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小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析被引量：1: 2012年; 目的建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应（PCR）TLR4检测方法，构建标准曲线，并测定小干扰RNA（siRNA）沉默TLR4的效率。方法设计TLR4qPCR扩增引物，以SYBRGreenq PCR mastermix，95℃15min，95℃15S，60℃1min50个循环进行扩增，同时1：4稀释阳性对照，构建标准曲线。以65℃为起点，0．5℃为阶梯逐步增加至95℃，于每个温度点测定荧光强度，获得熔解曲线。Lipofectamine^TM2000介导不同浓度的siRNA（60、80、100nmol/L）转染SW480细胞6h后撤除。分别于24、48h后，使用qPCR检测TLR4mRNA水平表达变化。结果（1）SYBRGreen定量检测TLR4扩增曲线呈典型s型动力学曲线，扩增效率为100．9％，熔解曲线成单峰，熔解温度为81．5℃。（2）siRNA在24h、80nmol/L时，TLR4Ct值为27．72，较未干扰组（25．96）明显增加。（3）琼脂糖凝胶电泳显示转染组（24h、80nmoWL）在PCR扩增28个循环时不能被检出，而阳性对照则扩增条带清晰。结论（1）qPCR检测TLR4方法稳定，结果可靠。（2）siRNA浓度80nmol/L，可对肠癌SW480细胞的TLR424h时的表达水平明显抑制。; 张燕江波张婷茆勇高翔华东; 关键词：肠癌 SIRNA TOLL样受体4 SW480细胞株

协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达水平及其分布特征被引量：1: 2012年; 目的研究协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达及其细胞内亚细胞结构的分布特征。方法分别采用Real-time PCR、Western Blot方法检测B7-H3在三株结肠癌细胞SW620、SW480、DLD-1中mRNA和蛋白质的表达水平;激光共聚焦显微镜观察B7-H3分子在三株结肠癌细胞中的亚细胞定位。结果 SW620、SW480、DLD-1 Real-time PCR的B7-H3 mRNA△Ct值分别为21.11±0.07、21.18±0.39、21.45±0.18,F=1.3497,P=0.309;Western Blot检测B7-H3蛋白的表达水平无明显差别;B7-H3分子细胞核内的表达比例分别为0.462±0.07、0.329±0.039、0.411±0.025。SW480细胞B7H3核内分布比例与另两株细胞有明显差异(P<0.05)。结论不同结肠癌细胞株中B7-H3 mRNA与蛋白的表达水平无明显差异,细胞核内有部分B7-H3分子表达,且不同细胞株之间B7-H3的核内表达有一定差异。; 张婷齐晓薇江波邹士涛华东; 关键词：B7-H3 结肠癌细胞亚细胞定位细胞核

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江波