肖飞
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- γ干扰素诱导蛋白-10的硫氧还基因融合表达、纯化及生物活性检测被引量：1
- 2005年
- γ干扰素诱导蛋白-10是由γ干扰素刺激单核细胞、内皮细胞等所诱导产生趋化T淋巴细胞的一类分泌性糖蛋白。本研究PCR扩增人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10的成熟蛋白编码区,克隆到硫氧还载体pET-32(a)进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:在IPTG诱导下,人与鼠的γ干扰素诱导蛋白-10表达量约占目标总蛋白的25.3%,主要以包含体的形式存在,可溶性成分约占目标总蛋白的20%。将可溶性蛋白以S-Tag亲和层析柱进行纯化,纯化的蛋白质纯度约为90%的γ干扰素诱导蛋白-10。通过趋化性分析,证实重组表达的人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10在100ng/ml浓度下对激活的T淋巴细胞具有趋化活性。
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- 关键词：基因融合生物活性
- MIG(CXCL9)表达载体构建及体外活性鉴定
- 2006年
- 目的构建M IG(CXCL 9)真核表达载体,为利用M IG研究肿瘤基因治疗奠定基础。方法从pBLA ST-M IG上切下含M IG全长的cDNA序列,定向插入pORF-m cs真核表达质粒,构建pORF-M IG重组质粒;然后经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染CO S-7细胞;再进一步用免疫印迹法鉴定重组质粒的表达活性,用趋化试验鉴定生物学活性。结果pORF-M IG重组质粒经酶切分析和测序证实含有M IG的全长cDNA序列,转染CO S-7细胞后高效表达M IG蛋白,对活化的淋巴细胞有趋化作用。结论成功构建了M IG(CXCL 9)真核表达质粒,为进一步利用pORF-M IG研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。
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- 关键词：趋化因子转染肿瘤基因治疗
- Vasostatin重组腺病毒的构建和体外表达的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 构建 vasostatin重组腺病毒表达载体 ,并进行体外表达研究。方法 根据 Gen Bank中提供的钙网蛋白序列 ,设计并合成引物 ,以人骨骼肌 c DNA文库为模板用 PCR扩增出人 vasostatin基因 ,将其克隆入 T载体。经酶切及测序鉴定后亚克隆至穿梭载体 ,与经过限制酶处理的骨架腺病毒载体 DNA- TPC复合物共转染 2 93细胞。用 Western blot检测体外表达。结果 PCR扩增出约 5 90 bp产物 ,测序结果与文献报道一致。用 PCR及Western blot证实重组腺病毒构建成功 ,能有效的表达出 vasostatin蛋白。结论 vasostatin重组腺病毒载体能有效的在体外表达出
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- 关键词：VASOSTATIN腺病毒基因治疗
