辛伟
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国综合性艾滋病研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表达、纯化及免疫原性研究
- 2008年
- 目的:通过原核细胞表达人免疫缺陷病毒(HIV)Nef抗原,制备特异抗血清,为Nef抗原检测提供技术方法。方法:以HIV Botswana毒株基因组为模板,用PCR法获得Nef蛋白编码基因,将其克隆到pET30a载体中,在大肠杆菌中表达Nef融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗血清,用真核表达的Nef抗原对其特异性进行分析。结果:构建的Nef融合基因在大肠杆菌中获得表达,相对分子质量约为36×103,免疫BALB/c小鼠获得针对融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶6400;免疫荧光和Western blot检测表明,该抗血清能特异地与重组痘苗病毒表达的Nef抗原反应。结论:在大肠杆菌中表达了HIV Nef融合蛋白,制备了Nef融合蛋白的高效价小鼠免疫血清,该血清能特异性识别HIV Nef抗原,为HIV Nef抗原检测提供了技术方法。
- 陆柔剑齐建国邓瑶王世峰王文玲辛伟李仁清阮力
- 关键词：人免疫缺陷病毒原核表达抗血清
- 按痘苗病毒优势密码子改造HIV-1 gag基因提高表达水平的研究被引量：10
- 2005年
- 为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①各目的基因分别正向插入了痘苗病毒TK区7.5k启动子下游;②免疫荧光检测显示,改造前后的gag基因均能够很好地在痘苗病毒中表达;③Westernblot检测显示,在相同感染量时,改造后的gag基因具有更高的表达水平;④流式细胞术检测显示,密码子改造后的gag基因较野生型gag基因表达水平提高约17%。上述结果表明:按照痘苗病毒优势密码子进行外源基因改造,可作为提高外源基因在痘苗病毒中表达的策略,同时提示,密码子偏向性是痘苗病毒与宿主细胞相互作用的重要调控因素。
- 张相民辛伟王世峰李仁清陆柔剑王文玲吕亦晨阮力
- 关键词：痘苗病毒基因表达HIV-1GAG基因
- 流感病毒RNA聚合酶蛋白PB1在小鼠中可诱导亚型间交叉免疫保护被引量：2
- 2006年
- 目的探索流感病毒RNA聚合酶PB2和PB1亚基作为实验性流感疫苗候选抗原的可能性。方法以复制型质粒(pSCA)为载体分别构建表达甲1型和甲3型流感PB2和PB1的复制型 DNA疫苗,免疫小鼠后分别用甲1型流感病毒(A/PR／8／34)进行鼻腔攻击,观察针对不同亚型流感病毒的复制型DNA疫苗的免疫保护效果。结果本实验所构建的复制型DNA疫苗在真核细胞中均可表达外源基因;本实验采用的复制型质粒载体(pSCA)与传统质粒载体(pcDNA3)在诱导小鼠产生抗体方面无差异,并且都诱导了偏向T_H1类的免疫反应;表达甲1型和甲3型流感PB1基因的复制型DNA 疫苗均可保护小鼠抵御甲1型流感病毒(A/PR／8／34)的攻击。结论表达甲型流感病毒PB1的复制型 DNA疫苗能保护小鼠抵御同型和异型流感病毒的攻击,本实验为流感疫苗研究提供新的候选抗原。
- 李仁清鲁宁邓瑶王文玲辛伟张相民阮力
- 关键词：流感病毒
- 非复制重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒Bostwana C亚型Nef蛋白及免疫效果的观察被引量：2
- 2004年
- 从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Westernblot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中。NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep IFN ′γ Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN ′γ的CD+8T细胞(占脾细胞总数0 20%);经乳酸脱氢酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞。这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础。
- 辛伟郭斐陆柔剑王世峰邓瑶王文玲张相民李仁清吕亦晨阮力
- 关键词：人类免疫缺陷病毒HIV-1NEF蛋白细胞毒性T细胞
- 密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率影响的研究被引量：5
- 2006年
- 为了研究密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率的影响,分别采用痘苗病毒及其宿主细胞的优势密码子对绿色荧光蛋白基因进行改造,利用荧光、Western blot和FCM等方法分析其在痘苗病毒载体系统的表达水平。结果显示,全部采用痘苗病毒优势密码子(富含A+T)和全部采用宿主细胞优势密码子(富含G+C),以及部分使用宿主细胞优势密码子的三种绿色荧光蛋白基因都能够有效表达,表达水平相近,表明痘苗病毒载体对目的基因密码子的使用具有很好宽容性。为了探讨这种宽容性的机理,分别利用在胞核内和在胞浆内转录的质粒载体对不同密码子偏性的绿色荧光蛋白基因进行表达分析。结果显示,胞核内转录目的基因的pcDNA3质粒载体能有效表达富含G+C的绿色荧光蛋白基因,不能有效表达富含A+T的绿色荧光蛋白基因,而胞浆内转录目的基因的pSCA质粒载体能同样有效表达上述不同密码子偏性的目的基因。这些结果表明,位于胞浆内的富含A+U的转录产物能够有效表达,细胞核内生成的富含A+U的转录产物可能受核膜屏障或其它核内因素影响而不能有效表达。因此,胞浆内繁殖的特性是痘苗病毒载体具有密码子宽容性的主要原因。此研究为痘苗病毒载体和常用真核表达载体的选择使用提供了重要实验依据。
- 张相民王世峰辛伟邓瑶李仁清闫克夏齐香荣高瑛瑛谭文杰鲁宁孟昕阮力
- 关键词：密码子偏性痘苗病毒载体基因表达
- 表达乙型脑炎病毒抗原的非复制型重组痘苗病毒能在小鼠中诱发免疫保护被引量：2
- 2005年
- 使用2×107PFU乙脑病毒野毒株GSS抗原preM-E-NS1-NS2a的非复制型重组痘苗病毒NTV-JEV免疫3周龄BALB/c小鼠,小鼠体内乙脑病毒特异性抗体滴度1∶71,IgG2a/IgG1为1.5,中和抗体滴度为1∶8,免疫组小鼠产生特异性补体介导的细胞杀伤作用。以10 LD50乙脑P3株病毒对小鼠进行了脑内攻击,NTV-JEV免疫组小鼠存活率为100%,与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2免疫组存活率相同。100 LD50P3株病毒攻击后NTV-JEV免疫组存活率28.6%,与SA14-14-2组免疫效果无明显差别。存活小鼠体内乙脑病毒特异性抗体升高为1∶179,IgG2a/IgG1比值为1.9,中和抗体大于1∶16。以30 LD50GSS株病毒进行攻击后,NTV-JEV免疫组和SA14-14-2组保护率均为8.3%。上述结果表明,NTV-JEV与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2株具有相近的保护力,NTV-JEV不仅可以保护小鼠抵抗同株病毒GSS的攻击,而且可以抵抗异株病毒P3的攻击。
- 王文玲陆振华辛伟李仁清张相民邓瑶陆柔剑梁国栋阮力
- 关键词：乙脑疫苗免疫学
