赖秀蓝
- 作品数：12 被引量：6H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金汕头市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生石油与天然气工程更多>>
- DAZL腺病毒载体的构建及其对人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建高效表达的DAZL重组腺病毒载体系统，观察DAZL基因对人脐带间充质干细胞（HUMSCs）向男性生殖细胞分化的影响。方法1．用Gateway腺病毒系统制备含DAZL及EGFP基因的重组腺病毒pAd-DAZL-EGFP。2．用组织块贴壁法获得HUMSCs，用Ad-EGFP-DAZL感染第3代生长良好的HUMSCs，观察感染效率及细胞生长情况，确定最佳感染复数（MOI）和感染时间。3．通过形态学、反转录（RT）-PCR和免疫荧光鉴定DAZL基因异位表达诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的结果。结果成功构建表达DAZL的腺病毒，病毒滴度为1．0×10^9pfu／mL。最佳的感染条件为：MOI=100，感染时间：8h，该条件下的感染率为（43．00±1．52）％。HUMSCs在感染DAZL重组腺病毒后形态发生了明显的变化，第4—6天由成纤维细胞变成圆形，少数变圆的细胞在2～3周后变成蝌蚪状，阴性对照组及空白对照组细胞则未发生类似变化。RT—PCR和免疫荧光均证实实验组表达精原细胞的标志STELLA（DDPA3）、VASA（DDX4）、c—kit、DAZL和OCT4（POU5F1），阴性对照组及空白对照组则只表达内参基因。结论DAZL重组腺病毒感染HUMSCs后能诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化，证实DAZL基因是精子形成过程中的关键基因。
- 吴扬赖秀蓝唐秋灵陈辉罗梅娟冯学永蔡志伟刘必刚贺谷雨秦山马廉
- 关键词：DAZL人脐带间充质干细胞腺病毒载体生殖细胞
- DAZL基因转染人脐带间充质干细胞体外向男性生殖细胞分化的研究
- 【背景与目的】生殖细胞缺陷所致的男性不育症是世界性难题，目前尚无法通过传统的辅助生殖技术解决，干细胞定向分化是治疗这类疾病的理想途径。我们前期的研究表明人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mes...
- 赖秀蓝
- 关键词：人脐带间充质干细胞男性生殖细胞定向分化
- 文献传递
- 人脐带间充质干细胞与sertoli细胞共培养下向男性生殖细胞分化的研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨用睾丸支持细胞(SCs)模拟的睾丸微环境,通过共培养技术诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的可能性,为男性不育治疗寻求一种新的途径。方法采用差异贴壁法分离、培养、扩增出HUMSCs,从新生昆明小鼠的睾丸中分离培养出SCs,制备SCs饲养层,将HUMSC:s加入SCs饲养层中共培养,显微镜观察诱导前及诱导后第7 d、14 d细胞的形态学变化;RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记DAZL、VASA及Stella的表达。结果 HUMSCs在共培养体系中逐渐失去细小成纤维样的形状,形成类似精原细胞样的圆形细胞菌落,诱导7 d、14 d后,RT-PCR、细胞免疫荧光均可以检测到男性生殖细胞特异性标记VASA、DAZL及Stella的表达。结论在睾丸SCs模拟的睾丸微环境,HUMSCs不仅发生形态学的变化,而且能表达生殖细胞的特异生物学特性,表明在特定的微环境中,细胞与细胞间的相互接触是微环境中控制HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的必不可少的因素。SCs与HUMSCs的直接接触诱导其向男性生殖细胞分化的诱导研究,为迫切需要的男性不育治疗提供了一个新的实验参考系统。
- 谢丽春杨汉华赖秀蓝陈晓东陈业增刘思征马廉
- 关键词：人脐带间充质干细胞男性生殖细胞睾丸支持细胞
- 腺病毒转染MafA诱导人脐带间充质干细胞表达胰腺细胞特异性基因被引量：2
- 2017年
- 背景:人脐带间充质干细胞经化学药物或共培养等方法诱导后胰岛素分泌量低,转染胰腺发育特异性基因诱导干细胞向成熟β细胞分化是近年来的研究热点。目的:探讨MafA基因转染后人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能。方法:腺病毒携带外源性β细胞发育的关键转录因子Maf A(Ad-MafA-EGFP),转染入第3代人脐带间充质干细胞,诱导后7 d观察细胞的形态学变化,应用PCR检测细胞中胰腺细胞特异性基因(glucagon、Pdx1、Nkx2.2)的表达。结果与结论:(1)经Ad-Maf A-EGFP转染后,倒置相差显微镜下观察人脐带间充质干细胞形态未见明显变化;(2)荧光显微镜下观察Ad-MafA-EGFP已进入细胞内;(3)经Ad-MafA-EGFP诱导后,人脐带间充质干细胞中人源性胰腺前体细胞glucagon、Pdx1、Nkx2.2基因表达增高,为人脐带间充质干细胞进一步分化成熟胰腺β细胞提供实验依据。
- 王鸿武倪萍赖秀蓝冯学永林丽敏马廉
- 关键词：脐带胰岛素分泌细胞MAFA
- OCT4各剪切体的表达及功能研究
- 马廉赖秀蓝
- OCT4各剪切体的表达及功能研究
- 目的 了解OCT4 各剪切体在不同细胞中的表达情况并探讨其相关功能.方法 1.RT-PCR、RT-qPCR、Western blot、免疫组织化学法检测OCT4 各剪切体在多种细胞中的表达情况;2.RT-qPCR及Wes...
- 赖秀蓝郑泽鑫黎敬弟周桂池王天有马廉
- 关键词：诱导多能干细胞干性癌变
- DAZL腺病毒载体的构建及其对人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的研究
- 目的 构建高效表达的DAZL重组腺病毒载体系统,观察DAZL基因对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells...
- 赖秀蓝马廉唐秋灵陈辉罗梅娟冯学永蔡志伟刘必刚贺谷雨秦山
- 荧光定量PCR检测恶性转化人脐带间充质干细胞中DNA甲基化转移酶的改变被引量：1
- 2017年
- 背景:根据体外培养的成体干细胞自发恶性转化现象及肿瘤干细胞理论,人脐带间充质干细胞在体外培养过程中可能产生变异,体内移植后可能存在致瘤性风险。因此,建立健全的体外安全性检测程序,将在干细胞临床应用上起积极推动作用。目的:探讨人脐带间充质干细胞致瘤性机制及DNA甲基化转移酶的表达水平。方法:采用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞,利用3-甲基胆蒽促使人脐带间充质干细胞发生恶性转化,通过形态学观察,裸鼠成瘤实验进行验证,成瘤组织进行病理学鉴定、原代细胞培养,荧光定量PCR检测人脐带间充质干细胞与肿瘤细胞DNA甲基化转移酶表达水平的差异。结果与结论:(1)人脐带间充质干细胞经3-甲基胆蒽处理后形成恶性转化细胞,呈恶性生长,细胞核型呈非整数倍体改变,注入裸鼠体内后能形成恶性肿物;(2)经荧光定量PCR检测,恶性转化后肿瘤细胞(实验组)相比二甲基亚砜培养人脐带间充质干细胞(对照组),其DNA甲基化转移酶的基因表达量明显增高;(3)结果表明,人脐带间充质干细胞在一定条件下能发生恶性转化,包括形态学变化及表观遗传学层面改变,DNA甲基化转移酶可作为预防干细胞移植后成瘤的进一步研究方向。
- 陈业增唐秋灵陈秋蓉赖秀蓝邱晓燕郑泽鑫李伟中
- 关键词：脐带间质干细胞干细胞人脐带间充质干细胞恶性转化
- β-Catenin及Gli1在急性淋巴细胞白血病中的功能研究
- 目的：wnt/β-catenin及hedgehog/gli1通路是两条干细胞自我更新通路,日前缺乏干细胞自我更新通路与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的相关性及通路间是否可能存在交联致病作用的研究。本研究将检测不同状态时...
- 吴丹赖秀蓝马廉
- 关键词：急性淋巴细胞白血病白血病干细胞骨髓单个核细胞BETA-CATENINGLI1MRD
- 人脐带间充质干细胞源诱导多能干细胞分化为男性生殖细胞的潜能
- 赖秀蓝马廉
