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紫外线和过氧乙酸对腺病毒灭活效果的观察被引量：1: 2009年; 目的:寻找对腺病毒灭活的有效方法,来预防大规模生产腺病毒时所致的生产细胞的污染。方法:采用紫外线照射和不同浓度过氧乙酸的灭活方法灭活腺病毒,并将处理后的病毒加入到正常人胚肾293细胞中培养,观察细胞是否出现病变作为灭活效果判断标准。结果:我们发现一定强度紫外线照射至少2 h以上才能完全灭活腺病毒,过氧乙酸达到1%的浓度和至少作用30 min,才能将完全病毒灭活。结论:紫外线照射2 h以上能有效灭活腺病毒,我们可以用于操作台的腺病毒灭活;1%浓度的过氧乙酸作用30 min以上能有效将腺病毒灭活,我们可以运用于实验室大空间的腺病毒灭活。; 田箐米绪华刘文涛王金蓉张仕琼石刚傅艳平周红魏海燕范春元; 关键词：紫外线过氧乙酸腺病毒灭活

hNET基因重组腺病毒载体构建和体外表达被引量：4: 2008年; 目的以复制缺陷的腺病毒为载体,用细菌内同源重组法构建含有人的去甲肾上腺素转运子(human neurotransmitter transporter,hNET)基因的腺病毒载体。方法利用限制性内切酶KpnⅠ+XbaⅠ从pCMV5质粒中切下目的基因hNET,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,形成重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-hNET,PmeⅠ酶切线性化后,与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组体质粒Ad-hNET,PacⅠ酶切后用脂质体Lipofectamine2000转染HEK293细胞,包装成重组体腺病毒。采用PCR技术和Western Blotting对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有绿色荧光蛋白报告基因检测表达,经过扩增和纯化,测定病毒滴度。结果测序结果证明hNET序列的正确,PCR、PacⅠ酶切电泳和Western Blotting证实腺病毒重组质粒Ad-hNET构建成功。扩增纯化后测定重组病毒Ad-hNET的滴度为1.2×1010pfu/mL。结论成功构建了能表达hNET基因的重组腺病毒载体,为肿瘤的靶向治疗提供前期的研究工作。; 贾志云欧晓红魏海燕邓候富黄蕤王金蓉张仕琼; 关键词：腺病毒载体同源重组

重组hIL-2腺病毒在体外癌细胞中的表达被引量：1: 2000年; 为鉴定已构建的重组hIL 2腺病毒 (AdvIL 2 )在体外的感染和表达活性 ,体外转导人多种癌细胞系 ,通过ELISA法测定所表达IL 2的量 ,MTT法测定所表达IL 2的活性。结果发现AdvIL 2能高效转导癌细胞 ,并检测到有 10ng水平IL 2表达 ,持续时间为 3周左右。; 魏海燕郑常文童晋彭旭东; 关键词：IL-2 癌症基因治疗

腺病毒介导人IL-2基因治疗的抗肿瘤作用及机理分析被引量：4: 2003年; 目的　观察重组人白介素 2腺病毒 (advh IL- 2 )在小鼠肝癌 H2 2中的转染效率、表达时程、体内抗肿瘤作用及其免疫机理。方法　小鼠皮下接种肝癌 H2 2 ,将肿瘤生长至体积为 10 0～ 2 0 0 mm3的荷瘤小鼠随机分组 ,经肿瘤局部注射给药。用 X- gal染色法检测重组腺病毒载体 adv L ac Z的转染效率 ;用 RT- PCR检测人 IL- 2基因的持续表达时间 ;以 H2 2瘤体生长及荷瘤小鼠存活时间评价 advh IL - 2抗肿瘤作用 ;以 51 Cr 4小时释放法测定治疗小鼠脾细胞的 L AK与 CTL 杀伤活性 ,免疫荧光法分析肿瘤组织内 CD4 +与 CD8+ T细胞浸润情况。结果　肿瘤局部单次注射 1× 10 9pfu重组腺病毒 ,可在肿瘤组织中进行有效的转染及表达 ,人 IL- 2基因的表达时间长于 12 d。AdvhIL- 2的抗肿瘤作用具有剂量依赖性 ,与 PBS组比较 ,2× 10 9pfu advh IL- 2可非常明显地抑制 H2 2皮下瘤的生长、延长荷瘤小鼠的生存时间 (P<0 .0 1) ,同时明显增强脾细胞 L AK与 CTL杀伤活性 (P<0 .0 1) ,增加肿瘤组织内CD4 + 与 CD8+ T细胞的浸润。结论　 Advh IL - 2通过介导人 IL - 2基因在小鼠 H 2 2肿瘤组织中的持续表达 ,产生明显的体内抗肿瘤作用。; 杜俊蓉冉胤威林治荣郑常文魏海燕王修杰周良任怡; 关键词：腺病毒基因治疗 IL-2 肝癌

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魏海燕