肖巍
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MiR-519d靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5637增殖被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨miR-519d对膀胱癌细胞系5637增殖的影响及分子机制。方法:通过转染miRNA mimics在膀胱癌细胞系5637中过表达miR-519d,分别利用MTS及细胞集落形成试验,检测膀胱癌细胞系5637增殖能力的改变。通过双荧光素酶报道实验和Western Blot方法验证miR-519d对OCT4的靶向调控。利用OCT4特异性干扰RNA证实miR-519d通过靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5673增殖。结果:在膀胱癌细胞系过表达miR-519d后,细胞活性、增殖能力明显下降;双荧光素酶报道实验结果表明,相对于各对照组,共转染OCT4 3'UTR载体与miR-519d组荧光素酶相对活性明显降低(P<0.05)。过表达miR-519d后5637细胞中OCT4蛋白表达下调。利用siRNA特异性下调OCT4表达后,5637细胞活性及增殖能力同样受到抑制。结论:miR-519d能靶向结合OCT4 3'UTR序列,通过下调OCT4的表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖。
- 戴劲肖巍袁晓奕陈志强叶章群
- 关键词：OCT4膀胱癌增殖
- 连接桥粒斑珠蛋白通过调节HIF2α并降低其稳定性抑制肾细胞癌的肿瘤发生
- 2022年
- 背景与目的低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 2α,HIF2α)活性增高常见于肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的进展过程。HIF2α在ccRCC中的功能和作用机制仍不清楚。本研究阐释了连结桥粒斑珠蛋白(junction plakoglobin,JUP)和HIF2α在ccRCC中的作用。方法采用亲和纯化联合质谱(affinity purification and mass spectrometry,AP-MS)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-s-transferase,GST)沉降和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法筛选和鉴定出可与HIF2α相互作用的蛋白质。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting法检测人ccRCC样本中JUP的表达情况。采用荧光素酶报告基因、染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)、环己酰亚胺追踪实验、泛素化检测研究JUP对HIF2α活性的调节。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测、集落形成实验、transwell迁移实验、异种移植瘤模型研究JUP敲减或过表达对肾癌细胞致瘤活性的影响。结果我们的研究发现,JUP是一种新的HIF2α结合蛋白,通过将VHL(von Hippel-Lindau,VHL)和组蛋白去乙酰化酶1/2(histone deacetylases 1/2,HDAC1/2)招募到HIF2α并调节其稳定性和转录活性来发挥重要作用。在体内和体外实验中,敲减JUP可促进肾细胞癌的致瘤活性;相反,JUP过表达则可抑制肾细胞癌的致瘤活性。另外,在ccRCC临床样本中JUP低表达,而且其低表达与低氧评分升高及预后更差相关。结论本研究表明JUP在ccRCC进展过程中通过调节HIF2α信号通路发挥重要作用,JUP可作为一个潜在的治疗靶点。
- 陈科曾瑾孙旖欧阳为余淦余淦张杨军周辉肖巍胡峻珲姚炜敏肖克峰肖巍陈志强叶章群邢金春
- 关键词：肾细胞癌转录活性
- Fibulin-5基因慢病毒表达载体的构建与鉴定
- 2012年
- 目的构建Fibulin-5基因的慢病毒表达载体。方法从pBluescript-Fibulin5质粒中克隆出Fibulin-5基因,将其连同慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCS-EF1双酶切,使目的基因连接到载体质粒中,构建成重组慢病毒载体质粒pCDH-F5。对重组慢病毒载体质粒pCDH-F5进行酶切鉴定和测序鉴定后,制备包装病毒并感染膀胱癌细胞系5637,检测细胞中Fibulin-5基因的表达水平。结果构建的重组慢病毒载体质粒pCDH-F5进行PCR及酶切鉴定,获得的克隆和酶切产物与预计的基因片段大小一致。所获得的Fibulin-5基因经测序后与报道序列对比仅有1处突变,且属同义突变,说明pCDH-F5中携带正确的Fibulin-5基因。通过感染5637细胞,发现构建的慢病毒转染效率达95%以上,且能有效表达Fibulin-5基因。结论实验成功构建了Fibulin-5基因的慢病毒表达载体。
- 李恒肖巍余淦杨洋徐华叶章群
- 关键词：FIBULIN-5慢病毒表达载体
- 人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建被引量：1
- 2013年
- 背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT-PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。
- 王博涵余虓余淦李恒肖巍徐华叶章群
- 关键词：慢病毒载体DNA测序泌尿系肿瘤
- 肝癌生物样本库的标准化建立与信息化管理被引量：4
- 2022年
- 目的建立一个小型的拥有标准化操作流程和信息化管理功能的肝癌生物样本库。方法根据纳排标准,在患者签署知情同意书基础上,收集2012年8月—2020年12月就诊于华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科的肝癌患者血液、组织和粪便样本,并按照全血、血清、冻存组织、石蜡包埋组织和粪便等不同样本的标准流程进行出入库管理,同时采集患者临床信息及其随访信息。通过随机抽取不同年份的肝癌及癌旁冷冻组织样本,检测总RNA的浓度和完整性,确保样本库冷冻样本保存质量。结果101个自然月共收集4190例肝癌手术患者样本,其中包括41718份冷冻组织样本、18950份石蜡包埋组织样本、24389份全血样本、20060份血清样本和5392份粪便样本。所收集肝癌患者的年龄范围是13~88岁,男性占比85.1%,乙型肝炎和肝硬化的比例分别是83.3%和73.5%。根据样本的收集、处理、保存、应用及信息化管理,制定出一份标准的操作流程(SOP)和一套电子数据采集系统(EDC)。从样本库随机抽取的18份冷冻组织样本中,其中16份样本RNA质量较高,可满足后续实验需求。结论建立了标准化和信息化的肝癌生物样本库,为肝癌基础研究提供了高质量的样本保障,能挖掘样本更多的研究价值。
- 喻晶晶肖巍李娅妮张必翔陈孝平舒畅
- 关键词：肝肿瘤数据收集生物样本库
- 雄激素受体剪接突变体7和雄激素受体表达量的比值在预测前列腺癌内分泌治疗预后中的作用被引量：12
- 2018年
- 目的分析雄激素受体（androgen receptor, AR）和雄激素受体剪接突变体7（androgen receptor splice variant-7, AR-V7）表达量的比值（AR-V7/AR）预测前列腺癌内分泌治疗预后的作用。方法采用免疫组化染色法检测2010年1月至2015年12月我院行内分泌治疗的136例前列腺癌患者的活检穿刺标本，以HS评分评估其表达量。患者年龄53～96岁，中位年龄71岁。确诊时中位tPSA为110.00 ng/ml（2.61～4 003.40 ng/ml），中位fPSA为14.62 ng/ml（0.12～640.19 ng/ml），中位PSA密度为1.15 ng/（ml·cm^3）[0.02～62.63 ng/（ml·cm^3）]。Gleason评分≥8分88例（64.7%），7分39例（28.7%），〈7分9例（6.6%）；T3期57例（41.9%），T4期54例（39.7%），Tx期25例（18.4%）；N0期46例（33.8%），N1期62例（45.6%），Nx期28例（20.6%）；M0期30例（22.1%），M1期97例（71.3%），Mx期9例（6.6%）。利用Cox模型分析患者各临床因素对前列腺癌内分泌治疗预后的影响，采用Kaplan-Meier法分析AR-V7/AR对前列腺癌内分泌治疗预后的预测作用。结果本组136例中79例（58.1%）AR表达阳性，其中26例（19.1%）AR-V7表达阳性。Spearman相关性分析结果显示，AR与AR-V7的表达无相关性（r＝0.042, P＝0.629）。本组136例中位随访时间为44个月（15～71个月）。中位疾病无进展生存时间（PFS）为19个月（5～59个月）；中位总生存时间（OS）为31个月（12～61个月）。AR-V7阳性患者较阴性患者有较短的中位PFS（10.8个月与25.0个月，P〈0.001）和中位OS（20.3个月与42.8个月，P〈0.001）；高AR-V7/AR值患者较低AR-V7/AR值患者有较短的中位PFS（12.0个月与24.8个月，P〈0.001）和中位OS（22.5个月与42.8个月，P〈0.001）。在Cox单因素回归分析中，确诊时Gleason评分、前列腺癌T分期、tPSA、PSA密度、AR-V7/AR值可预测内分泌治疗的预后。在Cox多因素回归分析中，T4期（HR＝2.597，95% CI 1.351～4.995，P＝0.004）和高
- 王之泽张宇聪丁北辰肖巍刘聪李恒叶章群
- 关键词：前列腺肿瘤雄激素受体内分泌治疗预后
