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异形胞分化蓝细菌dnaA温度敏感型突变体的构建: 2010年; 以能分化异形胞的蓝细菌(Anabaenasp.PCC7120)为材料,采用重组PCR在体外对控制DNA复制起始的dnaA基因进行定点突变后克隆到整合质粒中,再通过三亲本杂交将整合质粒转移到Anabaena PCC7120中,以分离和筛选温度敏感型突变体。结果成功获得Anabaena PCC 7120 dnaA高温敏感性突变体。研究表明,利用重组PCR技术可在体外实现对Anabaena PCC 7120的dnaA的定点突变,并可通过同源重组双交换成功实行整合质粒中突变基因对野生型基因的置换,使突变基因插入到细胞染色体中,进而成功构建温度敏感型突变菌株。; 魏新元丑敏霞闻盼盼; 关键词：DNAA 定点突变异形胞

绿色荧光蛋白标记S2P在集胞藻6803中的表达: 2012年; 为研究集胞藻6803中两个S2P同源蛋白酶Slr0643和Sll0862的功能,分别在两个蛋白酶的羧基端添加增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签,构建了两株转基因集胞藻psbA2::0643GFP-Cmr/△0643-Kmr和psbA2::0862GFP-Cmr/△0862-Kmr.通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测到egfp基因的转录表达,通过激光共聚焦显微镜检测到转基因集胞藻细胞发出的绿色荧光蛋白荧光,表明带EGFP标签的S2P融合蛋白在psbA2启动子调控下正确表达.; 陈谷闻盼盼秦春燕王玉玲; 关键词：增强型绿色荧光蛋白集胞藻6803 融合蛋白

集胞藻6803中S2P同源蛋白的定位与功能初探: 受控膜内蛋白水解是一种通过招募膜结合的蛋白酶去切割跨膜调控蛋白以调节跨膜信号转导的机制，从细菌到人类有许多生物都使用这种信号传导机制。作为该机制中一个非常重要的蛋白酶，S2P蛋白酶得到了广泛的研究。SLR0643和SLL...; 闻盼盼; 关键词：集胞藻PCC6803 EGFP; 文献传递

线粒体基因高变区应用于香蕉种属亲缘关系的鉴定研究被引量：4: 2010年; [目的]建立一种较为简单有效的香蕉种属关系鉴定的手段和方法。[方法]根据不同香蕉品种线粒体基因内含子序列间的差异性,通过PCR扩增线粒体基因组中细胞色素氧化酶亚基Ⅱ基因中的1个内含子,并进行测序和聚类分析,对分属5个基因型(AAA、AA、AAB、ABB和BB)的16个香蕉品种进行了分类。[结果]16个香蕉品种可分为3大类:第1类包括1个品种,基因型为BB;第2类包括7个品种,基因型为ABB;第3类包括8个品种,基因型包括AA、AAA、AAB和BB。其中,抗病新株系逸仙1、2、3号与粉杂有最近的亲缘关系。[结论]该方法对香蕉品种的分类结果与基因型的组成类型基本一致,说明它在鉴定香蕉种属亲缘关系方面是可行的。; 闻盼盼郭泽锋许林兵黄秉智董方园赵景阳陈谷; 关键词：香蕉线粒体基因内含子

Application of Mitochondria DNA Hypervariable Region in Identification of Genetic Relationships among Different Varieties in Musa paradisiaca被引量：2: 2010年; [Objective] The aim was to establish an effective method for the identification of genetic relationships among different varieties in Musa paradisaca. [Method] Based on the diversity of mitochondria DNA intron sequence among different varieties of M. paradisaca,an intron of cytochrome oxidase subunit II gene in mitochondria DNA genome was amplified and sequenced. And then the cluster analysis was used to classify 16 varieties of M. paradisaca,which belonged to five genotypes （AAA,AA,AAB,ABB and BB）. [Result] The 16 varieties of M. paradisaca could be divided to three classes：the first class contained one variety,the genotype of which was BB; the second class contained seven varieties,the genotype of which was ABB; the third class contained eight varieties,the genotypes of which included AA,AAA,AAB and BB. The new varieties YiXian 1,2 and 3 showed the nearest relationship with FenZa. [Conclusion] The result of classification was consistent with the genotypes,thus verified the feasibility and effectiveness of the new method in the genetic relationship identification of M. paradisaca germplasm.; 闻盼盼郭泽锋许林兵黄秉智陈谷; 关键词：MTDNA INTRON

集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白基因sll0862缺失突变株对热胁迫与氧化胁迫的响应被引量：4: 2012年; 原核生物中S2P参与应答外界环境刺激,然而行光合作用的蓝细菌-集胞藻PCC6803的S2P同源蛋白功能未知。【目的】考察集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白sll0862是否参与外界环境刺激的应答。【方法】监测在高温和氧化胁迫的条件下sll0862基因缺失突变株与野生株在生长速率或存活率上的差异,利用水样调制叶绿素荧光仪(water-PAM,脉冲-振幅-调制叶绿素荧光仪)测量在高温和氧化胁迫的条件下突变株与野生株叶绿素荧光参数的差异,来考察其光合作用差异。【结果】sll0862突变株与野生株在正常的培养环境中生长速率并无差异,但是将sll0862突变株与野生株在48℃加热处理半小时后,sll0862突变株的存活率明显低于野生株。当初始OD730值为0.1的藻液中添加终浓度为1 mmol/L双氧水的时候,sll0862突变株的生长速率比野生株明显低,而且氧化胁迫条件下突变株与野生株的调制叶绿素荧光有差异。【结论】集胞藻PCC6803中sll0862基因的缺失导致突变体对高温与氧化胁迫响应出现缺陷,提示有功能的sll0862参与响应热和氧化胁迫。研究结果为进一步阐述S2P同源蛋白sll0862在集胞藻PCC6803中的功能奠定基础。; 曾小琳闻盼盼陈谷; 关键词：集胞藻PCC6803 氧化胁迫热胁迫

蓝细菌断裂DNA聚合酶DnaE的体内/外反式剪接分析: 2010年; 蓝细菌Anabaena PCC7120的DNA聚合酶DnaE由2个断裂基因dnaENI和dnaECI编码.通过纯化它们的部分基因在大肠杆菌中的表达产物DnaENI′和DnaECI′来免疫家兔获得抗体,用于对断裂的DnaE在体内和体外的反式剪接活性进行鉴定.在体外实验中,将2个断裂的DNA聚合酶DnaENI′和DnaECI′混合,进行反应,并利用它们的抗体对反应产物进行鉴定;在体内实验中,利用以上抗体对Anabaena PCC7120细胞总蛋白进行免疫杂交分析.实验结果表明,蓝细菌AnabaenaPCC7120中断裂的2个DnaE多肽在体内和体外均能进行反式剪接.体外实验中,纯化的DnaENI′和DnaECI′的混合反应产生新的蛋白产物,既有成熟的反式剪接产物DnaEN′-,又有剪切了内含肽后的副产物DnaEN′和DnaE,且DTT的存在对剪接反应具有促进作用;此外体内实验中,在Anabaena PCC7120细胞中既能检测到完整的DnaE,也能检测到未作用的DnaENI,但未能检测到DnaECI.; 魏新元闻盼盼丑敏霞; 关键词：ANABAENA PCC 内含肽反式剪接

重组牛乳铁素融合蛋白的原核表达及其抑菌活性分析: 2010年; 为建立生物合成牛乳铁素的方法,根据牛乳铁素氨基酸序列确定其编码序列,利用PCR技术获得基因扩增产物,接着将该产物与编码鱼腥蓝细菌Anabaena sp.PCC7120的DNA聚合酶基因dnaENI中断裂的内含肽基因Asp dnaEIn的PCR产物进行重组PCR,将获得的重组融合基因再克隆到表达载体pET-28a构建重组融合表达质粒。结果显示,融合表达质粒转化大肠杆菌后经诱导能在大肠杆菌表达宿主Escherichia.coli BL21(DE3)中大量表达,且细胞裂解液与纯化的Anabaena sp.PCC7120中含断裂内含肽Asp DnaEIc的DNA聚合酶蛋白DnaECI混合反应后对金黄色葡萄球菌具有抑制作用。; 魏新元闻盼盼丑敏霞樊明涛; 关键词：重组PCR 融合基因融合蛋白

蓝细菌分离DnaE内含肽的自我剪接研究被引量：2: 2009年; 【目的】证实蓝细菌Anabaenasp.PCC 7120复制酶中分离的DnaE内含肽的自我剪接活性。【方法】分别将AnabaenaPCC 7120中分离的2个dnaE基因的部分序列克隆到表达载体上,获得重组表达质粒,经超量表达和纯化后,免疫家兔获得相应的抗体;同时,两段分离的dnaE序列被克隆到同一表达载体,构建双重组表达质粒,两段序列具有各自的ORF,但由同一启动子调控。双重组表达质粒经诱导之后,利用以上获得的抗体对含有内含肽的DnaE蛋白在大肠杆菌表达体系中的自我剪接反应进行检测。【结果】在双重组表达质粒的表达产物中,抗体不仅可以分别与对应的蛋白质反应,而且还可以同时识别1条新条带,该条带的表观分子量与成熟DnaE的理论值大致相符。【结论】蓝细菌分离的DnaE内含肽在大肠杆菌表达体系中可以进行自我剪接;本研究中获得的抗体具有较好的特异性,无明显背景干扰,而且效价高,抗体可以稀释1 000倍以上使用,也可以用于相关方面的研究。; 魏新元丑敏霞闻盼盼刘东斌; 关键词：重组表达质粒蓝细菌

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闻盼盼

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