张黎颖
- 作品数：126 被引量：188H指数：7
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HBV XTP12蛋白反式激活基因的上调基因
- 为筛选与克隆乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能线索,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin-formatics)技术筛选并克降XTP12反式激活的新型靶...
- 宫嫚成军纪冬刘妍郭江张黎颖李筠
- 关键词：X蛋白反式激活抑制性消减杂交
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因被引量：3
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1反式激活的新型靶基因．方法:以HBV DNAPTP1表达质粒pcDNA3．1(-)- DNAPTP1 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建 cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析．结果:成功构建DNAPTP1反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库．文库扩增后得到60个白色克隆,经菌落PCR分析,得到32个200-1 000 bp插入片段．对所得片段测序,并进行同源性分析,获得3个差异表达的已知蛋白基因和4个未知功能的染色体序列．结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了DNAPTP1可能存在的调控机制的线索．
- 高学松成军甄真郭江张黎颖陶明亮
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节抑制性消减杂交
- SSH技术筛选β干扰素真核表达载体转染细胞的下调基因
- 2006年
- 筛选β-干扰素质粒转染下调相关基因。以β-干扰素表达质粒pcDNA3.1(-)-IFNβ转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将来自pcDNA3.1(-)转染的cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adaptor1和adaptor2衔接,再与来自pcDNA3.1(-)-IFNβ转染的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。成功构建人β-干扰素质粒转染下调相关基因差异表达的cDNA。所获得的50个克隆中,随机挑选37个克隆均含有插入片段,将这些克隆进行序列测定,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得22种编码基因,其中3种为未知功能的基因。筛选到的cDNA序列,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因。
- 钟彦伟成军曲建慧张黎颖郭江李晓东
- 关键词：Β-干扰素下调
- 应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2结合的肝细胞蛋白编码基因被引量：1
- 2008年
- 目的构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2(HBEBP2)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与HBEBP2相互作用的基因。方法通过PCR扩增获得HBEBP2基因,构建真核表达载体pGBKT7-HBEBP2,转化酵母菌AH109并在其中进行表达。随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆。提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-HBEBP2共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆。挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析。结果筛选出6种与HBEBP2相互作用的蛋白,其中包括人类线粒体蛋白、人类α-2-糖蛋白1、人类磷酸甘露糖-p-长醇利用缺陷1和人类丝氨酸蛋白酶抑制剂等4个已知功能蛋白及2个未知功能序列。结论筛出人肝细胞中一组与HBEBP2相互作用的蛋白,为进一步探讨HBEBP2在HBV致病过程中的作用奠定了基础。
- 梁赟磊成军邢卉春王琦李越张斌樊万虎袁菊张黎颖洪源
- 关键词：双杂交系统技术蛋白质相互作用
- 丙型肝炎病毒核心蛋白上调诱导型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的研究
- 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白对诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因启动子转录的激活作用。方法:利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动...
- 郭风劲成军刘妍纪冬张黎颖王琳王巧侠宋方洲
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白一氧化氮合酶基因启动子
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒F蛋白反式激活基因2的表达纯化及多克隆抗体制备被引量：3
- 2008年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活基因2(FTP2)的原核表达载体并诱导其表达,制备多克隆抗体并探讨其在临床病理组织中表达的意义。方法通过PCR获得HCVFTP2基因,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)上,构建重组表达载体,在大肠埃希菌BL21中诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blotting验证后进行大量表达并纯化。将纯化的重组蛋白免疫家兔获得多克隆抗体,并将此抗体作为诊断试剂观察其在正常肝组织和临床病理组织中的表达情况。结果以pET32a(+)-FTP2表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得大量重组蛋白,分子量约为25kD。将此重组蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,经抗体间接ELISA检测证明,多克隆抗体效价>1:128000,免疫组化显示多克隆抗体能够与丙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌等临床病理组织产生FTP2抗原反应。结论成功表达了HCV的FTP2蛋白并制备了其多克隆抗体,证实FTP2与丙型肝炎、肝硬化的发病机制密切相关。
- 王丹琼郭江成军张健康赵龙凤洪源张黎颖
- 关键词：肝炎病毒原核表达
- HBsAg基因启动子ⅠDNA结合蛋白1对诱导型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的双向调节作用
- 目的:探讨HBV表面抗原基因启动子I DNA结合蛋白1(SBP1)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 基因启动子转录的调节作用。方法:利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,...
- 郭风劲成军纪冬刘妍王琳张黎颖宋方洲
- 关键词：基因启动子双向调节作用结合蛋白HBSAGDNA
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCV FTP2的反式调节基因
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式调节靶基因FTP2的反式激活基因的cDNA文库,克隆 FTP2反式激活基因。方法:以HCV FTP2表达质粒pcDNA3．1(-)-HCV FTP2转染HepG2细胞,以空载体p...
- 郭江成军赵龙凤纪冬高学松刘妍张黎颖戴久增
- 关键词：反式调节基因抑制性消减杂交技术FTP
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术筛选转化生长因子β1刺激LX02细胞的反式调节基因被引量：4
- 2008年
- 目的构建转化生长因子（TGF）β1刺激大鼠肝星状细胞（LX02）反式调节基因的cDNA消减文库，筛选并克隆TGFβ1反式调节相关基因，以阐明TGF β1介导肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGFβ1刺激LX02细胞，同时以磷酸盐缓冲液刺激的LX02细胞作为对照。提取mRNA并逆转录为cDNA，经Rsa I酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应。将产物与pGEM-Teasy载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增；随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到146个200～1000bp插入片段的阳性克隆；随机挑取其中35个克隆进行测序，30个列序成功，并通过生物信息学分析发现有28个与已知基因序列和2个与未知功能基因序列高度同源。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库，筛选到一些与细胞生长调节、蛋白质合成、信号传导、细胞外基质代谢、抗脂质过氧化等密切相关的蛋白质编码基因，为进一步阐明TGFβ1介导肝纤维化的分子生物学机制提供了线索。
- 肖琳成军郭江张黎颖洪源伦永志蓝贤勇武会娟张丽娟张跃新张建龙李燕
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞转化生长因子Β
- 自身免疫性肝炎临床和免疫学特点分析
- 目的:了解自身免疫性肝炎(AIH)患者的临床和免疫学特点。方法:回顾性分析142例AIH患者的一般资料、临床特点、生化检查、免疫学检查和自身抗体的结果。结果:142例AIH患者男女比例1:2．67,发病年龄为(52．6±...
- 李蕴铷张黎颖王文彬欧蔚娓谢雯魏来
- 关键词：免疫性肝炎免疫学特点肝细胞损伤
- 文献传递
