张会
- 作品数：24 被引量：48H指数：5
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金黑龙江省高等教育教学改革工程项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达被引量：7
- 2016年
- 研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。
- 李杰吴婷马南王欣杨建乐李健友张会
- 关键词：酸性蛋白酶黑曲霉同源重组分泌表达
- 简易快速高效表达葡萄糖氧化酶基因的黑曲霉培养装置
- 简易快速高效表达葡萄糖氧化酶基因的黑曲霉培养装置，属于微生物学技术领域，由盛皿桶（1）、支架（2）组成，其特征在于：所述的盛皿桶（1）上端横架杆（32）两端的摆轴（33）放置在横支架（3）的置轴槽（6）里，盛皿桶壁（15...
- 张会李杰刘天奇邵志伟樊俊博马佳欣
- 单宁酶基因在黑曲霉中的同源表达被引量：1
- 2014年
- 利用PCR方法从黑曲霉基因组中扩增单宁酶基因的编码区，构建其黑曲霉表达载体pSZH-tan。通过农杆菌介导法将TAN基因导入黑曲霉中，经筛选获得将TNA基因整合到糖化酶基因的同源重组转化子。对转化子表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测，结果表明，重组蛋白分子质量约为76 ku，重组菌株单宁酶表达量为322~581μg·mL^-1，最高发酵酶活为41.12 U·mL^-1。
- 李杰岳苗苗江连洲韦素真姚杨张会
- 关键词：单宁酶黑曲霉基因置换
- 应用黑曲霉表达重组酶制剂的研究
- 选育优良的菌种是酶制剂产业的核心问题。用传统的菌种生产酶制剂往往存在着产量低、工艺复杂、成本高等缺点。采用工程菌高效表达酶蛋白,是降低酶制剂生产成本、创制新型酶制剂的有效途径,也是该领域的竞争焦点。发展安全、通用、高效、...
- 李杰张会刘天奇张贺徐玥张源元安欣丁纯洁刘司棋钱政
- 关键词：酶制剂黑曲霉基因表达基因重组
- 文献传递
- Klac PNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达
- 2023年
- 嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的目的PNP基因连接至分泌表达载体pBSA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43。结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL。为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃。在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了12%。来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础。
- 赵越王新秀吴思陈作慧张会惠觅宙李杰双宝
- 关键词：嘌呤核苷磷酸化酶枯草芽胞杆菌密码子优化异源表达
- 构建β-甘露聚糖酶的黑曲霉工程菌被引量：4
- 2013年
- 目的:在黑曲霉CICC2462中表达经过改造的β-甘露聚糖酶基因(MAN)。方法:从黑曲霉CICC2462中扩增得到MAN(1 275bp),并针对黑曲霉CICC2462中高表达的糖化酶基因(glaA)位点,通过重叠延伸PCR将MAN基因片段与glaA的5’、3’同源臂进行拼接得到同源重组表达框GMG,将其定向插入表达载体pSZH-CYM中,构建黑曲霉表达载体pSZH-MAN,进而通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。结果:经筛选获得4株重组菌株,并从中筛选出在glaA位点发生基因置换的同源重组菌株1株。对4株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明MAN基因在黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养8d后其分泌表达的β-甘露聚糖酶酶活最高可达12 467.2U/mL,而在出发菌株最高仅可达171.4U/mL,重组菌株是出发菌株的72倍。结论:此研究为简化β-甘露聚糖酶发酵生产工艺、提高产量提供了新的途径。
- 张莹莹张会李杰
- 关键词：Β-甘露聚糖酶黑曲霉基因置换农杆菌同源重组
- β-1,4-内切木聚糖酶基因在黑曲霉中安全高效表达的研究
- 丝状真菌具有卓越的表达和分泌能力，以及与哺乳动物相似的糖基化修饰系统，其安全性也广泛为人们所接受，是表达真核基因的理想系统。目前，在世界范围内研究和开发丝状真菌表达系统已成为重组酶制剂研究领域的热点。尽管目前国内利用木霉...
- 张会
- 关键词：黑曲霉内切木聚糖酶分泌表达
- 文献传递
- 高产高纯度果胶甲酯酶黑曲霉工程菌的构建被引量：1
- 2021年
- 为获得一株高产高纯度的果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌,提高果胶甲酯酶的产量,从果胶酶生产菌种中克隆了果胶甲酯酶基因pmeA,通过同源重组的原理,冻融法转化农杆菌、农杆菌介导法转化黑曲霉方法,成功构建了分泌表达果胶甲酯酶的纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeA)。基本发酵培养基中发酵第9 d上清中最高酶活达到467.77 U/mL。进一步敲除重组菌株TH-2(glaA::pmeA)中背景蛋白酸稳定的α-淀粉酶的编码基因asaA,获得纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeAΔpyrGΔasaA)。该菌株在添加1%的硫酸铵的发酵培养基中培养7 d后,发酵液上清中主要的背景蛋白均消失。但是与纯合重组菌株TH-2(glaA::pmeA)相比,果胶甲酯酶表达量有所下降,最高酶活为255.40 U/mL。重组果胶甲酯酶的最适作用温度为50℃,适合的温度范围是40~80℃,在80℃下仍能维持其酶活性的70%以上,适合的pH范围是3.0~5.0,最适pH为4.0。最终获得了一株温度和pH作用范围较宽的高产高纯度果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌。
- 韩萌萌盖金明姜庆丰张会李杰
- 关键词：果胶甲酯酶黑曲霉分泌表达
- 天门冬酰胺酶基因在黑曲霉中的同源表达被引量：1
- 2015年
- 根据NCBI中的黑曲霉天门冬酰胺酶基因asp序列（GI：145231287）设计特异性引物,从黑曲霉CICC2462基因组中扩增asp基因编码区,构建其黑曲霉表达载体p SZHG-Asp。通过农杆菌介导法转化黑曲霉,筛选以asp基因置换糖化酶基因gla A的同源重组转化子。对转化子的表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测。获得8株在gla A位点发生基因置换的同源重组转化子,并对其中4株的上清液进行检测。SDS-PAGE结果显示,在42 000处有目的蛋白质条带,重组菌株的目的蛋白质表达量为185~417μg/m L,发酵液最高酶活为21 111 U/m L。
- 韦素真张会姚杨岳苗苗李杰
- 关键词：黑曲霉基因置换
- 正调控元件拷贝数对黑曲霉PglaA启动子的影响
- 2019年
- 为获得转录水平更高的强启动子,提高黑曲霉中重组蛋白表达量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因启动子PglaA基础上,构建分别含2、4、6个拷贝的正调控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R启动子。以黑曲霉木聚糖酶基因xynB为目的基因,研究正调控元件拷贝数对PglaA启动子的影响。构建黑曲霉表达载体pSZHG2R-xynB、pSZHG4R-xynB、pSZHG6R-xynB,采用农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。获得目的基因表达框整合在葡萄糖淀粉酶基因位点的纯合黑曲霉重组菌株PglaA2R-xynB、PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB。经SDS-PAGE检测观察到重组菌株分泌约24.0ku木聚糖酶蛋白条带。经酶活检测表明,木聚糖酶活力在第8天达最高,重组菌株PglaA4R-xynB(7705.36U mL^-1)、PglaA6R-xynB(8466.32U mL^-1)比PglaA2R-xynB(5890.77U mL^-1)分别提高1.31倍和1.44倍。荧光定量PCR结果表明,重组菌株PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB的xynB基因mRNA比PglaA2R-xynB分别提高2.2倍和5.3倍。可知,PglaA启动子正调控元件多拷贝显著提高木聚糖酶表达。
- 李杰丁纯洁鄢健楠安欣刘天奇张会
- 关键词：黑曲霉启动子多拷贝木聚糖酶
