王光兰
- 作品数：12 被引量：67H指数：6
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院病理生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省卫生厅重点实验室科研课题吉林省科技厅科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 20(S)-人参皂苷Rg3诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的机制被引量：22
- 2008年
- 目的:探讨20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)诱导人大细胞肺癌细胞NCI-H460凋亡及其机制。方法:MTT法测定NCI-H460细胞的增殖,依据其半数抑制浓度(IC50)将SPG-Rg3实验组分为25、50及100mg·L-1组,并设空白对照组。采用AO/EB荧光双染、免疫细胞化学染色、Rhodamine 123摄取法及Fluo-3/AM染色分别观察NCI-H460细胞的凋亡、Bcl-2及Bax蛋白的表达量、线粒体跨膜电位及细胞内游离钙离子浓度。结果:SPG-Rg3能抑制NCI-H460的生长,抑制率与浓度呈正相关(r=0.764,P<0.05),其IC50值为47.97mg·L-1;SPG-Rg3组NCI-H460细胞呈现明显凋亡改变;SPG-Rg3100mg·L-1组细胞内Bcl-2蛋白的表达量明显低于空白对照组(P<0.01);SPG-Rg3各浓度组细胞Bax蛋白的表达量均明显高于对照组(P<0.001),并随浓度的增大而增加(P<0.01);各浓度组细胞内Bax/Bcl-2比值均高于对照组,细胞内线粒体跨膜电位则均低于对照组(P<0.01),并随药物作用浓度的增加而减少,组间比较差异有显著性(P<0.01);各组细胞内游离钙离子浓度明显高于对照组(P<0.01)。结论:SPG-Rg3能够明显抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡。其作用机制可能是SPG-Rg3促进细胞内Bax蛋白的表达并增加Bax/Bcl-2比值,降低线粒体跨膜电位,提高细胞内游离钙离子浓度,最终经线粒体通路诱导细胞凋亡。
- 王光兰崔俊生王心蕊石博高静倪劲松
- 关键词：人参皂甙肺肿瘤钙离子线粒体跨膜电位凋亡相关因子
- 20(S)-人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用被引量：13
- 2008年
- 目的：探讨20（S）-人参皂苷Rg3（SPG-Rg3）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法：人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为SPG-Rg3实验组及空白对照组。采用MTT法观察SPG-Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用，并计算出IC50，依据IC50值确定SPG-Rg3的有效浓度；流式细胞术检测SPG-Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化；AO／EB双染从形态学上观察SPG-Rg3对MCF-7细胞凋亡的作用；免疫细胞化学染色和RT-PCR技术分别从蛋白水平和分子水平上检测SPG-Rg3对MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其与caspase-8基因的关系。结果：SPG-Rg3 IC50为（155．70±0．71）mg·L^-1,当SPG-Rg3浓度在37．5～600．0mg·L^-1时，MCF-7细胞的生长抑制率随SPG-Rg3浓度的增加而增大，与对照组比较，细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05）；MCF-7细胞的生长周期也发生变化，S期细胞数增加，明显高于对照组（P〈0．01），G2／M期细胞数则明显少于对照组（P〈0．01）；并且在G1峰前出现明显的凋亡峰，凋亡细胞数增加。形态学上观察到SPG-Rg3（150mg·L^-1）实验组细胞大部分核着黄色荧光或橘红色荧光，形态呈固缩状、圆珠状或新月形，呈现明显的凋亡改变；caspase-8免疫细胞化学染色可见，对照组MCF-7细胞caspase-8蛋白不表达，SPG-Rg3实验组则呈强表达，两组细胞HSCORE得分为1．894±0．027及2．869±0．043，两组比较差异有显著性（P〈0．01）；提取细胞mRNA并设计caspase-8引物进行RT-PCR，SPG-Rg3实验组细胞caspase-8大量表达，对照组细胞无表达。结论：SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡，其机制可能与其活化caspase-8作用有关。
- 陈迪倪劲松王心蕊田阔王光兰吴稼祥
- 关键词：凋亡细胞MCF-7CASPASE-8
- IL-1β诱导肾小管上皮细胞转分化及其与细胞骨架的关系
- 肾小管间质纤维化(RIF)是多种原发和继发慢性肾脏疾病(包括慢性移植肾肾病)发展至终末期的共同表现。肾小管上皮细胞进行上皮-间充质转分化(epithelial- mesenchymal transition,EMT)形成...
- 王光兰
- 关键词：白介素1Β转化生长因子-Β1转分化细胞骨架
- 文献传递
- 大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养和鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的建立较好的大鼠近端肾小管上皮细胞原代培养模型。方法无菌取Wistar大鼠肾脏,取皮质剪碎,经Ⅰ型胶原酶消化和45%Percoll连续密度梯度离心进行纯化,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基原代培养并传代,观察细胞形态并以免疫细胞化学染色及酶化学染色鉴定。结果培养4～5d细胞融合成单层,呈典型的鹅卵石样,细胞角蛋白18及碱性磷酸酶染色均呈阳性,细胞可传2～3代。结论此法可在短期获得数量较多、重复性好的近端肾小管上皮细胞,为体外研究肾小管细胞的病变提供了实验平台。
- 王光兰陈爽张丽红范颖石英爱孙华君刘晓会吴珊
- 关键词：近端肾小管上皮细胞原代培养
- RNA干扰端粒酶活性对HeLa细胞生物学行为的影响
- 2010年
- 目的观察RNA干扰（RNAi）体外培养的HeLa细胞端粒酶催化亚单位（hTERT）对HeLa细胞生物学行为的影响，进一步探讨端粒酶活性与肿瘤细胞恶性生物学行为的相关性。方法体外转录法设计合成4条针对hTERT基因的shRNA，脂质体转染HeLa细胞后经免疫荧光染色和端粒重复序列扩增一酶联免疫法（TRAP—ELISA）测定端粒酶活性，筛选出端粒酶沉默效果最佳片段即B链shRNA。以B链shRNA转染HeI。a细胞为实验组，转染无关siRNA的HeLa细胞为对照组，显微镜下观察细胞在纤维黏连蛋白（FN）上的铺展；CCK一8细胞计数试剂盒检测细胞在FN上黏附；划痕实验评价细胞迁移；Boyden小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果铺展实验显示细胞接种到FN上30min时，对照组铺展细胞的比率为（31．3±7．9）％，而实验组铺展细胞的比率仅为（5．6±2．3）％，两组差异有统计学意义（P〈0．01）；2h后对照组和实验组铺展细胞的比率分别为（79．4±4．8）％和（26．3±6．1）％，两组差异仍有统计学意义（P〈0．01）；24h后两组所有细胞几乎均呈铺展状态。细胞黏附实验显示细胞在FN上黏附30rain时对照组细胞黏附率为（83．7±5．4）％，而实验组的细胞黏附率为（67．2±2．8）％，明显低于对照组（P〈0．05）。划痕实验检测细胞的迁移能力显示实验组细胞24h迁移率为（27．1±6．2）％，明显低于对照组（58．7±15．0）％。Boyden小室侵袭实验显示在Matrigel胶上培养4h后，实验组和对照组侵袭的细胞数分别为75．7±14．5和165．1±11．0，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论降低体外培养HeLa细胞的端粒酶活性使细胞的生物学特性发生改变，表现为减低了HeLa细胞的恶性生物学行为。
- 石英爱赵强张丽红王光兰于晓霞李玉林吴珊
- 关键词：HELA细胞RNA小分子干扰
- 羟基喜树碱对人前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响被引量：6
- 2010年
- 目的观察羟基喜树碱(HCPT)对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪(FCM)及激光共聚焦显微镜(CLSM)检测细胞增殖与凋亡变化。结果HCPT作用后PC-3m生长明显受抑,且呈时间-浓度依赖性;在FCM及CLSM上可见凋亡率增加。结论HCPT体外能有效抑制前列腺癌细胞株生长;但其作用机制目前尚需进一步研究。
- 金光虎陈爽杨丽王光兰孔祥波
- 关键词：羟基喜树碱前列腺癌凋亡化疗
- 20(S)-人参皂甙Rg3诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的研究被引量：13
- 2008年
- 目的探讨20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)对宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察SPG-Rg3对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察SPG-Rg3作用后,Hela细胞之细胞周期的变化;AO/EB双染从形态学上观察SPG-Rg3对Hela细胞凋亡的作用。结果经SPG-Rg3作用后,Hela细胞的生长受到明显的抑制(P<0.05),S期细胞数增加,G2/M期细胞数减少(P<0.01),凋亡细胞数增加。结论SPG-Rg3可以诱导宫颈癌Hela细胞发生凋亡,可作为治疗宫颈癌的一种新途径。
- 陈迪崔俊生刘学峡孟召祥王光兰倪劲松
- 关键词：人参皂苷宫颈癌HELA凋亡
- 沉默HeLa细胞端粒酶活性对其在裸鼠体内移植瘤生长的影响被引量：1
- 2009年
- 目的沉默HeLa细胞人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因、抑制细胞端粒酶活性,观察细胞生长状态和其对裸鼠体内移植接种成瘤能力的影响。方法RNAi技术,脂质体转染,筛选沉默hTERT基因稳定转染细胞株和无干扰效果的对照细胞株,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)测定所筛选的细胞株端粒酶活性;进一步绘制各细胞株的生长曲线;裸鼠移植接种实验观察各株细胞在裸鼠体内成瘤能力。结果成功获得稳定转染具有沉默hTERT基因,端粒酶活性明显降低的实验组细胞株2个即T1,T2,同时获得对照细胞株1个(N1),还以无转染的HeLa细胞为亲本对照。细胞生长曲线显示与相应的对照组相比,实验组细胞(T1,T2)生长速度明显减慢(P<0.05)。裸鼠体内成瘤实验结果显示实验组和对照组均有皮下肿瘤形成,移植接种20天后,处死裸鼠取出肿瘤称量结果显示对照组形成的实体肿瘤平均重量分别为:0.057 7±0.034 9 g和0.054 4±0.033 5 g,而实验组T1和T2组肿瘤重量明显减轻(P<0.05),仅分别为:0.024 5±0.010 9 g和0.027 2±0.007 5 g。结论沉默Hela细胞hTERT基因降低肿瘤细胞的端粒酶活性,使细胞的体外增殖速度减慢,在裸鼠体内皮下成瘤能力受到明显抑制。
- 石英爱赵强张海英张丽红王光兰陈爽王勇
- 关键词：端粒酶HTERTRNA干涉裸鼠
- 改良的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法
- 2010年
- 目的 建立纯度高、操作简便的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法.方法 Wistar大鼠无菌取肾前先心脏抽血替代原位肾脏灌注,分离肾皮质,经Ⅰ型胶原酶消化后用45%Percoll分离液制备细胞悬液直接连续密度梯度离心.所得细胞用含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基原代培养并传代,根据细胞形态、细胞角蛋白18（CK18）和水通道蛋白1（AQP1）免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色进行鉴定.结果 此简化方法获得的肾小管细胞中肾小球掺杂明显减少,培养4～5 d后细胞融合长满,呈典型上皮样细胞的鹅卵石状,其CK18、AQP1免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色几乎均呈阳性,证实所培养细胞为近端肾小管上皮细胞.结论 改良后的分离纯化方法可获得大量高纯度近端肾小管上皮细胞,操作简便.
- 王光兰陈爽张丽红范颖吴珊
- 关键词：上皮细胞细胞分离
- TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察TGF-β1在诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的调节作用。方法选择正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E,经TGF-β1(15μg/L)体外诱导3天,RT-PCR检测细胞α-平滑肌动蛋白(-αSMA)评价细胞的转分化状态,观察细胞形态,同时检测细胞骨架成分-βactin、-αtubulin mRNA的表达;免疫荧光染色观察上述细胞骨架蛋白在细胞内的排列。结果培养的NRK52E细胞经TGF-β1体外诱导3天后,细胞中-αSMA mRNA的表达水平明显增多,高于相应的对照组细胞(P<0.001),说明NRK52E上皮细胞出现了表型转化,此时培养细胞的形态也发生了改变,由典型的鹅卵石样变为成纤维细胞样,并有多个突起;细胞骨架蛋白-βactin mRNA的表达也明显增多(P<0.05);β-actin蛋白的排列也发生了改变,其在胞膜下形成的厚的板样结构消失,转而在胞浆中形成粗大的束状应力纤维,沿细胞长轴纵行排列,此外,-βactin尚在某些细胞边缘形成了片层样伪足和丝状伪足。微管成分-tαubulin mRNA的表达和分布与对照组比较无明显不同。结论TGF-β1能够诱导体外培养的NRK52E细胞转分化,在此过程中细胞形态发生了改变,骨架蛋白-βactin的表达增多并发生了重建,同时骨架蛋白-αtubulin未见明显变化。
- 王光兰王心蕊陈爽刘晓会张丽红孙华君石英爱吴珊
- 关键词：转化生长因子TGF-Β1转分化Α-SMAΒ-ACTINΑ-TUBULIN
