周珍珍
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抑制HSP70-2基因表达诱导肝癌细胞G_2/M期阻滞的机制研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨HSP70-2在肝癌组织中的表达,以及抑制HSP70-2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制。方法免疫组织化学检测HSP70-2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达,Western blot检测HSP70-2在5种肝癌细胞株中的表达。设计合成针对HSP70-2基因的特异性shRNA,构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2。转染肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测HSP70-2表达及细胞周期相关蛋白p-Cdc2(Tyr15)、Cdc25C、Cdc2和cyclinB1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示,45例肝癌组织中有33例(73.3%)HSP70-2蛋白表达阳性,45例癌旁组织中仅4例(8.9%)表达阳性,表达差异有显著性(P<0.05)。HSP70-2蛋白在HepG2、Bel-7402、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞中的表达明显高于其在L02细胞中的表达。HSP70-2 shRNA1和shRNA2均能有效抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7402中HSP70-2的表达。与control shRNA组相比,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2组HepG2和Bel-7402细胞生长增殖速度均明显减慢,细胞周期表现为处于G2/M期的细胞比例显著增加。Western blot检测发现,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2后肝癌细胞中磷酸化的p-Cdc2(Tyr15)表达增加,Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达显著减少。结论HSP70-2在肝癌中过表达,抑制HSP70-2表达可以显著抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞,其诱导G2/M期阻滞的机制是通过影响Cdc25C-Cdc2/cyclinB1通路来实现的。
- 夏丽敏田德安张琼晏维周珍珍朱倩罗敏张全乐
- 关键词：肝癌RNA干扰细胞周期
- AEG1促进肝癌细胞HepG2分泌细胞因子IL-6、IL-1β的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的研究AEG1能否促进肝癌细胞HepG2分泌细胞因子IL-6、IL-1β,探讨AEG1是否参与改变肿瘤微环境。方法用脂质体稳定转染法分别转染pcDNA3.1(-)-AEG1(AEG1全长质粒)、psilencer 2.0-shAEG1(AEG1干扰质粒)至HepG2细胞,相对应以转染空质粒pcDNA3.1(-)、psilencer 2.0的HepG2细胞为对照组;采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)、Western blotting检测AEG1 mRNA和蛋白表达变化;采用实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞因子IL-6、IL-1β的表达和分泌。结果与转染相应空载体的阴性对照组和未转染的空白对照组相比,分别转染AEG1全长质粒/AEG1干扰质粒后,HepG2细胞中AEG1的蛋白表达明显增高/降低。转染AEG1全长质粒的HepG2细胞中IL-6、IL-1βmRNA均较对照组和空白组明显增强(P均<0.05),细胞培养介质中IL-6、IL-1β蛋白浓度也显著高于对照组(P均<0.05);转染AEG1 shRNA的HepG2细胞中IL-6、IL-1βmRNA均较对照组和空白组降低(P均<0.05),细胞培养介质中IL-6、IL-1β蛋白浓度也低于对照组(P均<0.05)。结论成功构建稳定过表达和沉默AEG1的HepG2细胞,AEG1能调控IL-6、IL-1β的表达和分泌。
- 邓欢周珍珍黄焕军刘静梅刘吉巧兰小勤田德安
- 关键词：肝细胞癌HEPG2IL-6IL-1Β
- 过表达SATB1对人原发性肝癌细胞HepG2增殖的促进作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究核基质结合蛋白SATB1对人原发性肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法脂质体介导pEGFP1-SATB1真核表达全长基因质粒转染人原发性肝癌HepG2细胞,分为实验组(pEGFP1-SATB1)、对照组(pEGFP1空载体)及空白对照组。RT-PCR、Western blot检测转染后SATB1mRNA和蛋白表达变化情况,噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测SATB1全长基因转染对人原发性肝癌HepG2细胞生长、增殖的影响。结果与空白对照组及对照组比较,转染pEGFP1-SATB1后,HepG2中SATB1mRNA和蛋白表达明显增加,细胞生长曲线检测结果表明转导入pEGFP1-SATB1细胞增殖明显加快,细胞数明显增多;流式细胞仪检测结果表明,细胞周期中G0/G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞明显增多。结论 SATB1能明显促进HepG2细胞增殖,其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关。
- 罗敏涂炜刘永健邓欢周珍珍朱倩林海华夏丽敏晏维田德安
- 关键词：SATB1细胞增殖
- 肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响及其相关机制。方法不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变,采用划痕标记荧光传输试验显示缝隙连接细胞通讯功能的变化,采用Western blot法检测连接蛋白32(Cx32)在细胞膜的表达。结果不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,Transwell试验显示细胞侵袭能力较对照组提高,且随TNF-α浓度增加而升高。同时,缝隙连接细胞通讯功能减弱,细胞膜上Cx32的表达减少。结论 TNF-α可能通过影响Cx32在细胞膜的表达及细胞通讯促进人肝癌细胞株SMMC-7721的侵袭能力。
- 朱倩晏维林海华罗敏夏羽佳涂炜周珍珍邓欢田德安
- 关键词：肿瘤坏死因子Α连接蛋白32
- 过表达连接蛋白32对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨过表达连接蛋白32(Cx32)对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响。方法应用Lipo-fectamine 2000将pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒转染至MHCC-97H细胞,G418稳定筛选。采用Western blot法检测Cx32蛋白表达,划痕标记荧光传输实验显示细胞通讯功能的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的改变。结果转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒使得MHCC-97H细胞过表达Cx32蛋白。与正常对照组和转染空质粒组细胞相比,转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒并过表达Cx32的细胞胞间通讯功能增强,细胞侵袭能力减弱。结论 Cx32在人原发性肝癌的侵袭过程中可能起抑制作用。
- 朱倩夏羽佳涂炜罗敏周珍珍晏维林海华邓欢田德安
- 关键词：连接蛋白32肝细胞癌细胞侵袭
- 靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响被引量：3
- 2013年
- 目的构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响。方法针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变。结果靶向MTDH干扰质粒构建成功。与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTMH1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架。
- 周珍珍邓欢黄焕军夏羽佳涂炜何嘉怡田德安
- 关键词：肝细胞癌MTDH小干扰RNAHEPG2
- 缺氧诱导热休克蛋白70-2表达的分子机制被引量：6
- 2009年
- 目的观察缺氧对HepG2细胞中热休克蛋白（HSP）70—2（基因名为HSPA2）表达的影响，探讨缺氧条件下缺氧诱导因子（HIF）-1在转录水平调控HSP702表达的具体机制。方法以物理缺氧法和化学缺氧诱导剂（DFO或COCl2）诱导法分别模拟肿瘤缺氧环境，Western blot检测HIF-1α和HSP70—2蛋白表达的变化，荧光素酶报告基因分析技术检测缺氧对HSPA2基因的激活作用。HIF—1α抑制剂（YC-1）或HIF—1α小干扰RNA（siRNA）处理后检测缺氧HepG2细胞中HSP70—2的表达变化。构建一系列截短和突变的HSPA2基因启动子荧光素酶报告基因质粒，将其与HIF-1α siRNA共转染HepG2细胞，荧光素酶分析技术检测HSPA2启动子活性的变化，寻找HIF-1 在HSPA2启动子上的结合位点。各组间比较用方差分析，两组间比较用t检验。结果缺氧培养6h后，HepG2细胞中HIF-1α和HSP70—2表达增加，其表达量随着缺氧培养时间的延长而逐渐增加（F=77．369，P〈0．01；F=108．854，P〈0．01）。各组分别加终浓度为0、50、100umol／L的化学缺氧诱导剂DFO或终浓度为0、100、200umol／L的CoCl2，培养24h后检测，随着DFO浓度增加，HIF—1α和HSP702蛋白表达逐渐增加（F=443．174，P〈0．01；F=589．238，P〈0．01）；随着CoCl2浓度增加，HIF—1α和HSP70—2蛋白表达也逐渐增加（F=637．724，P〈0.01；F=692．918，P〈0．01）。与常氧培养相比，缺氧培养后HSPA2启动子活性增加7．09倍（t=43．551，P〈0．01）。随着YC—1浓度升高，HIF-1α表达受到明显抑制（F=883．614，P〈0．01），HSP70—2表达水平也相应下降（F=218．112，P〈0．01）。转染HIF-1α siRNA后HIF1α表达受到明显抑制（F=577．130，P〈0．01），HSP702表达水平也相应下降（F=465．598，P〈0．01）。构建系列截短的HSPA2启动子报告基因载体转染HepG2细胞后检测，转染HSPA2（-1114／＋62）LUC和HSPA2（-653／＋62）-LUC细胞的
- 夏丽敏田德安张琼晏维朱倩罗敏周珍珍唐莹张全乐王伟
- 关键词：HSP70热休克蛋白质类缺氧诱导因子1缺氧RNA干扰
- Netrin-1促进肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的作用被引量：1
- 2011年
- 目的初步探讨神经生长因子Netrin-1对人肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的作用及相关机制。方法采用脂质体转染的方法,将Netrin-1的真核表达质粒转染到肝癌细胞HepG2中,Western blot检测Netrin-1的表达;用软琼脂集落试验、悬浮培养模型及流式细胞检测的方法观察肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的特性。结果肝癌细胞HepG2在失巢状态下可以聚集成团生长,并与贴壁生长有相似的凋亡比例。与对照组细胞相比,稳定转染Netrin-1真核质粒的HepG2细胞在软琼脂中形成细胞集落的数量明显增加,在悬浮培养模型中形成细胞团的直径更大,在失粘附状态下的细胞凋亡比例明显降低;磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路的抑制剂LY294002能增加转染细胞在失粘附状态下的凋亡比例。结论肝癌细胞HepG2具有抗失巢凋亡的特性,Netrin-1可以增强HepG2细胞抗失巢凋亡的能力,其机制可能与PI3-K通路相关。
- 林海华晏维田德安黄焕军夏羽佳周珍珍涂炜邓欢廖家智
- 关键词：失巢凋亡NETRIN-1肝癌细胞
- 死亡受体通路在曲霉菌素诱导肝星状细胞凋亡中的作用
- 2008年
- 目的验证曲霉菌素诱导肝星状细胞HSC-T6凋亡的作用,探讨死亡受体通路在该过程中的意义。方法将HSC-T6细胞分为曲霉菌素干预组和空白对照组,用流式细胞术检测HSC-T6的凋亡,免疫组化SABC法检测Fas蛋白的表达,分光光度法检测caspase-8的活性。结果流式细胞术显示,曲霉菌素浓度分别为0.4、0.8、1.2、1.6 mmol/L,作用于干预组HSC-T6细胞1 h后,HSC凋亡指数与对照组相比显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),且随着曲霉菌素浓度增加,凋亡率也相应增高;曲霉菌素以最低有效浓度0.4 mmol/L干预,Fas的表达及caspase-8活性与空白对照组比较均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲霉菌素诱导HSC-T6细胞凋亡具有剂量依赖性,死亡受体通路在该过程中有重要意义。
- 徐倩田德安晏维夏丽敏周珍珍刘萍徐湖波朱倩罗敏
- 关键词：肝星状细胞
- 胆道探查致十二指肠对穿伤、腹膜后结石遗留一例被引量：2
- 2010年
- 目的 研究缺氧对人肝癌细胞HepG2细胞骨架重组的影响及Netrin-1在细胞骨架重组中的作用.方法 通过1%O_2 低氧培养建立人肝癌细胞HepG2物理缺氧模型,观测缺氧对细胞形态的改变.构建针对Netrin-1 mRNA的干扰质粒pshRNA-Netrin-1及阴性对照质粒pGensil-1,并将其转染HepG2细胞,筛选稳定转染细胞株.观测转染pshRNA-Netrin-1质粒前后,鬼笔环肽检测缺氧对肝癌细胞对HepG2细胞骨架重组的影响,细胞迁移实验检测缺氧条件下干扰Netrin-1对细胞迁移能力的影响.同时构建Netrin-1真核表达质粒pGNET1转染HepG2细胞,观测Netrin-1对肝癌细胞骨架重组的作用.结果 低氧培养HepG2细胞胞体变得狭长,细胞连接松散.Netrin-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）.HepG2细胞稳定转染pshRNA-Netrin-1后,Netrin-1 mRNA表达显著下降.抑制率达73.32%±4.12%（P＜0.01）.鬼笔环肽检测F-actin结果 显示,缺氧促进HepG2细胞骨架重组,转染pshRNA-Netrin-1后,缺氧促进HepG2细胞骨架重组受到显著抑制.细胞迁移实验结果 显示,缺氧条件下干扰Netrin-1的表达显著抑制HepG细胞迁移能力（P＜0.05）.转染 pGNET1后,HepG2细胞骨架发生重组.结论 缺氧促进HepG2细胞骨架重组与Netrin-1表达水平升高相关,Netrin-1表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞骨架重组进而促进侵袭转移的机制之一.
- 晏维付妤廖家智田德安周珍珍王伟张全乐陈孝平
- 关键词：NETRIN-1
