葛春喜
- 作品数：13 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定被引量：10
- 2000年
- 目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。【结果】获得了1条长240bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%～46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为333%、329%和299%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。
- 周国理黄炯烈姚其方詹希美葛春喜王玲
- 关键词：伊蚊属杀虫剂抗药性基因扩增
- 转基因技术在蚊媒防治中的应用被引量：2
- 2002年
- 葛春喜黄炯烈陈观今
- 关键词：转基因技术
- 白纹伊蚊对登革病毒细胞内免疫的研究
- 本研究扩增和克隆登革病毒C基因和prM基因,构建了昆虫表达载体pBhspEGFP,将prM基因以3种不同表达形式重组入昆虫表达载体,WesternBlot和荧光显微镜观察证明在白纹伊蚊C6/36细胞中成功表达了prM-E...
- 葛春喜
- 关键词：登革病毒白纹伊蚊C6/36细胞细胞内免疫
- 白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因的原核表达及鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的 对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法 根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行原核表达。将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,通过Westernblot分析鉴定目的蛋白的位置 ,并运用核酸蛋白分析仪扫描凝胶以确定表达产物的含量。结果 获得了高效表达的融合蛋白GST -CYP6N3,表达量占菌体总蛋白的 37 4 9%。结论 本实验成功地异源表达了白纹伊蚊CYP6N3基因 ,为体外重建细胞色素P4 5 0CYP6N3单加氧酶系 。
- 吴瑜黄炯烈周国理葛春喜王玲
- 关键词：白纹伊蚊细胞色素P450原核表达
- 白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析被引量：1
- 2002年
- 【目的】PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌 Wolbachia16SrRNA序列 ,分析其种系发生关系及传播方式。【方法】从单只雌蚊中提取DNA ,PCR法扩增 16SrRNA序列 ,扩增产物进行克隆及测序。【结果】从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16SrRNA序列 ,并克隆入 pGEM T载体 ,测序证明两序列长度分别为 897bp。【结论】成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16SrRNA序列。测序和同源性分析表明 ,它们之间的同源性为 99 9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。
- 葛春喜黄炯烈陈观今潘实清吴瑜王玲
- 关键词：伊蚊属库蚊属WOLBACHIA种系发生致倦库蚊
- 白纹伊蚊CYP6cDNA片段克隆、鉴定
- 该研究根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,旨在从白纹伊景中获得CYP6家庭中新的成员,为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成...
- 葛春喜
- 关键词：CDNA片段克隆白纹伊蚊同源性分析
- 文献传递
- 利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因
- 2002年
- 【目的】构建突变型α L 艾杜糖醛酸酶基因 (IDUA)cDNA ,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础。【方法】以野生型pcDNA3 IDUA为基础质粒 ,采用双引物法体外定点诱变技术 ,引入突变E40 4X。【结果】突变区域经PCR SSCP和测序证实诱导突变成功。【结论】本研究成功构建了突变型IDUAcDNA ,可用于下游的体外表达 ;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点 ,是体外构建突变型基因的一种有效方法。
- 于洪枫曾瑞萍葛春喜林群娣
- 关键词：定点诱变基因体外表达基因突变
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6 cDNA片段克隆、鉴定被引量：2
- 2000年
- 根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,从白纹伊蚊四龄期活体幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T-A克隆法,将获得的基因片段克隆人pGEM-T easy载体。经限制性内切酶酶切和PCR鉴定证明重组成功。将筛选的阳性克隆经序列测定及同源性分析,表明共获得CYP6家族中9个的新cDNA序列。为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成的分子机制打下基础。
- 葛春喜黄炯烈周国理王玲姚其方
- 关键词：白纹伊蚊多样性抗药性同源性分析
- 登革病毒转基因载体pB[PUBnls-EGFP-prM]的构建及其在C6/36细胞中整合作用的检测被引量：2
- 2003年
- 为利用转基因技术来探索新的蚊媒疾病防治方法 ,将登革病毒前膜蛋白基因prM重组入以转座子piggyBac因子为基础的载体 ,构建了昆虫转基因载体pB[PUBnls_EGFP_prM],在辅助质粒的作用下共同转染白纹伊蚊AedesalbopictusC6 36细胞。PCR和Southernblot证明构建的转基因载体可以将EGFP_prM基因整合入蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥功能 。
- 葛春喜黄炯烈陈观今吴瑜于洪枫
- 关键词：转座子
- 登革病毒prM基因真核表达载体的构建及在白纹伊蚊细胞C6/36中的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 构建登革病毒prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达。方法 将prM基因亚克隆入真核表达载体 pEGFP -N3,转化大肠杆菌JM 10 9,筛选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定 ,将获得的重组质粒以脂质体法转化白纹伊蚊C6 / 36细胞并使其表达 ,利用RT -PCR法检测目的基因的转录 ,Western -blot检测融合蛋白的表达。结果 成功构建了 pEGFP -prM重组质粒 ,RT -PCR证明 prM基因在蚊细胞内的转录 ,Western -blot检测到 prM -GFP融合蛋白的表达。结论 成功构建登革了病毒 prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达 。
- 葛春喜黄炯烈陈观今吴瑜王玲
- 关键词：登革病毒WESTERNBLOT真核表达伊蚊
