降风
- 作品数：8 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市青年科技晨光计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 出血性卒中患者血浆和脑脊液内皮素含量测定及其临床意义
- 内皮素(ET)是一种具有强烈缩血管效应的多肽.一些实验和临床研究表明它可能在蛛网膜下腔出血(SAH)伴发的脑血管痉挛(CVS)中起作用.该研究应用放射免疫法测定38例脑出血(ICH)患者血浆和32例SAH患者血浆及脑脊液...
- 降风
- 关键词：内皮素血浆脑脊液蛛网膜下腔出血脑血管痉挛
- 慢病毒介导的cdk4基因沉默在C型Niemann-Pick病神经元变性中的研究
- 第一部分、小鼠Cdk4-siRNA表达载体的构建和鉴定。
目的：前期研究发现，细胞周期中Cdk4/cyclinD1-pRb-E2F1这一信号转导通路的异常激活在npc-/-小鼠神经元变性机制中发挥了一定的作用，...
- 降风
- 关键词：C型NIEMANN-PICK病神经元变性慢病毒载体HEK293细胞重组质粒
- 细胞周期依赖性蛋白激酶-5在C型尼曼-皮克病神经元变性中的作用
- 2009年
- 目的确定细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin dependent kinases-5,cdk5)在C型尼曼-皮克病(Niemann-Pickdisease type C,NPC)神经元变性过程中的作用,为NPC的临床治疗提供可能的药物作用靶点。方法将针对cdk5基因的si RNA序列克隆入rAAV-2载体,对4周龄npc-/-小鼠进行小脑rAAV-cdk5-si RNA-GFP注射(n=8),以空载体病毒(rAAV-GFP)注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=8)。在干预后4周连续观察小鼠脑内cdk5水平及小鼠神经生化和病理的改变。结果注射后1周可见针道附近、小脑深部核团及浦肯野细胞出现绿色荧光蛋白表达。与空载体病毒组相比,注射4周后小鼠脑内cdk5的表达水平降低34.17%(P<0.05,n=6);轴突球状体数量减少30.76%(P<0.05,n=6),存活浦肯野细胞数增加300%(P<0.05,n=8);细胞骨架蛋白磷酸化程度降低16.32%(P<0.05,n=6)。结论rAAV2-cdk5-si RNA小脑注射,能显著减轻npc小鼠神经生化和病理改变。cdk5的激活在NPC神经元变性过程中起到了关键性的作用,有可能成为NPC治疗的新靶标。
- 李俐娟张旻王雪贞郝又国魏佳军降风丁志刚张苏明卜碧涛
- 关键词：C型尼曼-皮克病神经元变性小分子干扰RNA
- 小鼠TNF-α基因RNAi慢病毒载体的构建及体外研究被引量：1
- 2009年
- 目的为探讨TNF-α在C型Niemann-Pick病(NPC)神经变性中的作用,构建携带小鼠TNF-α-si RNA的慢病毒载体并进行体外研究。方法设计3个TNF-α-si RNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSI H1-H1-copGFP si RNA载体;重组质粒转染293T细胞,通过实时定量PCR检测筛选出干扰效果最佳的TNF-α-si RNA;筛选出的pSI H-si RNA、pSI H-negative分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒;慢病毒感染BV-2细胞和星形胶质细胞,采用RT-PCR以及Elisa检测TNF-α-si RNA的沉默效果。结果成功构建携带TNF-α-si RNA的慢病毒载体,滴度达2×108ifu/L;慢病毒感染BV-2和星形胶质细胞,表达GFP且可下调TNF-α表达。结论TNF-α-si RNA能明显下调TNF-α的表达,为研究和治疗神经变性疾病以及TNF-α相关疾病提供了有力的工具。
- 王雪贞曾莉降风唐荣华张旻卜碧涛
- 关键词：慢病毒载体神经系统变性疾病RNA干扰
- 小鼠CDK4基因RNAi慢病毒载体的构建及体外研究
- 2008年
- 目的:探讨CDK4在神经系统变性疾病中的作用,并构建携带小鼠CDK4-siRNA的慢病毒载体进行体外研究。方法:设计3个CDK4-siRNA序列和1个无关对照序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体。重组质粒经PCR和测序鉴定后,脂质体介导下转染BV-2细胞,Western blot检测CDK4的表达,筛选出干扰效果最佳的pSIH1-siRNA2。将对照序列和pSIH-siRNA2分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。结果:慢病毒感染BV-2细胞后可表达GFP,RT-PCR和Western blot检测CDK4的表达明显下降。结论:成功构建携带CDK4-siRNA的慢病毒载体,体外研究显示其能明显下调CDK4的表达。
- 降风王雪贞卜碧涛张苏明张旻
- 关键词：CDK4神经系统变性疾病慢病毒载体
- 携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒对C型尼曼-皮克病小鼠行为学的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察携带cdc2～小干扰RNA（cdc2-siRNA）的重组腺相关病毒（rAAV）小脑注射对C型尼曼-皮克病（NPC）小鼠行为学的影响。方法2周龄npc^-/-小鼠经小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV，动态测量小鼠体重，并进行衣架悬挂实验及足印实验评估小鼠4～8周的运动能力。结果（1）cdc2-siRNA组小鼠体重减轻明显延缓；（2）衣架悬挂实验显示cdc2-siRNA组小鼠运动缺陷明显改善；（3）足印实验显示cdc2-siRNA组相对步距[（75．1±8．6）％]与对照病毒组及非手术组相比明显增加。结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV改善了npc^-/-小鼠的行为学，有可能为NPC的治疗提供新的有效途径。
- 魏佳军张旻卜碧涛张苏明徐金枝王雪贞降风郝又国李丽娟
- 关键词：神经元变性小干扰RNAC型尼曼-皮克病重组腺相关病毒
- 携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒对C型尼曼-皮克病小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用
- 2009年
- 目的评估经小脑注射携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV)对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠神经元细胞骨架损伤是否具有保护作用。方法将携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒(rAAV)注射入2周龄npc-/-小鼠的小脑,采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察该病毒对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用。结果(1)携带cdc2-siRNA的rAAV明显减少npc-/-小鼠轴突球状体的数量;(2)携带cdc2-siRNA的rAAV有效抑制磷酸化的神经丝(由SMI31识别)及磷酸化的Tau蛋白(由PHF-1识别)的表达。结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损害具有保护作用。
- 魏佳军张旻张苏明降风
- 关键词：C型尼曼-皮克病
- C型Niemann-Pick病神经原纤维缠结的形成与特征
- 2008年
- 目的探讨C型尼曼-皮克病（NPC）脑部神经原纤维缠结（NFT）形成的时相特征。方法以17例年龄7个月至55岁的NPC患者为研究对象，采用tau蛋白和有丝分裂期相关抗体进行免疫组织化学染色和银染，分析患者脑内NFT形成的特点。结果最早可在4岁的患者海马旁回发现典型的NFT形成，随年龄增长数量逐渐增多。在形态上与阿尔茨海默病（AD）所见高度相似，但未发现老年斑。在NPC中，有丝分裂期磷酸化表位早于tau蛋白过度磷酸化及NFT形成。结论NFT形成并非老龄化过程的结果，且与老年斑的存在与否并无关联。cdc2／cyclinB1可能是NFT形成的关键性早期事件，针对其活性的抑制剂对于早期干预NPC NFT的形成有重要意义。
- 张旻降风魏佳军王雪贞王伟Inez Vincent卜碧涛
- 关键词：尼曼-皮克病神经原纤维缠结TAU蛋白质类磷酸化
