徐小敏
- 作品数：8 被引量：60H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：化学工程医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 麦迪霉素聚酮缩合酶基因的亚克隆及表达被引量：2
- 1991年
- 利用与麦迪霉素生物合成有类似途径的放线紫红素聚酮缩合酶基因Act I作为探针,将来源于麦迪霉素产生菌基因文库的与Act I有同源性的阳性初级克隆pCN8B12进一步缩小,亚克隆获得了2.4kb的麦迪霉素聚酮缩合酶基因,将其插入pWHM3载体中构建了重组质粒pCG2 DNA。pCG2 DNA在放线紫红素聚酮缩合酶基因缺陷型变株天蓝色链霉菌TK17及螺旋霉素产生菌S.ambofaciens中均获得表达。前者所得产物不同于麦迪霉素和放线紫红素,可能为新的杂合抗生素;后者能使螺旋霉素产量得到提高。另外pCG2 DNA在道诺红霉素产生菌调节变株S.peucetius H6101中的表达产物经TLC及HPLC分析表明为紫红霉酮。pCG2 DNA在Tetracenomycin C产生菌S.glaucescens中亦有一定的功能表达,而在红霉素产生菌红霉内酯阻断变株Saccharapolyspora erythraea WMH15,261中未观察到活性表达。推测pCG2 DNA具有一定调节或在某些聚酮类抗生素产生菌变株中起互补的功能。
- 朱学蔚王以光金莲舫徐小敏
- 关键词：麦迪霉素基因亚克隆
- 基因工程丙酰螺旋霉素被引量：9
- 1994年
- 以碳霉素４″异戊酰基转移酶基因（ｃａｒＥ）为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中，经菌落杂交获得阳性菌落ｐｃＮ１０Ｆ５。经分子杂交证明ｐｃＮ１０Ｆ５ＤＮＡ的ＢａｍＨ１－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段与ＣａｒＥ基因同源。将ｐＣＮ１０Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨ１８．０ｋｂ片段分别克隆到ｐＩＪ６８０、ｐＷＨＭ３、ｐＷＨＭ６０１质粒载体上，获得重组质粒ｐ６Ｆｓ、ｐｗＦ５和ＰＧＦ５。含上述重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株均产生与丙酰螺旋霉素相类似的产物，且以ｐＩＪ６８０为载体的克隆菌株产生丙酰螺旋霉素的比例最高，最稳定。含ｐ６Ｆ５克隆菌株的发酵产物经提取、纯化后，进行理化性质及各种光谱数据的分析，证明其主要产物为丙酰螺旋霉素Ⅲ及Ⅱ。分子杂交实验证明螺旋霉素产生菌克隆菌株中，确实含有ｐ６Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段。经分子杂交、亚克隆及基因表达实验，将麦迪霉素４″羟基丙酰基转移酶基因，定位于ＥｃｏＲＩ－ＥｃｏＲＩ－ｐｓｔＩ的２．６ｓｋｂ片段上。核昔酸序列分析结果显示该基因由１１６４个核昔酸组成，Ｇ＋Ｃ％为７０．ｏ％，ＳＤ序列为ＧＡＧＧＴ，起始密码为ＡＴＧ，终止密码为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸残基，蛋白的分子量为４２．?
- 王以光金莲舫徐小敏张叙伦曾应
- 关键词：基因工程抗生素
- 利用强启动功能片段提高麦迪霉素4"-羟基丙酰化酶基因的表达被引量：6
- 1996年
- 利用PCR技术将本室克隆到的强启动功能片段取代麦迪霉素丙酰化酶基因(mpt)的启动子或与mpt基因自身启动子串连,获得含mPt重组质粒pCHFPE3和pCHFPE2。用含有这两个质粒的Streptomyces lividans TK24对螺旋霉素进行微生物转化,结果表明,与含有原启动子的mpt.S.lividans TK24(p.WFPE)相比,丙酰螺旋霉素的组分比例分别提高了89.02％和58.53％。含重组质粒pCHFPE2的螺旋霉素产生菌S.spiramyceticus发酵产物中丙酰螺旋霉素的组分也有较大辐度的提高。说明利用该强启动功能片段可以提高麦迪霉素丙酰化酶基因的表达。
- 顾海东王以光徐小敏魏贤英冯明华
- 关键词：启动子麦迪霉素基因表达
- 雷帕霉素发酵生物活性的测定方法被引量：4
- 2000年
- 由吸水链霉菌 (Str.hygroscopicus) WY93- Z2 7中分离出具有抗真菌和免疫抑制活性的雷帕霉素 ,主要存在于菌丝内 ,少量分泌到细胞外。为适应大量菌种选育工作的需要 ,我们研究了 :(1)几种处理菌丝的方法 ,结果以 SDS裂解菌丝操作简便 ,省时 ,成本低 ;(2 )固体发酵与液体发酵法生物活性结果没有正相关关系 ;(3)一定条件下 ,液体发酵上清液效价可替代菌体效价用于初筛工作。
- 白兰芳武临专徐小敏王以光
- 关键词：雷帕霉素发酵生物活性
- 麦迪霉素4″酰化酶基因的克隆及在螺旋霉产生菌中的表达被引量：27
- 1992年
- 从含麦迪霉素生物合成基因的初级克隆pCN6C5中,发现并分离了麦迪霉素4″酰化酶基因,与质粒载体p1J680相连,获得重组质粒p66B,在螺旋霉素产生菌中得到表达,其主要产物为4″异戊酰螺旋霉素。以p66B DNA BamHI-BamHI 2.3kb插入片段为探针,从麦迪霉素产生菌基因文库中获得了另一阳性克隆pCN10F5,Southern分子杂交确定pCN10F5 BamHI-BamHI 8.0kb为同源片段。以pWHM3及pIJ680为载体,获得重组质粒pWF5及p6F5,分子大小分别为15.2kb及13.3kb。通过DNA转化,并经分子杂交实验证明,获得含重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株。其主要产物经分离、纯化后,分析其理化性质和光谱数据,鉴定为丙酰螺旋霉素Ⅲ和Ⅱ。研究还表明,麦迪霉素基因文库中只有pCN10F5 DNA与碳霉素产生菌的4″异戊酰化酶基因同源,提示pCN6C5克隆携带的麦迪霉素4″酰化酶基因与pCN10F5的4″丙酰化酶基因及碳霉素4″异戊酰化酶基因有一定的区别。
- 王以光金莲舫金文藻张秀华曾应徐小敏姚军
- 关键词：麦迪霉素酰化酶基因产生菌
- 全文增补中
- 西罗莫司产生菌Streptomyces hygroscopicus WY-93的诱变育种与代谢研究被引量：15
- 2001年
- 研究了不同诱变方法对西罗莫司产生菌正变率的影响 ,发现紫外线单一因子处理、光复活较为有效 ;用这一条件处理得到一正变株 UV- 8- 6 1,其效价比出发菌株 Z2 7高 2～ 3倍 ,产生抗生素水平经连续传代证明非常稳定。本文还研究了菌落形态与发酵效价以及诱变后正变率与死亡率的关系 ,表明孢子丰富的梅花型或面包型菌株发酵效价较高。以紫外线单一因子、光复活处理死亡率在 99.90 %～ 99.95 %时正变率较高。另外 ,从代谢角度对高产株与原株对碳、氮源的利用及葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶的活性进行了深入研究 ,发现两者在生长速度 ,碳、氮源的利用方面存在显著差别 ,尤其是高产株葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶的活性明显高于原株。由此推断 ,高产株 UV- 8- 6 1西罗莫司产量的提高有可能是由于菌体生理代谢旺盛 ,参与戊糖一级代谢的 G- 6 -P脱氢酶活性提高 ,由此增加了作为西罗莫司生物合成环己烷前体的莽草酸的供给。
- 白兰芳徐小敏武临专王以光
- 关键词：西罗莫司生物合成诱变育种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
- 基因工程技术在大环内酯抗生素及硫霉素改造中的应用
- 王以光金莲舫余兰香徐小敏张叙伦李戎锋唐莉
- 该成果涉及利用基因重组技术研制新抗生素-丙酰螺旋霉素及对其他抗生素结构改造的探讨。其主要研究内容包括从麦迪霉素产生菌中克隆新基因-4′丙酰基转移酶基因，并转入螺旋霉素产生菌，获得了能直接发酵产生丙酰螺旋霉素的基因工程菌。...
- 关键词：
- 关键词：大环内酯抗生素麦迪霉素基因重组
- 新抗生素波拉霉素A、B的分离、性质及鉴别被引量：6
- 1997年
- 从1株吸水链霉菌StreptomyceshygroscopicusLP－93的培养物中，经溶媒萃取、正相及反相硅胶柱层析、凝胶过滤、制备TLC等方法分离到2个新多羟基大环内配类抗生素．即被拉霉素A和B。波拉霉素具有较强的抗真菌活性，对许多引起植物病害的真菌有较好的抑制活性。波拉霉素A、B均属于多羟基大环内酯类抗生素，但理化性质及结构不同于已知结构的多羟基大林内酯类抗生素。
- 金文藻孟伟王以光张维西徐小敏朱昌雄
- 关键词：新药
