朱明星 作品数:53 被引量:142 H指数:6 供职机构: 宁夏医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 宁夏回族自治区教育厅基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
重组蛋白P29对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织TGF-β/Smad信号通路的影响 被引量:2 2019年 目的观察重组蛋白P29 (r P29)对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的作用。方法36只雌性BALB/c小鼠随机分为r P29免疫组(r P29组)、佐剂组、 PBS组,每组12只。r P29组小鼠皮下注射r P29蛋白(10μg/只,与等体积弗氏佐剂乳化),第2和4周各加强免疫1次;佐剂组、 PBS组仅注射相应的佐剂或PBS。末次免疫后2周, 3组小鼠均腹腔接种细粒棘球蚴原头节(1 500个/只)进行攻击感染。感染后12周,剖杀小鼠,分离肝脏组织,提取肝脏组织mRNA,实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中TGF-β1基因的相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测小鼠肝脏组织中TGF-β/Smad信号通路下游相关蛋白TGFβ-RI、 TGFβ-RⅡ、 p-Smad2,3、 Smad4、 Smad7的表达水平。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,佐剂组、 PBS组和r P29组小鼠肝脏组织中的TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.98±0.42、 1.71±0.29和1.24±0.56, r P29组低于PBS组(P <0.01),高于佐剂组,但无统计学意义。Western blotting检测结果显示, r P29组小鼠肝脏组织TGF-β1蛋白表达灰度值为372.04±0.01,低于PBS组(673.02±0.06),高于佐剂组(213.69±0.31)。小鼠肝脏组织TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的检测结果显示, r P29组TGF-β-RI、 TGF-β-RⅡ、 p-Smad 2,3、 Smad 4的灰度值分别为357.59±0.83、 289.07±0.21、 204.06±0.19、 396.11±0.01,低于PBS组(496.89±0.09、 378.41±0.01、428.11±0.29、 566.95±0.21),高于佐剂组(171.99±0.82、 185.77±0.09、 128.09±0.08、 205.87±0.59)。r P29免疫组Smad 7蛋白灰度值为278.89±0.12,高于PBS组(142.32±0.07),低于佐剂组(384.17±0.51)。结论r P29能够降低细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平;下调TGF-β/Smad下游信号通路相关蛋白TGF-β-RⅠ、 TGF-β-RⅡ、 p-Smad 2,3和Smad 4的表达,上调Smad 7的表达。 马锐 刘成 徐士梅 朱明星 赵嘉庆 万巧凤 朱佳佳 赵巍关键词:细粒棘球蚴 转化生长因子Β1 TGF-Β/SMAD信号通路 天蚕素A-马盖宁杂合肽对小鼠小肠黏膜结构、小肠黏膜免疫功能和肠道菌群的影响 被引量:3 2014年 本试验旨在研究天蚕素A-马盖宁杂合肽对小鼠小肠黏膜结构、黏膜免疫功能和肠道菌群的影响。选取18只健康且体重相近的BALB/c小鼠随机分成3组:对照组(生理盐水0.75 m L/d灌胃)、低剂量杂合肽组(0.26 mg/m L的杂合肽0.75 m L/d灌胃)、高剂量杂合肽组(0.52 mg/m L的杂合肽0.75 m L/d灌胃)。试验期为6周。结果表明:1)2个杂合肽组十二指肠绒毛长度均显著大于对照组(P<0.05),各段小肠的隐窝深度均显著低于对照组(P<0.05),各段小肠绒毛长度/隐窝深度均显著高于对照组(P<0.05)。2)与对照组相比,2个杂合肽组各段小肠黏膜内免疫球蛋白A阳性表达水平均显著升高(P<0.05)。3)2个杂合肽组小肠黏膜内白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)及IL-4含量均显著高于对照组(P<0.05),而IFN-γ/IL-4各组之间差异不显著(P>0.05)。4)2个杂合肽组盲肠内容物中的大肠杆菌数量均显著低于对照组(P<0.05),双歧杆菌与乳酸杆菌数量均显著高于对照组(P<0.05)。由此得出,天蚕素A-马盖宁杂合肽灌胃能改善机体小肠黏膜结构;可促进免疫球蛋白A的表达来提高小肠黏膜免疫防御功能;可促进IL-2及IFN-γ的分泌来提高肠道细胞免疫水平,促进IL-4的分泌以提高肠道体液免疫水平并能够保持辅助性T细胞(Th)1/Th2的平衡状态;可有效降低肠道致病菌大肠杆菌的数量并显著增加肠道益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的数量。 杨田田 于龙魅 刘二强 陈香君 朱明星 王秀青关键词:小鼠 小肠黏膜结构 黏膜免疫 肠道菌群 细粒棘球绦虫原头节抗原分子Eg-08002的克隆、表达及免疫反应性分析 被引量:2 2017年 目的筛选细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)原头节抗原分子,并进行克隆、表达及免疫反应性分析。方法在对细粒棘球绦虫六钩蚴和原头节阶段表达的转录组测序数据进行差异分析的基础上,筛选出原头节阶段特异性表达的抗原分子。PCR扩增后克隆至p ET28a载体,构建原核表达载体pET28a-Eg-08002,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,抗His标签镍亲和层析柱纯化重组蛋白rEg-08002,快速免染聚丙烯酰胺电泳分析表达产物;蛋白质印迹(Western blotting)分析rEg-08002的免疫反应性。ELISA分析重组蛋白rEg-08002与细粒棘球蚴病患者血清和健康人血清的免疫反应性。结果筛选出了原头节中高表达的抗原分子Eg-08002,大小为612 bp,构建原核表达载体pET28a-Eg-08002。快速免染聚丙烯酰胺电泳和Western blotting分析结果显示重组蛋白rEg-08002在E.coli JM109中获得高效表达,在相对分子质量(Mr)约为23 000处可见重组蛋白rEg-08002条带,主要以包涵体形式存在,r Eg-08002可被感染棘球蚴的小鼠血清识别。ELISA分析结果表明,12份细粒棘球蚴病患者血清和12份健康人血清的平均吸光度(A450)值分别为1.245±0.265和0.469±0.006,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出了原头节中高表达的抗原分子Eg-08002,获得的重组蛋白rEg-08002具有较好的免疫反应性。 杨慧 赵殷奇 李子华 赵嘉庆 王浩 王娅娜 朱明星 赵巍关键词:细粒棘球蚴 克隆 免疫反应性 细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导下差异表达microRNA的筛选及分析 2021年 目的对细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导小鼠差异表达的microRNA进行筛选和分析,以期为rEg.P29免疫前后宿主免疫细胞的分化研究提供线索。方法将6-8周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组,rEg.P29免疫组和对照组,每组12只。rEg.P29免疫组于小鼠腹部多点免疫重组蛋白100μl(含rEg.P2910μg),共免疫2次,第1次免疫2周后进行第2次免疫。提取第2周(第1次免疫后2周)、第6周(第1次免疫后4周)、第8周(第1次免疫后6周)各组小鼠外周血淋巴细胞,分离microRNA用于建库测序,利用生物信息学方法筛选rEg.P29诱导下差异表达的microRNA分子,并进行注释分析。结果测序所得数据经拼接组装比对,共获得成熟的microRNA序列342条,其中已知的microRNA序列206条,未知信息序列36条。在已知的microRNA分子中,差异表达共55个,其中上调31个,下调24个;在新发现的microRNA分子中,差异表达11个,其中上调5个,下调6个。靶基因预测结果显示,表达上调microRNA调控的靶基因有14279个,表达下调microRNA调控的靶基因13911个。GO富集注释结果显示,在上调分子中,生物学进程(BP)获得18条注释信息,其中16个microRNA调控的826个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下;在下调分子中,生物学进程(BP)获得21条注释信息,其中25个microRNA调控的712个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下。KEGG通路分析结果显示,无论是表达上调还是下调的分子,其靶基因的代谢通路均显著富集到Th1 and Th2 cell differentiation、Th17 cell differentiation、B cell receptor signaling pathway等与细胞分化相关的信号通路以及与肿瘤相关的信号通路上。结论在rEg.P29诱导下小鼠免疫细胞存在差异表达的microRNA分子,这些分子可能与免疫细胞的分化相关。 朱明星 张婷婷 杜先才 赵殷奇 徐士梅 杨松昊 赵巍关键词:细粒棘球蚴 MICRORNA 抗菌肽CecropinB对鸡肠道正常微生物群的影响 被引量:1 2010年 目的探讨重组抗菌肽CecropinB对鸡肠道正常微生物群的影响。方法 50羽健康雏鸡随机分成5组:设盐酸环丙沙星对照组,基因工程抗菌肽cecropinB高、中、低三个剂量组及空白对照组,每组10羽,均以饮水混饮的方式饲喂,分别于42、49d取盲肠、回肠内容物进行聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE),对肠道的几种优势菌的多样性进行研究,并对回肠16SrDNA进行全序列克隆、测序。结果雏鸡盲肠菌群在42日龄和49日龄之间相似性达到50%。相同日龄各组间盲肠菌群分为两大类,其中抗菌肽不同剂量组间相似性为73%及以上,而抗菌肽不同剂量组与空白对照组及抗生素对照组之间的相似性分别为61%以上和50%。各组雏鸡回肠显示两大类优势菌群,抗生素对照组为一大类,其他组别为一大类,两者间的相似性为59%;各组内样品之间相似性在92%以上,组间相似性在70%左右。对回肠内容物16SrDNA克隆、测序显示,抗菌肽高剂量组比空白对照组多出一条与厌气弯杆菌同源性为78%的条带。结论 CecropinB作为一种饲料添加剂对42与49日龄雏鸡肠道菌群无明显影响。 王秀青 张婵 朱明星 张爱君 杨风琴关键词:雏鸡 肠道菌群 DGGE 细粒棘球蚴重组HSP70蛋白免疫保护力研究 被引量:1 2013年 目的探讨细粒棘球蚴重组HSP70蛋白(rEgHSP70)免疫小鼠对原头蚴攻击感染的保护性效果。方法选取雌性6周龄ICR小鼠随机分为两组:实验组和对照组(每组10只),实验组接种rEgHSP70 3次,每次间隔两周,对照组注射等量的PBS。两组小鼠在末次免疫后2周用1500只活细粒棘球蚴进行腹腔攻击感染,攻击感染30周后剖杀小鼠,无菌取脾组织,并记录每只小鼠腹腔内包囊数量和直径,评价免疫保护力。用流式细胞仪检测脾组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞,计算两者比值。结果细粒棘球蚴重组HSP70蛋白接种对原头蚴攻击感染的免疫保护力为44.20%,rEgHSP70免疫组小鼠脾CD4+T亚群(0.52±0.082)高于对照组小鼠(0.44±0.07),P<0.05,rEgHSP70免疫组小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+T亚群比值(3.35±0.02)高于对照组(2.00±0.77),P<0.05。结论细粒棘球蚴重组HSP70可诱导小鼠产生44.20%免疫保护力,具有一定的疫苗潜力。 巨艳 马斯明 朱明星 王娅娜 王娅娜 李君良关键词:细粒棘球蚴 保护力 结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因在毕赤酵母中的表达 被引量:1 2013年 目的亚克隆结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因,构建pPICZα-A-S1表达载体,并在毕赤酵母表达系统中分泌表达,为pstS1基因所表达的蛋白功能的研究奠定基础。方法 PCR方法亚克隆结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因片段,构建毕赤酵母表达载体pPICZα-A-S1,重组质粒线性化之后电转化到在毕赤酵母表达菌株SMD1168感受态细胞中,挑选阳性克隆菌株并用甲醇进行诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果构建了结核分枝杆菌pPICZα-A-pstS1重组质粒,以甲醇进行诱导,经过SDS-PAGE电泳进行分析,结果显示pstS1基因表达出了大约为38kD的蛋白,经过Western blot分析,分泌的蛋白与结核分支杆菌38KD抗血清能够特异性的识别。结论结核分枝杆菌pstS1基因可以在毕赤酵母中进行很好的分泌表达,为以后pstS1基因的表达产物在疫苗研制、诊断血清研究等方面的应用奠定了基础。 张婵 朱明星 杨风琴 王秀青关键词:结核分枝杆菌 毕赤酵母 缺氧条件下NRF-1基因过表达的大鼠心肌细胞增殖和凋亡变化 被引量:4 2018年 目的构建核呼吸因子-1(NRF-1)过表达的大鼠心肌细胞,观察缺氧条件下细胞增殖和细胞凋亡的变化。方法将大鼠心肌细胞H9C2分为NRF-1过表达组、空载体组和正常对照组,NRF-1过表达组和空载体组分别用NRF-1过表达慢病毒及空载体病毒进行转染,正常对照组不做处理。将三组细胞置于缺氧用三气培养箱中进行缺氧培养(37℃、1%O_2+5%CO_2+94%N2)24 h。采用实时无标记分析(RTCA)技术观察缺氧6、12、24 h时的细胞增殖水平,流式细胞仪检测缺氧24 h时细胞凋亡率,qRT-PCR法检测缺氧24 h时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA的相对表达量。结果缺氧12、24 h时,NRF-1过表达组细胞增殖水平高于正常对照组和空载体组;缺氧24 h时,与空载体组和正常对照组比较,NRF-1过表达组细胞凋亡水平降低,且caspase-3 mRNA表达水平较低(P均<0.05)。结论 NRF-1过表达可以降低缺氧条件下心肌细胞的凋亡,从而提高心肌细胞在缺氧条件下的存活能力。 孙红丽 杨继辉 牛楠 朱明星 赵巍 宋熔关键词:缺氧 心肌细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin突变体的合成以及在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:6 2009年 根据天蚕素类抗菌肽作用机制假说,设计引物对前期构建成功的载体天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin进行定点突变,使其生成杂合肽的衍生物,测序正确后转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子质量约119ku的cecA-mag杂合抗菌肽突变体获得表达,并通过琼脂扩散试验对表达产物的抑菌活性与cecA-mag进行了比较。结果表明,突变体对金黄色葡萄球菌抑菌活性比cecA-mag提高了1.2倍。 王秀青 朱明星 张爱君 丁淑琴 风琴关键词:突变体 毕赤酵母 分泌表达 宁夏野生荨麻水提取物对糖尿病大鼠血糖血脂的调节作用 被引量:3 2016年 [目的]观察宁夏野生荨麻(Urticaangustifolia Fisch.Ex Hornem.)水提取物对2型糖尿病大鼠血糖、血脂及氧化应激的影响。[方法]SD大鼠适应性喂养1周后,随机分出10只为正常对照组喂以基础饲料,自由进食进水;其余大鼠喂以高脂饲料自由饮水,喂养4周后腹腔注射链尿佐菌素(STZ,45 mg/kg)诱导2型糖尿病模型。将造模成功的大鼠随机分成3组,每组10只,即糖尿病模型组,荨麻高剂量组(300 mg/kg),荨麻低剂量组(150 mg/kg)。各组给予相应药物灌胃,正常对照组和糖尿病模型组给予生理盐水灌胃,均每日1次,连续灌胃4周结束。期间每周测定空腹血糖值1次,并于灌胃结束后测定各组大鼠血清中总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)。[结果]与模型对照组相比,高、低浓度荨麻组均能够降低大鼠CHOL(P<0.05);低浓度荨麻组能够降低TG(P<0.05),高、低浓度荨麻组对HDL和LDL的作用不明显(P>0.05)。与模型对照组相比,高、低浓度荨麻组均可以升高血清中SOD水平(P<0.01);低浓度荨麻组可以降低血清中MDA水平(P<0.01),但高浓度荨麻组对于MDA水平的影响无统计学意义。[结论]宁夏野生荨麻水提取物具有降低血糖、调节血脂和抗氧化应激的作用。 陈铭扬 马巧莹 马佳媛 陈金珠 李辉 黄琪 袁登举 苏文贵 王嘉丽 朱明星关键词:血糖 血脂