张云燕
- 作品数：4 被引量：10H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Westernblot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定。结果获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2。间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×105。Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原。结论成功制备ALT1单克隆抗体。
- 李有强尹一兵胥文春张云燕张雪梅尹楠林
- 关键词：单克隆抗体
- 超声微泡造影剂介导pEGFP-N_1质粒转染HGFs的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨超声破坏微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙龈成纤维细胞的可行性、优化转染的条件及转染效率。方法体外原代培养HGFs。以pEGFP-N1质粒为报告基因,微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HGFs。实验组分为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组,超声+微泡+质粒组按不同的转染条件分成亚组。转染48h后倒置荧光显微镜下观察GFP的表达,MTT法检测HGFs活性。结果超声微泡介导pEGFP-N1质粒对HGFs的转染效率明显高于其他实验组(P<0.05)。优化转染条件后,频率300KHz,声强1.5W/cm2,连续波,辐照时间60s,微泡浓度10%,质粒浓度6.67μg/ml时,转染率较高。结论在一定条件下,超声微泡造影剂能够促进外源基因对HGFs的转染。
- 骆书美张云燕钟晓波仲琳
- 关键词：超声学造影剂人牙龈成纤维细胞基因转染
- pEGFP-N_1-BMP_2真核表达载体的构建及其经超声微泡介导转染HPDLFs后的表达被引量：3
- 2010年
- 目的构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,并检测其经超声微泡转基因技术转染人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)后的瞬时表达情况。方法从人胎盘滋养层细胞系中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因人骨形成蛋白-2(hBMP2)基因片段,连接pMD19-T载体并测序正确后与真核荧光表达载体pEGFP-N1连接,酶切鉴定后利用超声微泡转基因技术转染入HPDLFs中,通过荧光显微镜和RT-PCR检测目的基因在HPDLFs中的表达。结果成功克隆人BMP2基因,重组质粒pEGFP-N1-BMP2经PCR及双酶切鉴定均证实hBMP2基因已与pEGFP-N1正确重组。pEGFP-N1-BMP2经超声微泡转染HPDLFs后,通过绿色荧光观察和RT-PCR检测证实hBMP2能够在体外培养的HPDLFs内有效的转录和瞬时表达。结论成功构建pEG-FP-N1-BMP2真核表达载体,通过超声微泡转基因技术成功转染入HPDLFs并得到有效表达,为进一步研究该质粒与超声微泡转基因技术在牙周再生基因治疗中的应用提供实验基础。
- 仲琳钟晓波张云燕骆书美Nameeta Shrestha齐进李春光
- 关键词：牙周再生超声微泡人骨形成蛋白-2增强型绿色荧光蛋白人牙周膜成纤维细胞
- 超声微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙周膜成纤维细胞的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下,介导质粒pEGFP-N1转染人牙周膜成纤维细胞(HP-DLFs)的效率及安全性。方法体外原代培养HPDLFs,以EGFP基因为报告基因,脂质微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HPDLFs。实验组超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成不同亚组,对照组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组和脂质体+质粒组。转染48h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP表达。同时用MTT法检测HPDLFs的活力。结果超声微泡介导的质粒对HPDLFs的转染效率与脂质体介导的质粒转染效率相似,明显高于其他对照组。超声+微泡+质粒组中HPDLFs的活力明显高于脂质体+质粒组。结论在一定条件下,超声微泡能安全、有效地介导外源基因的转染与表达。
- 张云燕李有强骆书美钟晓波王六王志刚
- 关键词：微泡人牙周膜成纤维细胞基因转染
