袁红花
- 作品数：57 被引量：112H指数：5
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- 小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究
- 2012年
- 目的探讨小鼠胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达。方法通过RT—PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的eDNA，将该基因亚克隆入重组质粒p1（peDNA3．1-Nestin—EGFP）中，构建重组质粒p2（peDNA3．1-Nestin—EGFP—IGF-1），脂质体转染COS-7细胞，ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量。结果克隆IGF-1基因eDNA与GenBank中该基因序列-致，重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白。结论IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中，且能在COS-7细胞中过表达。
- 彭长凌朱裕华张丽袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1小鼠克隆转染
- 钙粘附蛋白N-cadherin基因RNAi质粒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建有效的小鼠神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)基因RNA干扰质粒载体。方法:在小鼠基因库中选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,然后将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pSilencerTM 3.1-H1 hygro质粒并分别命名为pSicad1、pSicad2、pSicad3、pSi-control。酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染MN9D细胞,用Western Blot和半定量RT-PCR方法检测N-cadherin基因mR-NA和蛋白的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencerTM 3.1-H1 hygro质粒,与对照组相比,pSicad2和pSicad3转染MN9D细胞后,N-cadherin mRNA和蛋白水平的表达均受到明显抑制,其中N-cadherin蛋白水平在pSicad3组下降50%(P<0.01)。结论:结果表明已成功构建了小鼠N-cadherin基因RNAi质粒载体,为N-cadherin功能研究奠定了基础。
- 孙申高秀先朱圆圆朱孝先袁红花高殿帅
- 关键词：RNA干扰质粒载体
- 新生大鼠少突胶质前体细胞低糖缺氧损伤模型的建立被引量：3
- 2011年
- 目的:利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)低糖缺氧损伤模型。方法:取新生1 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质,体外混合及纯化培养获得OPCs,O4免疫荧光染色鉴定;取纯化2 d的OPCs,分为正常组和Na2S2O4损伤组,Na2S2O4损伤组又分为0.5、1 h和1.5 h三组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构。结果:免疫荧光染色鉴定显示纯化的细胞绝大部分为O4阳性;形态学观察显示,缺氧0.5 h,大部分细胞突起回缩,胞体变圆,颜色变暗,随低糖缺氧损伤时间的延长OPCs逐渐脱壁,1.5 h时只有少数贴壁细胞;CCK-8法检测显示损伤0.5、1 h和1.5 h组细胞的存活率显著降低,与正常组比较均有统计学意义,损伤后1.5 h与0.5 h比较,细胞的存活率具有显著性差异;电镜观察损伤1.5 h后的细胞,线粒体肿胀,有些细胞胞核固缩成块,细胞器破碎。结论:用浓度为2mmol/L Na2S2O4的低糖培养基处理OPCs 1.5 h可以建立有效的低糖缺氧损伤模型。
- 姚瑞芹王兴启刘轩于红丽袁红花杨丽华
- 关键词：少突胶质前体细胞细胞培养连二亚硫酸钠低糖
- 小鼠酪氨酸羟化酶启动子克隆被引量：3
- 2008年
- 为了克隆小鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究,本实验采用重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达。然后分别转染MN-9D细胞(TH+)和ECV细胞(TH-),观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果显示:扩增出小鼠TH启动子序列与GenBank报道一致;单酶切和质粒PCR鉴定证实小鼠TH启动子和EGFP基因已经克隆入重组质粒中;小鼠TH启动子能调控EGFP在MN-9D细胞中表达,不能调控EGFP在ECV细胞内表达。初步确定克隆的小鼠TH启动子具有特异性调控目的基因表达的能力。
- 朱孝荣高秀先朱园园袁红花孙怀昌高殿帅
- 关键词：PCR转染小鼠
- 多巴胺能神经细胞损伤过程中NCAM-140的表达变化
- 2010年
- 目的:检测NCAM-140在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和western blotting检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和NCAM-140的表达情况。结果:在小鼠中脑黑质一直有NCAM-140阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,NCAM-140在给予MPTP后第一周至第三周持续高表达,并且从第四周开始,其表达量明显降低。结论:NCAM-140的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。
- 王婷滕达刘美英刘亚萍袁红花高秀先高殿帅
- 关键词：黑质多巴胺能神经细胞
- HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定
- 2013年
- 利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究。根据GenBank中报道的皮蝇素A(Hydermin A,HA)一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91.2%、目的多肽分子量为28kD。将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体。采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28kD,与预测分子量相符。该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具。
- 袁红花王珍珍陈仁金胡安康张腾业吴连连冀德君朱孝荣
- 关键词：HA多肽多克隆抗体
- 脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备
- 2012年
- 目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。
- 吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1转基因小鼠
- 普来升口服液对免疫功能低下小鼠的调节作用被引量：1
- 1997年
- 普来升口服液主要成份为胎盘因子，本文以环磷酰胺建立免疫功能低下的小鼠模型，观察该制剂对实验小鼠免疫功能的调节作用。结果表明可使小鼠白细胞数及淋巴细胞转化率得到恢复，与胎盘因子注射组相比效果一致（Ｐ＞０．０５）。本研究为该制剂的临床应用提供了依据。
- 朱斌陈彦袁红花
- 关键词：胎盘因子环磷酰胺免疫调节
- HSV1-TK/GCV自杀基因系统治疗卵巢癌的体内杀伤作用被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirustypeⅠthymidinekinase,HSV1TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)自杀基因系统对卵巢癌的体内治疗效果。方法:用携带TK基因的重组逆转录病毒转染人卵巢癌细胞系SKOV3,用G418筛选抗性克隆(命名为SKOV3/TK)。PCR方法检测TK基因整合情况。将SKOV3和SKOV3/TK细胞按不同比例混合培养,给与10mg/LGCV治疗,观察体外旁观者效应。再分别用含有不同SKOV3/TK浓度的细胞建立荷瘤鼠模型作为3个TK基因转染组,并以接种单纯SKOV3细胞的动物模型作为对照组。TK基因转染组均行GCV20mg/(kg·d)腹腔注射共9d,对照组给等体积生理盐水腹腔注射。绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,并取瘤细胞做病理学检查。结果:体外混合培养细胞显示明显BSE,当SKOV3/TK细胞数占混合细胞数20%时,10mg/LGCV就可将约50%的混合细胞杀死。体内实验显示,20%、40%和100%TK基因转染组肿瘤体积与对照组比较,抑瘤率分别为38%、61%和99%,各组间两两比较差异有统计学意义,P<0.01(除20%TK基因转染组和40%TK基因转染组P值为0.001外,其余各组间P值均<0.001)。病理结果显示,TK基因转染组出现不同程度点、片状坏死,以100%TK基因转染组最重,残存的肿瘤均为坏死组织。结论:HSV1TK/GCV自杀基因系统对荷人卵巢癌皮下瘤裸鼠模型的肿瘤具有杀伤作用,同时存在BSE。这种杀瘤作用随着TK基因转染率的提高而增强。
- 徐梅吴强孙志华袁红花朱孝荣刘清华
- 关键词：基因疗法肿瘤细胞转染
- 心肌微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化(英文)被引量：4
- 2012年
- 背景:骨形态发生蛋白、Wnt、Notch、FGF及Hedgehog等信号通路是否参与诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化还不清楚。目的:探讨心肌微环境中,不同刺激因素诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及其分化的机制。方法:利用Transwell培养装置建立心肌微环境,骨髓间充质干细胞在此环境中培养并加入Wnt11、骨形态发生蛋白抑制剂诱导其向心肌细胞分化;应用RT-PCR、Western blot方法检测骨形态发生蛋白、Wnt、Notch、FGF和Hedgehog信号通路关键信号分子的表达。同时检测心肌特异性转录因子(Nkx2.5、GATA4、Mef2c)和成熟心肌细胞特异性基因(cTnI、ANP、α-MHC、β-MHC)的表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞经过与大鼠心肌细胞共培养诱导后,Wnt、骨形态发生蛋白、Notch、Hedgehog信号通路关键信号分子的表达较未诱导的阴性对照组明显升高(P<0.01)。在骨髓间充质干细胞与大鼠心肌细胞共培养体系中加入骨形态发生蛋白信号通路的抑制剂Noggin,心肌特异性转录因子或结构蛋白的表达明显降低(P<0.01)。提示心肌细胞构成的微环境可以诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞;Wnt、骨形态发生蛋白、Notch、FGF、Hedgehog信号通路共同参与了诱导分化过程。
- 胡波高攀马志峰张志峰张中明袁红花董红燕
- 关键词：心肌微环境骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2心肌样细胞
