肖潇
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 叉头转录因子1基因沉默对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察叉头转录因子1(Forkhead transcription factor 1,FoxO1)基因沉默对水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)在正常人肝细胞L-02中表达的影响。方法将4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4及阴性对照质粒FoxO1-NP经脂质体介导瞬时转染L-02细胞,荧光显微镜下观察转染效率,筛选FoxO1基因沉默效率最佳的干扰质粒转染的肝细胞,经RT-PCR及Western blot法从mRNA及蛋白水平检测其对AQP9表达的影响,并在转染后不同时间点,经荧光定量PCR检测AQP9的转录时间谱。结果 4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,与对照组相比,AQP9在L-02细胞中的mRNA及蛋白水平的表达均下降,且差异均有统计学意义(P<0.05);AQP9的表达随着转染后时间的延长而降低,在转染后60 h达抑制峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FoxO1基因沉默对AQP9在正常人肝细胞中的表达有明显的影响,为下一步采用染色质免疫共沉淀技术研究不同时间点FoxO1与AQP9启动子区IRE结合水平的动态变化提供了依据。
- 肖潇梅浙川邱烈旺刘卉吕琳
- 关键词：叉头转录因子类RNA干扰
- 胰岛素对人肝细胞L02水通道蛋白9表达的影响及其调控通路被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨胰岛素对人肝细胞株L02细胞膜上水通道蛋白9（AQP9）表达的调控及其调控通路. 方法 体外培养正常人肝细胞L02,分别给予磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、丝/苏氨酸激酶（AKT）抑制剂A-4-43654,丝裂酶原激活蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB2030580及不同浓度胰岛素干预,逆转录-聚合酶链反应及Western blot检测肝细胞AQP9的mRNA和蛋白质表达.组间数据比较采用单因素方差分析.结果 从胰岛素100 nmol/L开始,AQP9的mRNA和蛋白质表达降低（分别为0.55±0.08和0.59±0.08）,胰岛素浓度为500 nmol/L时降低最明显（分别为0.39±0.05和0.40±0.06）,与对照组相比,差异有统计学意义（P值均〈0.05）.从胰岛素作用后3 h开始,AQP9转录逐渐降低,12 h时抑制作用明显,AQP9的InRNA和蛋白质相对表达量分别为0.53±0.08和0.54±0.08（P值均〈0.05）.PI3K抑制剂LY294002及AKT抑制剂A-443654能有效阻断胰岛素对AQP9表达的影响 而MAPK抑制剂SB2030580则对胰岛素刺激AQP9表达无明显作用. 结论 人正常肝细胞膜上AQP9的表达受胰岛素调控,且与PI3K-AKT通道相关.
- 刘卉梅浙川肖潇
- 关键词：胰岛素1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶水通道蛋白9
