刘进
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 减毒沙门菌为载体的PspA优势抗原组合DNA疫苗对肺炎链球菌定植的防御作用评价
- 2013年
- 目的评价以减毒沙门菌为载体携带PspA不同家族亚类优势抗原的肺炎链球菌DNA疫苗对不同侵袭性肺炎链球菌定植的防御作用,探讨优化肺炎链球菌DNA疫苗增强鼻咽部黏膜免疫的策略。方法应用分子克隆技术,在前期研究基础上,制备携带PspA不同家族亚类优势抗原(PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3)的减毒沙门菌为宿主菌的非抗性基因筛选的真核质粒-宿主致死平衡系统,应用RT-PCR和免疫印迹技术检测优势抗原的表达情况,并在含或不含DAP的SOB培养基中传代培养,抽提质粒PCR检测疫苗携带抗原的稳定性。以PBS为对照,口服免疫接种BABL/c小鼠,ELISA检测鼻咽部sIgA的水平;应用小鼠鼻咽部定植模型检测疫苗对不同侵袭性肺炎链球菌定植的防御作用。结果成功构建出携带PspA不同家族亚类优势抗原(PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3)的减毒沙门菌为宿主菌的非抗性基因筛选的真核质粒-宿主致死平衡系统,且稳定性好;免疫小鼠鼻咽部抗PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3的特异性sIgA的水平显著高于对照组(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植模型的菌落计数较对照组明显减少(P<0.01)。结论以减毒沙门菌为载体携带PspA不同家族亚类优势抗原是增强肺炎链球菌DNA疫苗鼻咽部黏膜免疫的优化策略。
- 张巧刘进刘聚伟万敏吴颖李瑾王长征马千里
- 关键词：黏膜免疫减毒沙门菌
- 轻型链球菌临床分离株psaA基因敲除株的构建及其毒力影响的初步研究
- 2013年
- 目的构建轻型链球菌(S.mitis)临床分离株S.mitis008肺炎链球菌表面蛋白A(psaA)基因敲除菌株S.mitis00801,并检测其生长及毒力影响,为进一步分析轻型链球菌属细菌间psaA基因水平转移的功能学意义奠定基础。方法采用长臂同源多聚酶链反应技术(LFH-PCR)构建含红霉素耐药基因(erm)片段及psaA基因上、下游同源序列的连接片段,并转化至S.mitis008中,在含红霉素的平板上筛选psaA基因敲除菌株,并采用PCR鉴定;进一步观察psaA基因敲除株S.mitis00801体外生长情况,并利用小鼠模型观察S.mitis008和S.mitis00801鼻咽部定植能力的差异。结果 PCR结果均证实轻型链球菌psaA基因敲除菌株S.mitis00801构建成功;S.mitis008和S.mitis00801体外生长情况比较无差异;在轻链球菌CBA/n小鼠鼻咽部定植模型中,psaA基因敲除菌株S.mitis00801定植能力较未敲除株S.mitis008明显减少,存在统计学差异(P<0.01)。结论 LFH-PCR技术构建psaA基因敲除菌株S.mitis00801方法切实可行,psaA基因的敲除对细菌的体外生长无影响,但降低了细菌在体内鼻咽部定植的能力。
- 张巧林科雄刘聚伟李瑾王长征马千里刘进
- 关键词：基因敲除
