应革
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究被引量：4
- 2004年
- 目的 在保持生物学活性的前提下 ,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达。方法 从人外周血中分离中性粒细胞 ,提取总RNA ,RT PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列 ,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3 5K上并转化酵母宿主KM71,双层滤膜法筛选高表达株进行补料分批发酵 ,对发酵产物的理化及生物学活性进行初步检测。结果 筛选到一株人乳铁蛋白表达量较高的重组巴氏毕赤酵母p3 5 k 7并对其进行了补料分批发酵。整个发酵历时约 9d ,菌浓吸光度A6 0 0 值最高达到 2 6 0以上 ,重组人乳铁蛋白最高表达量为 115mg L ,是摇瓶培养条件下的 7 6 7倍。结论 成功实现了人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达 ,并对发酵参数的优化进行了初步探索。
- 应革吴淑华王静赵小东陈建明张晓光侯云德
- 关键词：高密度发酵人乳铁蛋白基因表达发酵参数
- 表达流感病毒神经氨酸酶基因的重组腺病毒的构建被引量：8
- 2003年
- 通过RT-PCR方法扩增流感病毒神经氨酸酶基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pTrackCMV,此重组质粒与腺病毒DNA共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。经PCR证实目的基因已整合至腺病毒基因组中,western blot检测到神经氨酸酶的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果表明2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答反应,滴鼻组的免疫效果优于灌胃组。
- 赵小东韩峰王艳杨贵宾应革林勇平王璇吴淑华
- 关键词：流感病毒神经氨酸酶基因重组腺病毒疫苗
- 表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究被引量：8
- 2005年
- 通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,Westernblot结果检测到重组病毒感染293细胞中HA的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶10000和1∶1000。除血清IgG外,还在肺灌洗液中检测到分泌型IgA。滴鼻组的免疫效果强于灌胃组。经小剂量攻毒实验显示,重组腺病毒保护率为100%。该文成功构建了表达流感病毒HA基因的非复制型重组腺病毒,重组病毒免疫小鼠可产生较好的免疫效果。
- 赵小东韩峰应革王璇王艳吴淑华
- 关键词：流行性感冒病毒血凝素重组腺病毒HA基因
- 人乳铁蛋白的重组表达与功能研究
- 人乳铁蛋白(Hlf)拥有广泛而重要的生物学功能,被认为是最具有营养,免疫和治疗作用的自然营养医用蛋白,在治疗药物、防腐剂、营养添加剂等领域有十分广阔的应用前景,可产生巨大的社会和经济效益.由于自然状态下人乳铁蛋白含量稀少...
- 应革
- 关键词：人乳铁蛋白毕赤酵母生物被膜抗病毒
- 文献传递
