左小虎
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一种具有甘露糖化修饰的溶菌酶及其应用
- 本发明涉及一种具有甘露糖化修饰溶菌酶及其应用，所述溶菌酶经过N-糖基化修饰，具体这种糖化为甘露糖化修饰，修饰位点为N-X-S/T，其中X为除脯氨酸外的氨基酸。本发明还提供了所述甘露糖化修饰溶菌酶的制备方法，其是通过人工添...
- 吴军刘波巩新唱韶红左小虎马清钧
- 文献传递
- 甘露糖化hLYZ/eGFP融合蛋白的表达纯化及巨噬细胞定位被引量：1
- 2012年
- 目的利用毕赤酵母表达蛋白具有高甘露糖修饰的特性,在毕赤酵母中表达甘露糖化修饰的人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ);进而利用巨噬细胞(macrophage,MR)表面的甘露糖受体(mannose receptor,MR)将甘露糖化的人溶菌酶内吞入胞,为研究可入巨噬细胞杀灭其胞内感染菌的人溶菌酶提供基础。方法为使人溶菌酶可以在酵母中产生N-甘露糖化修饰,在人溶菌酶的C端设计2个N-糖基化位点;通过在其C端融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP),观察人溶菌酶在巨噬细胞RAW264.7中的亚细胞定位;同时在其C端引入了His标签便于融合蛋白的纯化。毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP与RAW264.7共孵育,借助激光共聚焦显微镜观察该融合蛋白能否进入RAW264.7;通过巨噬细胞甘露糖受体(macrophage mannose receptor,MMR)的竞争性配体甘露聚糖(mannan)的阻断实验,检测甘露糖化的人溶菌酶是否通过MMR介导内吞。结果毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白是相对分子质量(Mr)为(66～97)×103的弥散条带,肽N-糖苷酶F(PNGaseF)酶切后,该融合蛋白变为Mr均一的条带,与非糖基化hLYZ/eGFP融合蛋白的理论Mr一致。该融合蛋白与RAW264.7共孵育后,可见细胞质中存在eGFP的绿色荧光,而加入甘露聚糖可以抑制这一现象发生。结论毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白为高甘露糖型糖基修饰蛋白,该蛋白可以通过MMR介导内吞进入巨噬细胞。
- 左小虎刘波巩新唱韶红胡晓李海燕张部昌曹诚吴军
- 关键词：人溶菌酶EGFP巨噬细胞甘露糖
- 一种具有甘露糖化修饰的溶菌酶及其应用
- 本发明涉及一种具有甘露糖化修饰溶菌酶及其应用，所述溶菌酶经过N-糖基化修饰，具体这种糖化为甘露糖化修饰，修饰位点为N-X-S/T，其中X为除脯氨酸外的氨基酸。本发明还提供了所述甘露糖化修饰溶菌酶的制备方法，其是通过人工添...
- 吴军刘波巩新唱韶红左小虎马清钧
- 毕赤酵母表达甘露糖化人溶菌酶研究
- 胞内菌的治疗是目前临床医疗的难题之一。如结核分枝杆菌、沙门伤寒菌、嗜肺军团菌等胞内菌,它们通常寄生在人体吞噬细胞内,往往会对人体造成慢性持续性感染。当这些病菌侵染人体后会被吞噬细胞吞噬,但吞噬细胞不能像裂解大肠杆菌等非胞...
- 左小虎
- 关键词：毕赤酵母人溶菌酶糖基化EGFP
- 文献传递
