentZorbax 300SB-C18色谱柱、流动相为磷酸-甲醇-双蒸水(3∶25∶472,体积比)、流速1.0mL·min-1、波长292nm]测定粗酶液活性。结果表明,尿酸在10～500μmol·L-1范围内线性关系良好,样品回收率在99%～104%之间。该方法不受杂质干扰、稳定、灵敏度高,适用于尿酸酶粗酶液活性的检测。
- 陈思李辉马娇颖谢光蓉陈建华
- 关键词：基因工程菌尿酸酶酶活性高效液相色谱
- 重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌的构建和分泌表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌及其目的蛋白的分泌表达,并对其酶活性进行测定。方法从pET-22b/pUOX重组质粒上PCR获得pUOX基因,然后通过重叠延伸PCR技术将pUOX与一段nprB信号肽基因相连,导入穿梭载体pP43X,构建重组载体pP43X/pUOX,运用化学转化法转化枯草芽孢杆菌WB800中。结果发酵表达后胞外分泌液经SDS-PAGE检测,在约34kD处有一清晰蛋白条带,这与预期分子量一致。发酵液中该重组蛋白的酶活力达2.322U/ml。结论成功构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌,目的蛋白分泌表达并具有较高活性。
- 李辉陈思马娇颖戴君谢光蓉陈建华
- 关键词：芽孢杆菌尿酸氧化酶高尿酸血症分泌表达
