谭老喜 作品数:4 被引量:2 H指数:1 供职机构: 海南大学环境与植物保护学院 更多>> 发文基金: 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价 2013年 为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制,本文报道利用Make Your Own"Mate&Plate" Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA,采用SMART法反转录合成双链cDNA,经靳,酶切并去除短片段之后,与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接,利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中,获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2.0X10。的初级文库,检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700—2000bp,文库重组率为87.5%。结果表明,该文库质量较好,可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验,本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。 谭老喜 张雨良 周朋 章绍延 王健华 张秀春 刘志昕关键词:香蕉束顶病毒 香蕉叶片 香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备 2012年 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。 谭老喜 王洪星 张雨良 王健华 章绍延 周朋 余乃通 刘志昕关键词:原核表达 抗血清制备 BBTV DNA5编码蛋白与寄主互作因子的筛选及初步鉴定 香蕉束顶病(Banana bunchy top disease,BBTD)是香蕉重要的毁灭性病害之一,对世界香蕉生产构成普遍威胁。引起该病的病原是香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV),... 谭老喜关键词:香蕉束顶病毒 酵母双杂交 蛋白质相互作用 文献传递 辣椒环斑病毒提纯及抗血清制备 被引量:2 2013年 为获得高效、灵敏的辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)多克隆抗体,通过差速离心、密度梯度离心等方法首次对辣椒环斑病毒进行了分离纯化,并将获得的高纯度病毒粒子用于免疫新西兰大白兔,制备了该病毒的多克隆抗血清。获得的抗血清经间接法酶联免疫吸附测定(ID-ELISA),效价高达1∶125 000,且特异性高,与黄灯笼辣椒中另一种亲缘关系很近的同属病毒辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)不发生血清交叉反应、可有效鉴别这2种Potyvirus病毒。获得的抗血清可用于ChiRSV的检测及后续实验,最适工作浓度在1∶5 000~1∶25 000之间。 章绍延 王健华 谭老喜 周朋 张雨良 刘志昕关键词:提纯 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定