杨云秀
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金温州市科技局资助项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。
- 杨云秀胡孙宽叶星照白永恒王斯璐刘彪王本泉陈必成陈宗静
- 关键词：曲古抑菌素A胰腺癌NOTCH通路
- 改良通用茎环引物筛查和定量检测微小RNA方法的建立被引量：9
- 2011年
- 目的 建立可同时筛选和定量检测成熟型miR的荧光定量PCR方法.方法 改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,以建立SYBR Green PCR筛选和定量检测miR的方法（简称“改良通用茎环引物miR法”）.同时,采用10倍梯度稀释的miR-155标准品cDNA（1～109拷贝/μl）评价其灵敏度；采用熔解曲线评价其检测miR-155的特异性；通过对2×105、2×106、2×107拷贝/μl的miR-155标准品cDNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值（Ct）的变异系数（CV）评价其精密度；并与传统茎环法进行比较,计算实验所用时间和引物成本.然后,采用改良通用茎环引物miR法对植物血凝素（PHA）刺激培养0、16、24、48、72 h的人外周血T淋巴细胞内miR进行筛选（87个靶miR,经PubMed检索可能与免疫功能相关）,并用以进行miR定量检测分析.结果 建立的改良通用茎环引物法的最低检测限为103拷贝/μl的miR-155 cDNA标准品；熔解曲线于80℃呈单峰,证实为针对miR-155的特异性扩增；其批内重复实验的精密度为CV＜2.5％.优化后的通用引物方法与传统方法相比较,节约引物约75％（1 917 bp比7 851 bp）,节省逆转录时间约120min（85 min比205 min）.用改良通用茎环引物法筛选T淋巴细胞中87个miR,85个miR在PHA刺激前、后的Ct无变化,而miR-150和miR-155表达量在T淋巴细胞激活前后分别发生超过10倍下降（72 h）和8倍的升高（48 h）,且差异有统计学意义（Z=-2.023,P=0.043;Z=-2.032,P=0.042）.结论 建立的改良通用茎环引物miR法具有快速、重复性好、灵敏、节约引物用量和实验时间的优点,可用于T淋巴细胞的miR筛查和定量检测.
- 陈必成王斯璐白永恒杨云秀蔡勇夏鹏郑少玲杨亦荣
- 关键词：微小RNAST淋巴细胞聚合酶链反应
- 浙南地区416名肾移植受者KIR基因多态性分析
- 【目的】分析浙江南部地区同种异体肾移植受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性的分布情况。【方法】采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测浙江南部地区无血缘关系的416名汉族肾移植受者KIR基因型,...
- 吴琦白永恒陈必成潘晓东张岩杨云秀夏鹏郑少玲杨亦荣
- 浙南地区416名肾移植受者KIR基因多态性分析
- 目的分析浙江南部地区同种异体肾移植受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性的分布情况。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测浙江南部地区无血缘关系的416名汉族肾移植受者KIR基因型,并同其他...
- 吴琦白永恒陈必成潘晓东张岩杨云秀夏鹏郑少玲杨亦荣
- 关键词：肾移植多态性
- 文献传递
- 曲古抑菌素A诱导胰腺癌细胞株凋亡和Notch信号通路改变的研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究曲古抑菌素A（TrichostatinA，TSA）干预对胰腺癌细胞株PANC．1凋亡及相关基因表达的影响，探讨其作用机制。方法采用0．1～0．4μmol／L不同浓度TSA处理胰腺癌细胞。四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测各组细胞的存活率，通过Hoechst33258染色直接观察细胞凋亡。实时荧光定量PCR（1iT-qPCR）方法检测包括Notch信号通路相关的基因、肿瘤增殖相关基因eat2和肿瘤转移相关基因cytohesin1、2、3、4的表达。蛋白质印迹法检测细胞caspase-3、bel-2、bax以及Notch-1的胞内活性形式NICD蛋白表达。结果TSA对PANC-1的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性，0．1、0．2、0．4μmol／LTSA作用PANC-124h后存活率分别为72％、58％和39％。显微镜观察发现随着TSA浓度增加和作用时间延长，PANC一1细胞死亡逐渐增加，Hoechst33258染色可见凋亡典型特征的PANC-1细胞比例增加。TSA作用PANC-1后，蛋白质印迹法结果显示caspase-3、bax以及NICD蛋白表达增加，而bcl-2蛋白表达下降。qRT-PCR结果显示Notch通路中相关基因numb、hes6mRNA表达升高，gcn512、d113mRNA表达下降（P〈0．05），而NotchlmRNA表达没有变化。肿瘤增殖相关基因eaf2以及肿瘤转移相关基因cytohesinmRNA表达未发现有变化（P〉0．05）。结论TSA可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡，且呈剂量依赖性。Notch通路相关基因可能参与了TSA诱导细胞凋亡的过程。
- 陈宗静杨云秀吕万治白永恒张行刘彪王本泉梁勇郑建建陈必成
- 关键词：胰腺肿瘤NOTCH曲古抑菌素A
- 建立筛查和定量检测微小RNA的通用茎环引物方法
- 陈必成王斯璐白永恒杨云秀蔡勇夏鹏郑少玲杨亦荣
- 选择性环氧化酶2抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法 NS-398 25,50和100μmol·L-1作用于AGS细胞0～48 h,用CCK-8法检测细胞存活率。NS-398 50μmol·L-1作用于AGS细胞48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因的表达,Western印迹法检测Notch胞内结构域(NICD)及下游靶基因NF-κB和毛蛋白和断裂1增强子(Hes-1)蛋白表达。结果 NS-398 25,50和100μmol·L-1能抑制胃癌细胞AGS增殖,并呈时间(r时间=-1.00,P=0.003,50μmol·L-1)和浓度(r浓度=-0.999,P=0.027,48 h)依赖性。NS-39850μmol·L-1作用48 h,AGS细胞凋亡率为(20.1±3.5)%,比正常对照组(3.5±1.4)%明显增加(P<0.05);Notch信号通路受体Notch1和Notch2及Notch信号通路配体δ样1(DLL1)和锯齿状1(JAG1)mRNA表达无明显变化,Notch下游靶基因Hes-1和NF-κB mRNA表达较正常对照组明显减少(P<0.05);NICD,Hes-1和NF-κB蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过抑制Notch信号途径抑制胃癌细胞AGS增殖。
- 胡孙宽周琴林铁素杨云秀潘钰婷陈必成金嵘
- 关键词：环氧化酶2抑制剂NS-398细胞增殖胃肿瘤
- 结直肠癌患者血浆中miR-221的临床价值
- 2012年
- 目的:探究结直肠癌(CRC)患者血浆中miR-221的临床价值。方法:收集60例正常健康体检志愿者(对照组),80例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有入选者均进行血浆miR-221实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测。结果:(1)血浆miR-221含量在CRC组织较对照组表达明显升高(P<0.001),并随着duke分期的发展呈现递增的趋势(P<0.01)。(2)患者入院后均符合手术治疗条件,并于术后第7天复查miR-221含量,发现较治疗前明显减低(P<0.01)。3.对入院时CRC患者根据血浆miR-221相对值进行分组,miR-221高值组术后2年内发生癌复发的发生率高于低值组(P<0.001)。结论:血浆miR-221的测定有助于CRC的诊断,并对病情的估计和预后的判断有一定的帮助。
- 郑建建杨云秀郭勇俞富军洪炜龙张行陈必成
- 关键词：结直肠癌MIR-221实时荧光定量聚合酶链反应
- 曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响
- 目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol·L培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC。TSA 0.4μmol·LPANC-1培养...
- 杨云秀胡孙宽叶星照白永恒王斯璐刘彪王本泉陈必成陈宗静
- 关键词：曲古抑菌素A胰腺癌NOTCH通路
- 文献传递
