付云洁
- 作品数：11 被引量：62H指数：4
- 供职机构：武汉工业学院生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学农业科学生物学更多>>
- ELISA法测定热加工食品中的丙烯酰胺被引量：15
- 2011年
- 该研究建立了热加工食品中丙烯酰胺的间接竞争ELISA检测方法。首先用戊二醛法合成丙烯酰胺-BSA免疫抗原,注入兔体内以产生抗丙烯酰胺多克隆抗体。结果显示,在包被抗原为1.5μg/mL,抗体稀释度为1∶16000倍的优化条件下,间接ELISA法检测范围为50μg/L～1280μg/L,IC50为检测限为350μg/L,最低检测限为50μg/L。加标回收率为92.6%～95.5%。该检测方法准确快速,特异性强,适用于热加工食品中丙烯酰胺的快速检测。
- 付云洁李琦陈江源王岚李睿周帼萍刘志国
- 关键词：丙烯酰胺多克隆抗体ELISA
- 隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2013年
- 研究制备孔雀石绿(MG)代谢物隐性孔雀石绿(LMG)多克隆抗体进而间接鉴定鱼体中孔雀石绿的残留。首先利用化学方法合成含羧基的隐性孔雀石绿衍生物(CLMG),然后采用碳化二亚胺法偶联牛血清白蛋白(BSA)合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗隐性孔雀石绿多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附实验(iELISA)测定抗血清中抗隐性孔雀石绿多克隆抗体效价。结果表明:抗隐性孔雀石绿的抗体效价为1:32000,可用于隐性孔雀石绿的免疫学检测。
- 梁莉甜刘志国付云洁尹欢马寅众李奎
- 关键词：多克隆抗体酶联免疫吸附
- 麦角碱的提取与分离纯化被引量：4
- 2010年
- 通过大孔树脂D-101吸附法提取雀稗麦角菌发酵液中麦角总碱粗品。采用硅胶薄板层析确定粗品组分及洗脱条件,进行碱性硅胶柱低压层析,单因素实验确定洗脱溶剂的比例及洗脱次数,最终分离纯化得到麦角总碱,计算总回收率。结果表明:总生物碱回收率为77.6%。硅胶层析分离上样量与硅胶质量比为1∶20,去杂洗涤剂为氯仿:甲醇=5∶1(V/V)的混合液,依次洗涤5次。用氯仿-甲醇2∶1(V/V)的洗脱剂洗脱,得到麦角总碱;从雀稗麦角菌发酵液中提纯麦角碱法回收率及纯度较高,具有广阔的应用前景。
- 曾丽娟李琦刘志国马寅众付云洁
- 关键词：纯化
- 三聚氰胺免疫层析试纸检测方法研究被引量：3
- 2008年
- 研究免疫层析试纸方法快速检测样品三聚氰胺残留。采用戊二醛法和重氮法分别合成三聚氰胺-明胶和三聚氰胺-牛血清白蛋白,作为免疫抗原和检测抗原。按常规方法制备抗三聚氰胺多克隆抗体并用胶体金标记。制作免疫层析试纸,通过观察金标抗体在试纸条上检测线的呈色现象,判断样品中三聚氰胺的残留量。结果表明,本方法可在15分钟以内完成检测,检测限为1.0μg/mL,可应用于牛奶等样品中三聚氰胺残留的快速检测。
- 刘志国付云洁房国梁韩增飞
- 关键词：三聚氰胺胶体金斑点金免疫渗滤法
- 雀稗麦角菌原生质体诱变育种及发酵条件研究被引量：1
- 2009年
- 为获得麦角碱高产菌株,提高雀稗麦角菌(Claviceps paspali strain3103)发酵的产碱率,用溶壁酶水解处理菌丝体、不同浓度的亚硝基胍诱变处理制备的原生质体,经再生培养获得诱变菌株,再经紫外初筛后进行发酵复筛,采用Van-Urk方法测定产碱量。筛选得到的高产菌株进行二级发酵并优化其发酵条件。实验结果表明,经亚硝基胍诱变处理,麦角总碱的产率由90mg/L提高到了1600mg/L,增加了约16倍;单位产碱率由22.5mg/L/g提高到了400mg/L/g,增加了约17倍;连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,接种量为20%时可有效缩短发酵周期。结果表明,用亚硝基胍对原生质体进行诱变处理可有效提高C.papspali的产碱率。
- 韩增飞刘志国曾丽娟房国梁付云洁
- 关键词：原生质体亚硝基胍诱变育种发酵
- 苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究被引量：2
- 2009年
- 研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体。采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶，按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体。采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价。结果表明，苏丹红Ⅰ抗体的效价为1：8000，可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测。
- 付云洁刘志国武玉香
- 关键词：多克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 蛋白G IgG Fc段结合域的克隆表达及功能研究被引量：1
- 2009年
- 旨在研究蛋白G IgG Fc段结合域(PGFB)的克隆、表达及其抗体结合功能,用于抗体的纯化。根据PGFB的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了4个寡核苷酸片段。通过重叠延伸PCR方法合成了PGFB DNA片段,测序鉴定后克隆至原核表达系统pET-28a-c(+)上,转化大肠杆菌,获得表达菌株;IPTG诱导表达PGFB,经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化后偶联到琼脂糖凝胶6B上,用其纯化多克隆抗体。结果显示,PGFB在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后纯度达到90%以上,相对分子量为12.25 kD,与预期值相符。此外,偶联产物纯化多克隆抗体达到了良好的效果,每毫升基质可结合20 mg抗体。本研究克隆构建并高效表达了具有较好抗体亲和能力的PGFB,为多克隆抗体的快速纯化提供了方便。
- 房国梁刘志国宗义强张大川曾丽娟付云洁屈伸
- 关键词：IGG多克隆抗体原核表达
- 胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究
- 2012年
- 目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。
- 陈江源刘洁蔡建中付云洁刘志国
- 关键词：多克隆抗体ELISA胶体金试纸条
- 不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较被引量：3
- 2011年
- 采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。
- 张大川付云洁刘志国梁莉甜李琦
- 关键词：多克隆抗体亲和层析法凝胶电泳
- 胶体金免疫层析法快速检测食品中苏丹红I残留被引量：9
- 2009年
- 通过设计合成苏丹红I衍生物,将其与明胶用混合酸酐法合成苏丹红I-明胶免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗苏丹红I多克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为24.5 nm的胶体金,并制备苏丹红I-BSA抗原-胶体金复合物,组装检测试纸。实验结果表明,试纸条法的苏丹红I检测线为15μg/kg,抗苏丹红I抗体与苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均无交叉反应性,与高效液相测定差异不显著。检测时间5min,适用于食品中苏丹红I残留的快速检测。
- 付云洁刘志国武玉香
- 关键词：苏丹红I酶联免疫吸附测定胶体金
