刘莉娜 作品数:10 被引量:24 H指数:3 供职机构: 郑州大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家大学生创新性实验计划 河南省医学科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
旋毛虫幼虫侵入胃上皮细胞后虫体与细胞蛋白变化的研究 被引量:2 2013年 目的观察旋毛虫幼虫对胃上皮细胞的侵入及侵入前后虫体与细胞蛋白的变化,筛选幼虫侵入相关蛋白。方法将旋毛虫感染性幼虫接种至胃上皮细胞(SGC-7901)单层,37℃5%CO2条件下培养不同时间后在倒置显微镜下观察幼虫侵入情况;培养18h后分别提取虫体与细胞蛋白,进行SDS-PAGE与Western blot分析。结果旋毛虫幼虫培养6h时已侵入细胞单层,18h在幼虫头端与尾端可见鞘的形成。SDS-PAGE结果表明,幼虫与细胞共培养后比仅在培养基中培养的幼虫增加了3条蛋白带,减少了4条蛋白带;细胞与幼虫共培养后细胞蛋白增加了3条蛋白带,减少了2条蛋白带。Western blot分析显示,幼虫与细胞共培养后虫体蛋白多了3条被旋毛虫感染鼠血清识别的反应带(58、21、18ku),少了3条反应带(98、86、31ku);细胞与幼虫共培养后细胞蛋白多了6条被旋毛虫感染鼠血清识别的反应带(96、62、40、34、29、22ku),少了2条反应带(98、15ku)。结论旋毛虫幼虫可侵入体外培养的胃上皮细胞单层;幼虫与细胞共培养后增加的被感染鼠血清识别的虫体与细胞蛋白可能是幼虫分泌的侵入相关蛋白。 王蕾 崔晶 田翔宇 陈梦欢 范思洋 陈雨 刘莉娜 姜鹏 王中全关键词:旋毛虫 胃上皮细胞 SDS-PAGE BLOT 裂头蚴病的病原学、早期血清学诊断及治疗 崔晶 王中全 张玺 刘莉娜 姜鹏 刘若丹 王烨 蔺西萌 张红卫 许汴利 裂头蚴病是由迭宫属绦虫幼虫引起的一种严重的食源性寄生虫病,主要因生食或半生食蛙肉、蛇肉,饮生水或局部敷贴生蛙、蛇肉等而感染。2006年之前河南省无当地感染的裂头蚴病人,近年来在河南省漯河、开封等地出现了一批表现为“高热、...关键词:关键词:裂头蚴病 病原学 血清学诊断 郑州市区犬旋毛虫感染情况调查 被引量:1 2011年 目的了解郑州市区犬旋毛虫的感染情况。方法从郑州市区采集屠宰犬的膈肌样本403份,分别应用压片镜检法和人工消化法对肉样进行检查。结果压片镜检法和人工消化法对403份犬膈肌样本检测,均未检出旋毛虫幼虫。结论郑州市区未发现犬的旋毛虫自然感染。 刘莉娜 张盾 吕恭进 韩伟 丁艳霞 姚义好 巫小龙 姜鹏 崔晶 王中全关键词:旋毛虫 寄生虫 曼氏迭宫绦虫半胱氨酸蛋白酶体外表达条件的优化 被引量:4 2015年 目的优化曼氏(欧猥)迭宫绦虫半胱氨酸蛋白酶(Spirometra erinaceieuropaei cysteine protease,SeCP)基因的体外表达条件。方法对含有SeCP基因重组表达质粒pMAL-c2X-SeCP的大肠埃希菌TB1在不同培养温度、不同诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷(isopropyl-1-thio-β-galactopyranoside,IPTG)浓度及不同培养时间等条件下进行诱导表达,通过SDS-PAGE与蛋白图谱扫描分析重组SeCP蛋白(rSeCP)的表达水平,选择rSeCP适宜的体外表达条件。结果SDS-PAGE显示重组质粒pMAL-c2X-SeCP转化大肠埃希菌TB1在常规诱导条件(培养温度30℃,1 mmol/L IPTG诱导培养4h)下,rSeCP以可溶性蛋白和包涵体2种形式表达。当重组菌TB1在28、30、31、32、34、35及37℃条件下培养时,rSeCP的表达量分别占全菌上清蛋白量的9.4%、15.1%、12.2%、6.6%、6.4%、5.4%和1.2%;当重组菌TB1在30℃条件下IPTG终浓度0.1、0.2、0.5及1.0mmol/L诱导时,rSeCP表达量分别占全菌总蛋白量的32.6%、25.7%、26.7%和25.7%;当重组菌TB1在30℃条件下IPTG终浓度0.1mmol/L诱导培养1、2、3、4、5和6h,rSeCP的表达量分别占全菌总蛋白量的13.4%、18.6%、22.4%、33.2%、45.2%和34.6%。结论培养温度为30℃,IPTG终浓度为0.1mmol/L诱导培养5h,为重组质粒pMAL-c2X-SeCP转染大肠埃希菌TB1表达rSeCP最佳条件,该研究为大量制备和纯化rSeCP奠定了基础。 刘莉娜 崔晶 祁欣 林美龙 张匀露 王涵 姜鹏 刘若丹 张玺 王中全关键词:曼氏迭宫绦虫 半胱氨酸蛋白酶 我国旋毛虫地理株遗传变异与系统发生关系的研究 被引量:3 2011年 目的通过分析旋毛虫线粒体基因分子标记,研究我国旋毛虫地理株间的遗传变异与系统发生关系。方法应用旋毛虫线粒体核糖体小亚基DNA(mitochondrial small subunit ribosomal DNA,mtSSU)和线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因(mitochondria cytochrome coxidase,COΙ)为分子标记,分别对我国7个旋毛虫地理株扩增后进行双向测序,利用DNAMAN软件将测序结果和GenBank中相应序列进行比对研究,并使用MEGA4.0程序包构建系统进化树。结果 PCR对7个旋毛虫地理株分别扩增出了649bp(mtSSU)和419bp(COΙ)的DNA片段,7个地理株的DNA片段与GenBank中T.spiralis的相应片段相比存在一定差异,其中mtSSU基因有4个变异位点(248、293、537和539位),而COI基因仅存在2个变异(273和382位),所有变异均为T-C或C-T的转换;进化树显示南阳株和云南株位于比较近的分枝,而西安株、广西株及西藏株亲缘关系较近。结论我国7个旋毛虫地理株的遗传变异较小,亲缘关系较近。 刘莉娜 崔晶 姜鹏 王蕾 李灵招 张玺 王中全关键词:旋毛虫 系统发生关系 COI 曼氏迭宫绦虫半胱氨酸蛋白酶的表达与鉴定及其用于裂头蚴病血清学诊断的研究 裂头蚴病(sparganosis)是由迭宫属绦虫的幼虫-裂头蚴(plerocercoid)侵入人体引起的一种严重的自然疫源性疾病,在我国及东南亚国家该病主要是由曼氏迭宫绦虫(Spirometra mansoni)裂头蚴引... 刘莉娜关键词:裂头蚴病 曼氏迭宫绦虫 半胱氨酸蛋白酶 血清学诊断 文献传递 曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原的研究 被引量:3 2013年 目的寻找曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原。方法从野蛙体内收集曼氏迭宫绦虫裂头蚴,经口接种感染20只昆明小鼠,每只小鼠接种2条裂头蚴,感染后6~28d隔天尾静脉采血,采用ELISA检测抗裂头蚴抗体;应用双向电泳(two—dimensionalelectrophoresis,2-DE)与Westernblot对裂头蚴可溶性抗原进行分析。结果裂头蚴感染后8d,小鼠血清特异抗体阳性率为10%(2/20),感染后14d特异抗体阳性率达100%。2-DE显示,裂头蚴可溶性抗原有255±6个蛋白点,分子质量主要集中在25~117ku,其中〉44ku的蛋白点有171±9个,占总蛋白点数的67.1%;等电点(pI)范围为4~7,其中227个蛋白点集中在pI5~6.5,占蛋白点总数的89.1%。Westernblot检测有14个蛋白点可被感染曼氏迭宫绦虫裂头蚴14d的小鼠血清识别,其分子质量集中在82、45、36、34及25ku;1~14号蛋白点所对应的pI值分别为5.93、6.06、6.17、6.30、6.39、5.82、6.01、6.17、5.69、5.46、5.63、6.1、5.71、6.19。结论曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性抗原分子质量主要集中在25~117ku,pI值集中在5.0~6.5。感染14d的小鼠血清识别的裂头蚴蛋白可作为裂头蚴感染早期诊断候选抗原。 胡丹丹 崔晶 王莉 魏彤 刘莉娜 张玺 王中全关键词:曼氏迭宫绦虫 裂头蚴 可溶性抗原 双向电泳 BLOT 河南省商丘地区猪旋毛虫感染调查 被引量:3 2011年 目的了解河南省商丘地区猪的旋毛虫自然感染情况。方法在河南商丘某县农村的3个生猪屠宰点,收集屠宰猪的膈肌样本,分别应用压片镜检法和人工消化法对肌肉样本进行旋毛虫检验。结果 273头屠宰猪均为圈养猪,肌肉样本应用镜检法与消化法的幼虫检出率分别为0(0/273)与3.30%(9/273)(χ2=7.230,P<0.05),阳性肉样的平均每g肌肉虫荷(larvae per gram,lpg)为0.48。结论河南省商丘地区农村圈养猪的旋毛虫感染率较高,但感染度较低;在旋毛虫病低度流行区应使用消化法对猪肉进行旋毛虫检验。 姜鹏 丁艳霞 姚义好 刘莉娜 张盾 巫小龙 崔晶 王中全关键词:旋毛虫 镜检法 消化法 双抗体夹心ELISA检测旋毛虫循环抗原实验条件的研究 被引量:2 2013年 目的建立检测旋毛虫循环抗原(circulating antigens,CAg)的双抗体夹心ELISA方法。方法以抗旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原的鸡卵黄抗体IgY作为包被抗体,以抗ES抗原的小鼠单抗IgM作为检测抗体,建立监测旋毛虫CAg的双抗体夹心ELISA方法;应用棋盘滴定法,选择包被抗体、待测血清、检测抗体及酶结合物的最佳稀释度,并测定方法的敏感性。结果双抗体夹心ELISA检测旋毛虫CAg的最佳条件为:IgY包被浓度为7.5μg/ml,血清稀释度为1︰60,单抗稀释度为1︰2000,辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgM抗体稀释度为1︰2000。该方法检测旋毛虫CAg的敏感性为1ng/ml。结论建立的旋毛虫CAg双抗体夹心ELISA法具有较高的敏感性,有望用于旋毛虫病的早期诊断。 刘莉娜 崔晶 甘冠华 潘亮 陈琳 乔呈瑞 王中全关键词:旋毛虫 循环抗原 IGY 单克隆抗体 夹心ELISA 海南、福建及山东部分地区蛙类曼氏裂头蚴感染调查 被引量:6 2014年 目的了解海南、福建及山东部分地区主要蛙类曼氏裂头蚴的自然感染情况。方法2013年7~8月分别在海南(海口、定安县及万宁市)、福建(三明市)及山东(德州市)的农村池塘、河流及农贸市场采集蛙类,剖检曼氏裂头蚴并进行统计学分析。结果共检查蛙340只,发现曼氏裂头蚴感染者32只,总感染率为9.41%(32/340);共检出曼氏裂头蚴77条,平均感染强度为2.41条/只(77/32)。福建、海南、山东3省蛙类的裂头蚴感染率分别为26.09%、5.97%及2.86%(x^2=28.823,P<0.05),感染强度由高到低依次为海南(2.58)、福建(2.44)和山东(1.00)。结论海南、福建及山东部分地区均存在蛙类自然感染曼氏裂头蚴的现象。 王翠 魏彤 肖丽梅 韩雨旋 吴德福 陈晨 刘莉娜 张玺 刘若丹 姜鹏 崔晶 王中全关键词:蛙类 曼氏裂头蚴