朱莹
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用抗性互补策略直接克隆染色体上大片段DNA被引量：1
- 2015年
- 目的:利用抗性互补策略提高Red重组介导的体内直接克隆效率。方法:将抗性基因(如cat)拆分为互补的两部分Cma、Cmb(部分与Cma同源),这两部分单独均不具有抗性,仅当融合在一起时才有抗性。首先将Cmb定向整合到染色体上拟克隆区域的一侧,然后将含有Cma的线性质粒载体电转到细胞内进行定向克隆。结果:使用该方法,我们成功地将大肠杆菌DH1基因组上约48 kb的大片段DNA克隆到质粒载体上。结论:该方法可用于大片段DNA的功能研究。
- 杨艳朱莹朱美勤韦炎龙倪孟祥方宏清
- 关键词：RED同源重组直接克隆
- 体内直接克隆大片段DNA的研究进展被引量：1
- 2014年
- 基因组序列的功能分析以及代谢途径的构建改造等都需要克隆目的 DNA。获得大片段DNA序列的方法有构建和筛选基因文库,PCR扩增,体外大片段DNA合成和组装等,但体内重组直接克隆的方法在操作、克隆长片段和应用等方面更具优势。介绍了Red/ET重组介导的大片段DNA体内直接克隆的主要方法及其应用。
- 朱莹倪孟祥方宏清
- 关键词：直接克隆REDET
- 染色体上大片段DNA的直接克隆及移植被引量：1
- 2016年
- 应用Red重组体内直接克隆染色体上大于10 kb的DNA序列非常困难.利用一种抗性拆分-融合策略成功地从供体菌染色体上直接克隆了约50 kb的DNA序列,并将其移植到受体菌的染色体上.首先将抗性基因(如cat)的互补片段cmb定向整合到染色体上拟克隆区域的一侧,然后将含有抗性基因另一互补片段cma的线性质粒载体电转到细胞内进行定向捕获,通过抗性筛选获得克隆.使用该方法,成功地将供体菌DH1-Z基因组上约48kb的大片段DNA捕获至质粒载体上,捕获阳性率达80%.然后,将该质粒转化到受体菌DH36,利用双链断裂促进同源重组策略,替换受体菌染色体上对应区域,一次敲除基因组上4个非必需区,获得重组菌DH40.该方法也可用于微生物天然产物生物合成途径的异源表达、基因组组装和大片段DNA的功能研究.
- 朱莹杨艳邓平平黄勇倪孟祥方宏清
- 关键词：RED同源重组直接克隆
