孙晓林
- 作品数：15 被引量：23H指数：4
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析
- 旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机理,通过组织病理学观察和免疫组织化学,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR 和MAPK 信号通路中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38 和p...
- 孙晓林杜方原刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白MAPK信号转导通路
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的原核表达
- 2012年
- 为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体。利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列,预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位,在线分析囊膜基因原核表达稀有密码子,根据分析结果选取囊膜蛋白的两段基因分别表达,命名为env-1和env-2。以本实验室构建好的pCDNA3.
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白原核表达密码子扩增片段克隆技术
- 绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究被引量：10
- 2014年
- 为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env。exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有外源性病毒特有的YXXM基序。系统进化树也表明我们克隆的exJSRV-env基因属于致病性的外源性病毒。运用生物信息学技术分析env基因编码的蛋白质的基本性质,并预测其可能的结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。说明绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白可引起NIH3T3细胞发生恶性转化。研究结果为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。
- 张宇飞刘月王专家孙晓林刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的表达可促进NIH3T3细胞增殖被引量：5
- 2016年
- 目的研究外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(ex JSRV Env)对NIH3T3小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法构建含完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(ex ISRV-env)的重组质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env,并鉴定其正确性。采用脂质体转染技术pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞,利用反转录PCR和Western blot法检测Env的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测Env表达对NIH3T3细胞增殖的影响。结果成功构建了含ex JSRV-env的重组真核表达质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env;以重组质粒瞬时转染NIH3 T3细胞,检测到JSRV Env蛋白的表达,CCK-8法和平板克隆形成实验结果表明转染pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env的细胞增殖速度显著高于对照组(空白及阴性)细胞。结论 NIH3T3细胞表达的JSRV Env蛋白可促进NIH3 T3细胞的增殖。
- 杜方原陈大勇张宇飞孙晓林郭文庆刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白细胞增殖
- 绵羊肺腺瘤病毒转化和肿瘤发生中参与的信号通路研究
- 通过应用Western-blot和免疫组化方法来评估磷酸化蛋白的信号脉冲和评估转化抑制剂的效应可以研究绵羊肺腺瘤病毒JSRV转化和肿瘤发生中参与的信号通路。据报道JSRV Env在细胞转化中主要有三种信号转导通路。第一种...
- 孙晓林杜方原刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒磷酸化信号通路肿瘤发生
- 文献传递
- 外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析
- 旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(ex JSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机理,通过组织病理学观察和免疫组织化学,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-J...
- 孙晓林杜方原刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白MAPK信号转导通路
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白B细胞抗原表位预测
- 2012年
- 为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推导的氨基酸序列,与绵羊肺腺瘤病毒代表株JSRV21(AF105220)和JSRVJS7(AF357971.1)的囊膜蛋白氨基酸序列比较同源性均为99.5%。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病B细胞抗原表位NM囊膜蛋白GENBANK
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测被引量：3
- 2013年
- 利用生物信息学预测绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)NM株囊膜蛋白优势抗原表位,为寻找用于绵羊肺腺瘤病诊断和预防的候选抗原表位提供参考。参照OPAV-NM株env基因序列(登录号:JQ837489),应用Gamier-Robson方法、SOPMA方法和网络服务器PSIPRED、Predictprotein预测OPAV-NM株囊膜蛋白的二级结构。用Kyte-Doolittle方法预测蛋白质的疏水区和亲水区,用Emini方法预测蛋白质表面可能性,以Jamson-Wolf方法预测蛋白的抗原指数,利用Bcepred、IEDB、ABCpred网络服务器预测囊膜蛋白的抗原性,然后综合评价囊膜蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,囊膜蛋白(ENV)二级结构丰富,α螺旋和β折叠所占比例相对较多,也具有多处转角及无规则卷曲区域,提示OPAV-NM囊膜蛋白具有较多的优势抗原表位区段。这些优势抗原表位分别为第52～76,101～110,118～165,182～196,201～215,281～305,309～332,335～356,461～476,530～574位氨基酸,其中第461～476位和第530～574位的部分氨基酸序列位于胞外区,且第530～574区段位于en-OPAV和ex-OPAV的囊膜氨基酸序列的差异区,该段氨基酸序列对绵羊肺腺瘤病毒疫苗和诊断方法的研究有重要意义。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白B细胞表位
- 蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞的体外培养与鉴定
- 2012年
- 为了体外获得高纯度的绵羊绒毛膜滋养层细胞,为后续的细胞转染和RNA干扰试验提供细胞基础。本试验经过培养不同孕期(早、中、晚)蒙古绵羊滋养层细胞,通过分析胎盘的采集时间对细胞的贴壁率及细胞活性的影响,确定采集胎盘的最佳时期为孕中期。通过添加不同浓度的血清,筛选出含15%胎牛血清的DMEM培养体系较好,细胞形态及生物特性保持不变。
- 刘慧张宇飞孙晓林刘淑英
- 关键词：绒毛膜滋养层细胞细胞基础细胞转染组织块法
- 外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析被引量：7
- 2016年
- 旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机制,通过组织病理学观察和免疫组织化学染色,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区,通过Western blot检测Erk1/2和p38在病肺中的磷酸化水平。转染重组表达质粒pcDNA 4/myc-His/exJSRV-env到A549细胞中,通过Western blot检测Erk1/2和p38的磷酸化水平。通过CCK-8法检测转染重组表达质粒的A549细胞的增殖活力。免疫组化结果显示:JSRV Env蛋白主要表达于病肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR在病肺组织中过表达于肺泡上皮细胞,脱落的肿瘤细胞及间质细胞中,而在健康绵羊肺中只是少量表达于肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞中,p-Erk1/2和p-p38在病肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR、p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区均与Env蛋白的阳性表达区一致。Western blot结果显示:病肺中p-Erk1/2和p-p38的磷酸化水平均极显著高于健康肺组织,转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞中p-Erk1/2和p-p38的表达量均极显著高于对照组细胞,说明exJSRV-env确实激活了A549细胞的MAPK通路。而CCK8结果显示:转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞增殖活力显著高于对照组细胞,说明exJSRV-env可能是通过激活的EGFR/MAPK通路促进A549细胞的恶性增殖,进而促使肿瘤的发生。本研究为进一步探索绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的致病机制奠定了基础。
- 孙晓林杜方原刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白MAPK信号转导通路
