姚友旭
- 作品数:4 被引量:12H指数:2
- 供职机构:四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金:四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域:生物学农业科学更多>>
- 易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性被引量:6
- 2013年
- 近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-10,活力比亲本酶提高4.2倍。序列分析表明:F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变:D212V和T307S。SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5~10.0范围内50℃保温30 min可保持80%的剩余酶活,在60~75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80%以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。
- 唐自钟刘姗韩学易姚友旭刘默洋陈惠晋海军吴琦单志
- 关键词:枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶易错PCR酶学性质
- 基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法
- 本发明公开了基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法,包括以下步骤:A1,获得突变内切葡聚糖酶基因;A2,内切葡聚糖酶大肠杆菌突变体库的构建;A3,高酶活菌株的筛选;A4,高酶活菌株突变基因的分析;实现了对来源于枯...
- 陈惠姚友旭廖燕吴琦李春梅李雨霏阮景军
- 文献传递
- 基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法
- 本发明公开了基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法,包括以下步骤:A1,获得突变内切葡聚糖酶基因;A2,内切葡聚糖酶大肠杆菌突变体库的构建;A3,高酶活菌株的筛选;A4,高酶活菌株突变基因的分析;实现了对来源于枯...
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