孔维霞
- 作品数：14 被引量：32H指数：3
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- 慢病毒表达双报告基因载体系统的构建及病毒制备
- 2011年
- 本研究旨在构建萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,FLUC)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双基因表达的慢病毒载体,并转染特定细胞系(HeLa),观察双基因的表达。采用PCR技术分别扩增FLUC和RFP报告基因,再将报告基因连接到慢病毒表达载体pLenti-Bi-cistronic中,获得具有双报告基因的慢病毒重组质粒pLenti-FLUC-RFP。然后,用脂质体将该慢病毒重组质粒转染293T细胞,收集纯化慢病毒颗粒。最后,测定病毒滴度,并用所获慢病毒感染HeLa细胞,采用荧光显微镜和荧光素酶报告基因检测试剂盒检测RFP和FLUC的表达。结果表明,酶切和测序证明RFP和FLUC基因成功连入目的载体,所构建的pLenti-FLUC-RFP慢病毒重组质粒序列符合预期。经纯化获得的慢病毒滴度为1×107TU/ml。将pLenti-FLUC-RFP转染HeLa细胞系后,在荧光显微镜下可见大量细胞表达RFP,荧光发光检测仪也检测到转染细胞具有较高的荧光素酶活性。结论:本研究成功构建了具有双报告基因的慢病毒重组质粒pLenti-Ⅲ-FLUC-RFP,经纯化获得了高滴度的慢病毒颗粒,该病毒颗粒具有很好的感染活性,为研究间充质干细胞在体内的动态分布奠定了基础。
- 李晨张斌王军孔维霞王瑞平刘婷陈虎
- 关键词：慢病毒
- 小鼠骨实质来源的间充质干细胞调节树突状细胞向破骨细胞分化
- ＜正＞目的:小鼠骨实质来源的间充质干细胞是一类贴近于骨髓造血微环境中（bone marrow microenvironment,BMME）的成体干细胞,研究其对BMME中其它细胞的调控作用可以为造血、免疫等相关领域的研究...
- 朱恒江小霞孔维霞吴英刘元林李秀森张毅毛宁
- 文献传递
- 无血清培养基SYL-SF对间充质干细胞的培养和扩增作用被引量：2
- 2012年
- 目的 探讨新型无血清培养基SYL—SF对脐带间充质干细胞的体外培养和扩增作用。方法机械分离方法获得脐带间充质干细胞，从P1代开始将含小牛血清的原代培养基SYL-NBCS更换为实验组SYL-SF和对照组MSCM-SF两种无血清培养基对细胞进行培养、传代、扩增和维持。利用Alexa Fluor 488 annexin V检测细胞凋亡率，CCK-8法比较传代细胞的增殖效率，并对细胞进行形态、表型、染色体核型和分化能力等方面的检测和评价。结果分离得到的单个脐带问充质干细胞在原代培养基SYL-NBCS中培养8-15d可获得原代（P0）细胞，更换为无血清培养基后，SYL-SF组细胞凋亡率明显低于MSCM-SF组；在细胞传代过程中SYL—SF组细胞增殖能力较强且维持MSCs特异性表面标志和向脂肪、骨、软骨等多向分化的潜能，并且在传代过程中维持正常染色体核型。结论SYL—SF无血清培养基可以对UC-MSCs进行良好地体外扩增和维持。
- 张文成王韫芳常铭洋池木根孔维霞裴雪涛吴祖泽
- 关键词：间质干细胞无血清生物疗法蛋白质类
- 间充质干细胞成骨分化潜能及其对骨片移植的免疫调控
- 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一类能够自我更新，具有多向分化潜能，最早从骨髓分离的成体干细胞。它能够向脂肪、成骨和软骨细胞分化，也可以跨胚层分化，是组织工程的一个理想种子细胞。大...
- 孔维霞
- 关键词：异体移植间充质干细胞免疫调节移植物抗宿主疾病
- 间充质干细胞的免疫调节功能及间充质干细胞在治疗自身免疫疾病中的应用被引量：6
- 2009年
- 间充质干细胞(MSC)是一类可从多类成体组织中分离的能向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞等分化的成体干细胞,是组织工程细胞的一个理想来源。它能够与免疫系统相互作用,抑制T细胞、B细胞和NK细胞的功能,影响DC的活性。输入体内后,MSC可诱导外周免疫耐受并且可迁移到受损组织,抑制促炎症因子表达,促进受损细胞的存活。近年来MSC应用于对移植物抗宿主疾病(GVHD)的治疗,很好的降低了GVHD发生率和进程。MSC的这种免疫调节作用对治疗自身免疫疾病应该有良好的应用前景。本文主要综述MSC的免疫调节机制和MSC对自身免疫疾病的治疗进展。
- 孔维霞江小霞毛宁
- 关键词：间充质干细胞自身免疫疾病免疫调节功能
- 分化后的间充质干细胞调节CD11b+单核细胞分化为破骨细胞
- ＜正＞目的:间充质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,在适宜的条件下可以分化为包括成骨细胞、成脂肪细胞和成软骨细胞等在内的多利组织细胞,间充质干细胞在体外可以高度扩增,具有强大的免疫调控能力和造血支持能力。因此是组...
- 吴英朱恒江小霞孔维霞刘元林李秀森张毅毛宁
- 文献传递
- H109.重组腺病毒载体Ad-hTRX-EGFP的构建及感染人脐带间充质干细胞效率的研究
- 扈江伟王军徐曼苏永锋孔维霞盛红霞张斌陈虎
- 文献传递
- 由复合MSC的PLGA/TCP和MSC组成的制剂及其应用
- 本发明公开了一种由复合MSC的PLGA/TCP和MSC组成的制剂及其应用。该制剂的活性成分是如下单独包装的物质1)和2)：1)由间充质干细胞和聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三钙聚合物复合成的生物材料复合骨片；2)离体的间充质干细胞...
- 毛宁孔维霞张毅李红朱恒江小霞刘元林吴英
- 文献传递
- 由复合MSC的PLGA和MSC组成的制剂及其应用
- 本发明公开了一种由复合MSC的PLGA和MSC组成的制剂及其应用。该制剂的活性成分是如下单独包装的物质1)和2)：1)由间充质干细胞和聚乳酸聚乙醇酸复合成的生物复合骨片；2)离体的间充质干细胞。实验证实：利用物质2)间充...
- 毛宁孔维霞张毅李红朱恒江小霞刘元林吴英
- 文献传递
- 重组腺病毒载体Ad5-hTRX-EGFP的构建及其表达被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在构建并制备人硫氧还蛋白(hTRX)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因腺病毒载体Ad-hTRX-EGFP,感染HEK293细胞,为基因治疗提供实验基础。设计含有NotⅠ和EcoRⅤ酶切位点的引物,PCR扩增hTRX,将扩增产物连接到带有EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP,利用Lipofectamine2000脂质体的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHG lox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP共转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-hTRX-EGFP,并在其中包装扩增病毒,用氯化铯高速梯度离心、纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用流式细胞仪测定感染HEK293细胞的效率,Western blot方法验证细胞表达hTRX蛋白。结果显示,重组腺病毒质粒经PCR和NotⅠ、EcoRⅤ酶切鉴定,证实含有hTRX基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达5.558×1010pfu/ml。病毒成功感染HEK293细胞,MOI=100时,感染效率达92.25%。经Western blot方法验证表明,感染后的HEK293细胞高表达hTRX蛋白。结论:应用细胞内同源重组方法成功构建了含hTRX基因的重组腺病毒载体,制备获得高滴度的病毒,能高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 扈江伟王军徐曼苏永锋孔维霞盛红霞张斌陈虎
- 关键词：人硫氧还蛋白腺病毒载体增强型绿色荧光蛋白
