刘勇
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：阿肯色医科大学更多>>
- 发文基金：北京市科技新星计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带不同HBV抗原基因片段的重组腺相关病毒转染树突状细胞诱导CTL的效应研究被引量：1
- 2016年
- 目的了解携带不同HBV抗原基因片段的重组腺相关病毒(rAAV-HBV-S、C、E、X)转染慢性乙型肝炎患者来源的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的效应。方法采用携带不同HBV抗原基因片段的rAAV-HBV-S、C、E、X转染慢性乙型肝炎患者外周血中分离出的单核细胞,并在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下继续培养7d获得成熟的DC。通过观察DC的状态和流式细胞仪(FACS)检测各段HBV转染后DC分化抗原(CD)的表达,评价其成熟与功能。将同一个体的DC与T细胞混合培养制备CTL,通过四甲基偶氮唑盐(MTS)细胞杀伤实验研究被激活的CTL对HBV感染的靶细胞HepG2.2.15特异性的细胞毒作用。结果不同HBV抗原基因rAAV-HBV-S、C、E、X转染DC后CD14、CD80、CD83、CD86的表型表达中,CD80、CD83差异有统计学意义(P<0.05);rAAV/HBV-X转染的DC其CD80表达最高,rAAV/HBV-S转染的DC其CD83表达最高。转染不同HBV抗原基因片段rAAV(S、C、E、X)的DC诱导的CTL对MHC-Ⅰ类抗原阳性且有HBV的靶细胞(HepG2.2.15)的特异性杀伤效率显著高于对无HBV的靶细胞(HepG2)的非特异性杀伤效应(P<0.01),但不同rAAV-HBV组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rAAV-HBV-S、C、E、X转染DC均可诱导CTL引起MHC-Ⅰ依赖的特异性细胞毒效应。
- 安选刘勇向毅魏芳夏莉娜钟庆杜彪巫贵成
- 关键词：腺相关病毒
- 腺相关病毒Rep78蛋白对乙型肝炎病毒C基因的抑制作用被引量：6
- 2005年
- 目的 研究腺相关病毒(AAV)Rep78蛋白对乙型肝炎病毒C基因(HBV-C)的抑制作用及机制。 方法 以pEOB6(含有HBV全长的质粒)为模板,聚合酶链反应法分别扩增出HBV-C启动子基因及含有HBV-C启动子的HBV-C基因。利用pMAL-Rep78体外扩增得到Rep78蛋白。以凝胶电泳阻滞实验检测Rep78与HBV-C启动子的结合,体外转录实验观察Rep78对HBV-C转录的影响。 结果 聚合酶链反应法扩增出了的HBV-C启动子基因(182 bp)及含有HBV-C启动子的HBV-C基因(789 bp)。凝胶电泳阻滞实验结果显示Rep 78与HBV-C启动子结合,呈剂量依赖性并可以被Rep 78抗体阻滞。体外转录实验显示Rep78明显抑制HBV-C的转录。 结论 AAVRep78可以通过与HBV-C启动子结合抑制HBV-C的转录。
- 阎钟钰丛敏王萍唐淑珍王宝恩贾继东刘勇尤红
- 关键词：C基因腺相关病毒乙型肝炎病毒蛋白聚合酶链反应法凝胶电泳
- 含乙型肝炎病毒C基因的重组腺相关病毒对树突状细胞的作用被引量：6
- 2005年
- 目的 研究腺相关病毒(AAV)为载体的含有乙型肝炎病毒(HBV)C基因重组病毒(rAAV-HBV-C)感染树突状细胞(DC)的效率及对DC生长和成熟的影响。 方法 从正常人外周血中分离单个核细胞收取单核细胞进行体外培养,分别用rAAV-HBV-C和293细胞裂解物感染刺激单核细胞,感染后的单核细胞在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF α)存在的条件下继续培养获得成熟的DC。用逆转录聚合酶链反应及流式细胞仪细胞内染色检测目的基因(HBV-C)的转录及表达;通过观察不同时间DC的形态及检测收获DC时其表面分化抗原(CD)的表达来评价DC的生长和成熟状态。 结果 rAAV-HBV-c感染后的DC可转录HBV-C基因并表达HBV-C抗原,病毒感染组与对照组收获的DC在细胞形态与CD表达方面差异无统计学意义。 结论 rAAV-HBV-C可有效感染DC,感染的病毒对DC的生长及成熟没有显著影响。
- 丛敏王萍阎钟钰唐淑珍王宝恩贾继东刘勇尤红
- 关键词：HBV乙型肝炎病毒单核细胞C基因
