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排序方式：

应用酵母双杂交系统初步筛选IBDV VP2结合蛋白被引量：2: 2009年; 用RT-PCR扩增VP2 cDNA并克隆入诱饵载体pSos,与鸡法氏囊cDNA文库中分离的质粒DNA共转化cdc25H,筛选阳性酵母克隆;用酵母质粒DNA转化大肠杆菌,提取质粒再分别与诱饵载体pSosVP2共转化酵母细胞,利用酵母双杂交系统对阳性克隆进行验证。对阳性克隆的插入片段进行序列分析,根据生物信息学分析结果初步确定IBDV VP2结合蛋白编码基因。结果显示,经酵母双杂交共筛选出48个候选阳性克隆,分别转化酵母菌,经酵母双杂交验证后,获得阳性克隆19个。进一步的序列分析显示,在19个插入序列中,共编码8种不同的多肽,分别是Ras超家族中的RRAS2、Rit1和N-Ras,肿瘤相关蛋白TCTP和PARP14,抗病毒Mx蛋白,LAMB3蛋白以及蛋白激酶PRKX。VP2候选结合蛋白的获得为IBDV受体、诱导细胞凋亡或逃逸宿主抗病毒机制等研究奠定了基础。; 袁维峰吴保明张鑫宇张泉孙怀昌; 关键词：鸡传染性法氏囊病毒酵母双杂交系统

三株鸡传染性法氏囊病毒弱毒株的分离与分子鉴定被引量：2: 2009年; 本试验在江苏省鸡场分离获得3株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV),采用RT-PCR法扩增VP2基因,将产物克隆入pMD18T载体,经测序,并与IBDV代表株VP2基因的高变区序列进行分析比较。结果显示,3个分离株与超强毒株、强毒株、突变株及弱毒株的核苷酸同源性在89.5(～98.9(之间,与弱毒株Cu-1和疫苗株PBG-98同源性最高,为98.9(;推导出的氨基酸序列与代表性毒株的同源性在98.2(～99.5(之间。其中,七肽区的第三个丝氨酸残基突变为精氨酸或苏氨酸,279和284位氨基酸残基突变为天冬氨酸和苏氨酸,222、294和299位氨基酸残基分别突变为脯氨酸、亮氨酸和天冬氨酸。上述试验表明3株分离株均为临床弱毒株。; 袁维峰吴保明张鑫宇夏晓丽孙怀昌; 关键词：传染性法氏囊病毒 VP2基因弱毒株

利用SMART技术构建鸡法氏囊全长cDNA表达文库被引量：2: 2009年; 为构建鸡法氏囊组织互补DNA(cDNA)文库,从3周龄鸡法氏囊组织提取总RNA,用偶联oligo(dT)磁珠纯化mRNA,用SMART(Switching methanism at 5′end of RNA transcrip)技术合成cDNA第1链,用LD-PCR方法扩增双链cDNA。经SfiⅠ酶切消化后,用CHROMA SPIN-400柱去除400 bp以下小片段,获得的双链cDNA与同样酶切的pMyr表达载体连接,电转化大肠杆菌获得cDNA文库。初始文库容量为2.8×10~6cfu,重组子比例为100%,插入片段的大小平均为1.2 kb。扩增后文库容量为8×10^(11)cfu·mL^(-1)。所建文库为鸡传染性法氏囊病毒受体基因克隆及功能研究奠定基础。; 袁维峰吴保明张鑫宇张泉孙怀昌; 关键词：CDNA表达文库鸡传染性法氏囊病毒

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吴保明