熊萍
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 淋病奈瑟菌孔蛋白B原核重组质粒的构建、表达与蛋白鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的克隆和分析淋病奈瑟菌孔蛋白(porinⅠB,PⅠB)的基因序列并表达相应的蛋白质,为淋病奈瑟菌感染的检测和基因工程疫苗的研究与开发建立基础。方法PCR扩增出孔蛋白PⅠB DNA片段后构建出重组质粒pET-PⅠB,并经质粒酶切筛选、DNA测序和异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导大肠埃希菌DE3表达蛋白予以证实。结果所得PⅠB核苷酸序列与GenBank(AF090801)公布的序列相比较,同源性达99.28%,推导氨基酸序列同源性为98.14%。SDS-PAGE检测到40 kD大小的融合蛋白。结论淋病奈瑟菌孔蛋白PⅠB原核表达质粒构建正确。
- 叶嗣颖廖芳宋启发崔斌熊萍
- 关键词：淋病奈瑟菌原核表达质粒
- 淋球菌膜蛋白疫苗的研究
- 2004年
- 目的 :设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统 ,测定表达蛋白的免疫活性。方法 :PCR扩增淋球菌膜蛋白( PIA)基因片段 ,构建重组质粒 ,重组质粒宿主菌经 IPTG诱导 ,用 SDS- PAGE分析 PIA的表达情况。淋球菌标准株免疫 BAL B/c小鼠 ,体外凝集检测动物血清的免疫效果及 EL ISA法检测 PIA的免疫活性。结果 :成功构建表达 PIA蛋白的重组质粒 ,SDS-PAGE电泳图上显示 1条相对分子量 ( Mr)约为 4 0 KDa的新生条带 ,能与免疫血清发生特异性结合反应。结论 :淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确 ,表达蛋白 PIA具有免疫活性 。
- 廖芳李雍龙宋启发崔斌熊萍
- 关键词：淋球菌重组质粒
- 淋球菌孔蛋白PIB和PIA融合蛋白真核表达载体构建及体内表达
- 2006年
- 目的克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达。方法采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核表达载体pCI-PIB-PIA。pCI-PIB-PIA肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ABC法检测pCI-PIB-PIA免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB和PIA基因片段。与GenBank报道的PIB和PIA序列比较,重组质粒pCI-PIB-PIA中目的插入片段的核苷酸序列同源性达到99%以上。免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB-PIA并表达PIB-PIA融合蛋白。结论本研究成功地构建了淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因重组真核表达载体pCI-PIB-PIA;pCI-PIB-PIA接种小鼠后可见免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达,该结果可作为淋球菌多价DNA疫苗的研究基础。
- 廖芳贺超戴翔宋启发熊萍
- 关键词：淋球菌孔蛋白融合蛋白
- 81例女性淋病患者孔蛋白基因型分布及与相应多克隆抗体的反应特性
- 2005年
- 目的:采用PCR和探针技术分析临床淋病奈瑟菌野生株孔蛋白基因的基因型,并和相应多克隆抗体进行反应以检测基因突变对抗原性的影响。方法:采用PCR技术从淋病奈瑟菌野生株中扩增出特征性的孔蛋白基因片段,再用探针检测相应的高变区情况,以区分不同的准种(亚型),最后分别与原核表达的标准菌株孔蛋白多克隆抗体进行反应,观察相应的滴度。结果:孔蛋白基因型为A型的有35例,其余46例为B型。孔蛋白A型基因型变化较小,与抗体的反应性较一致;孔蛋白B型基因型变化稍大,但不影响与多克隆抗体的反应活性,A型与B型存在交叉反应,但活性较低,滴度<1∶40。结论:通过分析不同孔蛋白基因型淋病奈瑟菌与相应多克隆抗体的反应情况,有助于考察孔蛋白原核表达产物的生物学效应,对于人工合成出能针对绝大多数临床基因变异菌株的探针用于检测或治疗性抗体的制备有重要意义。
- 宋启发廖芳叶嗣颖崔斌熊萍万沐芬
- 关键词：淋病奈瑟菌孔蛋白基因型多克隆抗体
- 淋球菌主要外膜蛋白PIA原核重组质粒的构建及序列分析被引量：4
- 2004年
- 目的构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因的pET重组质粒,分析其编码序列。方法根据PIA已知序列设计一对引物,用PCR技术从淋球菌捷克标准株中扩增PIA;将目的基因PCR产物和质粒pET28a(+)同时用BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶进行双酶切,纯化回收后将其连接并将重组质粒转化大肠杆菌DH5α。将构建的重组质粒pET28a(+)-PIA通过PCR、质粒双酶切、DNA测序证实获得正确的重组克隆。结果成功构建PIA基因原核重组质粒pET28a(+)-PIA。序列分析表明,其携带的PIA基因序列与GenBank中公布的淋球菌(AF090818)的PIA序列具有很高的同源性,其同源性达到99.9%。结论成功构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因重组表达载体,有助于更深入地分析其基因功能,为后期淋球菌的临床检测和基因疫苗研制打下基础。
- 熊萍廖芳叶嗣颖宋启发崔斌杨利
- 关键词：淋球菌重组质粒
