刘晓明
- 作品数：17 被引量：38H指数：4
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 原发性胆汁性肝硬化免疫学指标检测的临床意义
- 研究原发性胆汁性肝硬化免疫学指标测定的临床意义。选取32例确诊PBC的住院病人,采用ELISA法检测病人血清中的抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)。间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体(AMA),抗核抗体(ANA),抗平滑肌...
- 唐淑珍刘晓明尤红张福奎王宝恩贾继东
- 关键词：原发性胆汁性肝硬化
- 文献传递
- 腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响被引量：4
- 2007年
- 目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况。方法将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13mRNA及蛋白质表达情况。结果经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P<0.01),而MMP13mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P<0.01)。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达。
- 丛敏刘天会徐雍卢炎唐淑珍刘晓明王宝恩贾继东尤红
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制因子小干扰RNA腺相关病毒肝星状细胞
- 带HBV基因的重组腺相关病毒刺激树突状细胞引起特异性CTL杀伤作用的研究
- 目的研究腺相关病毒(AAV)为载体的含有HBV-S、C或X基因的重组病毒(rAAV-HBV-S、 C、X)通过刺激树突状细胞(DC),产生对HBV感染的靶细胞特异性的缅胞毒杀作用。方法分别构建含有HBV-S、C和X基因的...
- 尤红丛敏王萍刘天会唐淑珍徐雍卢炎刘晓明王宝恩贾继东
- 文献传递
- 人工培养冬虫夏草菌粉对细胞免疫的抑制作用被引量：12
- 1990年
- 本研究就人工培养冬虫夏草菌粉对小鼠细胞的免疫抑制作用进行了体内外观察。虫草菌粉0.6～5mg/ml 均能显著抑制小鼠外周血白细胞吞噬功能、脾淋巴细胞增殖反应、混合淋巴细胞培养以及 LPS 诱导的巨噬细胞 IL-1生成(P<0.05～0.01)。其抑制强度与虫草菌粉剂量成正比例。5mg/ml 虫草菌粉可完全抑制上述细胞免疫反应,而该剂量药物与脾细胞共育5天也不影响细胞的存活率。给同种异体皮肤移植小鼠每日口服虫草菌粉4g/kg,使皮片存活时间(12.7±2.2天)较对照组(8.3±0.7天)显著延长(P<0.01),近似于环抱霉素 A(每日5mg/kg 口服)抑制皮片排异的效果(13±2.9天,P>0.7)。
- 祝希媛史勇刘晓明吴立于惠元徐慧裴世镜
- 关键词：冬虫夏草细胞免疫免疫抑制
- 以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选一段22bp片段,在体外构建为短发夹siRNA (shon hairpin siRNA,shRNA)表达载体后,将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后,于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况,同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低(P＜0．01),感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60％,而感染后90d,TIMP-1蛋白表达几乎下降90％。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因,证实外源基因可长期表达。结论重组病毒rAAV/siPtNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。
- 丛敏王萍刘天会徐雍卢炎唐淑珍刘晓明王宝恩贾继东尤红
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制因子小干扰RNA腺相关病毒肝星状细胞
- 肿瘤病人外周血T淋巴细胞仁形成区嗜银蛋白（Ag—NORs）的测定
- 1999年
- 唐淑珍刘晓明
- 关键词：肿瘤外周血核仁形成区AGNORS
- 腺相关病毒Rep78蛋白抑制乙型肝炎病毒复制的体外研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)Rep78蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用及机制。方法将土拨鼠肝炎病毒(WHV)全基因组DNA从质粒中酶切回收,线状DNA重新连接呈环状。用脂质体Fugene6体外转染至HepG2细胞,同时共同转染含有Rep78的质粒AAVdl52-91。5d后收获细胞DNA,Southernblot检测WHVDNA复制。以含有HBV全长的质粒为模板,PCR法分别扩增出HBV-S、C和X基因全长。以凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测Rep78与HBV-S、C和X的结合。结果Southernblot结果表明,AAV-Rep78可以明显抑制WHV病毒在HepG2细胞中的复制,并呈剂量依赖关系。EMSA结果显示,Rep78蛋白在体外能够与HBV-S、C和X的DNA结合,其中与HBV-C的结合最强而且有剂量依赖关系。此外,这种Rep78蛋白与HBV-CDNA结合可以被特异性的Rep78抗体阻滞,形成超结合带。结论AAV-Rep78可以抑制HBVDNA的复制,其机制可能在于Rep78蛋白结合并抑制了HBV-C基因。
- 刘天会丛敏王萍唐淑珍刘晓明王宝恩贾继东尤红
- 关键词：腺相关病毒乙型肝炎病毒
- 供肾预存结石在肾移植术前与术后的处理方法被引量：1
- 2023年
- 肾移植通常为终末期肾病患者的最终处理方法,因为它更具成本效益,并且能更好地提高患者的生活质量。此外,移植后的生存率远优于血液透析。由于供肾严重短缺,各中心已开始普遍使用扩大标准供者的供肾,方法之一是使用患有肾结石的肾脏。本文旨在阐述供肾预存结石在肾移植中的选择与处理策略及其相关的移植肾结石的处理方法。
- 刘晓明朱一辰
- 关键词：肾移植肾结石活体供者
- 小干扰RNA对肝星状细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的观察化学合成的小干扰RNA（siRNA）转染大鼠肝星状细胞（HSC）-T6后不同时间点，对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的抑制作用，同时筛选高效的siRNA片断。方法对大鼠TIMP-1 mRNA nt161～181、nt190～208、nt208—226、nt226～244及nt445～463化学合成的5对siRNA和1对荧光标记的非特异siRNA（与TIMP-1 mRNA无同源性的FITC标记的21nt siRNA），在阳离子脂质体的介导下将不同浓度的非特异siRNA转染至大鼠HSC-T6后，用流式细胞仪确定最佳转染浓度。提取转染50nmol／L siRNAs后24h，48h和72h细胞蛋白，用Western blot检测TIMP-1蛋白质表达，筛选出抑制效率最高的siRNA，同时确定siRNA转染细胞后的最佳作用时间。结果50nmoL／L siRNAs对HSC-T6有较高的转染效率；5对siRNA中的3对在转染后48h有较强的抑制HSC-T6细胞TIMP-1基因表达的作用，其中抑制作用最强的1对siRNA对TIMP-1表达的抑制作用与对照组相比可增强80％以上，而在转染后72h，其抑制作用基本消失。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达，筛选到的高效阻抑TIMP-1表达的siRNA可构建于病毒载体，以实现长期抑制TIMP-1表达的功效。
- 丛敏王萍刘天会徐雍卢炎唐淑珍刘晓明王宝恩贾继东尤红
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制因子-1小干扰RNA肝星状细胞
- Taqman荧光定量PCR是核酸水平对管家基因GAPDH进行定量的好方法被引量：5
- 2006年
- 目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛（GAPDH）标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRⅠ限制性酶切鉴定确认后，紫外定量并连续稀释10倍作为标准品。分别用Taqman法和SYBR GreenⅠ法于荧光定量PCR仪上制作标准曲线，同时用普通PCR结合琼脂糖凝胶电泳利用Quantity One软件定量并制作标准曲线。结果 Taqman法检出GAPDH的下限为2．0×10^4拷贝，线性范围：2．0×10^4～2．0×10^10拷贝；SYBR GreenⅠ法检出GAPDH的下限为2．0×10^7拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^10拷贝；普通PCR检出GAPDH的下限为2．0×10^6拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^9拷贝。结论 Taqman荧光定量PCR法比SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法的灵敏度高，线性范围宽，是核酸水平对GAPDH定量的好方法。
- 王萍丛敏李忆梅唐淑珍刘晓明王宝恩贾继东尤红
- 关键词：PCRGAPDH荧光定量
