方璇
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：北京交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法。方法表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及F蛋白的回收率。结果采用IMS成功纯化分子量为145～170 ku区间的二聚体RSV F蛋白,SDS-PAGE分析结果显示F蛋白得到很好的纯化,纯化所得RSV F蛋白浓度为116 mg/L,回收率为41.1%。结论利用IMS可有效地富集和纯化RSV F蛋白。
- 方璇何金生唐亚宁付远辉王小波郑妍鹏
- 关键词：免疫磁化分离
- 抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体的制备及体外鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,以期用于RSV感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法:通过杂交瘤技术制备可特异性识别RSV F的单抗,体外鉴定生物学特性。结果:获得了可分泌抗RSV F蛋白的杂交瘤细胞株F8,体外连续传代培养2个月,能稳定分泌抗体F8,培养上清效价为1∶1000,亲和常数(Ka)为6.8×108L/mol。F8属IgG1型抗体,可特异性识别RSV F1亚单位的AA 205-222。免疫酶法蚀斑减少中和实验证实F8具有体外中和活性及融合抑制活性。结论:获得具有中和活性的抗RSV F蛋白的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。
- 张梅王小波付远辉方璇王鑫张莹何金生
- 关键词：人呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤技术
- 呼吸道合胞病毒感染滴度测定方法的建立与比较被引量：1
- 2010年
- 目的建立稳定的呼吸道合胞病毒（RSV）感染滴度测定的实时荧光定量PCR（Realtime Quantitative PCR，Q-PCR）检测方法和酶免疫斑点法（Enzyme Immunospots，EIS），并与半数定量方法（50％tissue culture infectious doses，TCID50）进行比较。方法分别采用Q-PCR、EIS和TCID50分析RSV感染的细胞和RSV攻毒后小鼠肺脏标本中的病毒滴度。结果RSV感染细胞的上清中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为：Q—PCR和EIS（pfu）的比约为10：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为10：1；RSV攻毒后小鼠肺脏标本中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为，Q—PCR和EIS（pfu）比约为1000：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为5：1。结论成功建立了RSV感染滴度测定的Q-PCR和EIS分析方法，通过与TCID50方法的比较分析，我们认为EIS法分析RSV滴度具有成本低和较高的灵敏度，有较好的应用前景。
- 王小波何金生付远辉郑娴娴方璇
- 关键词：呼吸道合胞病毒滴定分析法聚合酶链反应半数抑制浓度
- 免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒融合蛋白方法的建立
- 目的:人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是造成世界范围内婴幼儿下呼吸道病毒性感染最重要的病原。RSV融合(fusion glycoprotein, F)蛋白编码...
- 方璇
- 关键词：免疫磁珠人呼吸道合胞病毒F蛋白纯化夹心ELISA
- 文献传递
