管伟
- 作品数：44 被引量：139H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 复合探针PCR定量检测HBV方法的建立及临床应用被引量：7
- 2001年
- 何云燕王升启陈苏红陈忠斌王小红管伟管伟
- 关键词：HBV荧光定量检测血清乙型肝炎
- HBV耐药相关DNA突变体的构建及在寡核苷酸基因芯片分析中的应用被引量：2
- 2002年
- 拉米呋啶(Lamivudine)是近年来开发成功的一种治疗HBV慢性感染病人的核苷类药物。随着拉米呋啶在临床上广泛使用,HBV耐药现象已成为临床实践中的棘手问题。建立HBV耐药测定技术成为HBV基础研究和临床实践中企待解决的一个重要问题。寡核苷酸芯片(Oligochip)是近年来发展并逐步成熟的一种高通量基因检测技术,已成功应用于基因突变快速和高通量检测。本研究在构建HBV拉米呋啶抗性相关HBV多聚酶基因突变体基础上,设计并制备了HBV耐药寡核苷酸芯片(HBV-LamOligochip)。根据HBV拉米呋啶抗药性相关突变主要位于HBV多聚酶基因的L526、A546、M550和V553等氨基酸位点,设计了28条寡核苷酸探针。探针对应序列为HBVDNA聚合酶基因反义链,HBVHBVhb长度为15-18nt。探针合成时在其3'端接氨基和间隔臂(spacer)等特定修饰;探针纯化与定量后,用基因芯片点样仪点到醛基修饰载玻片上,制成HBV耐药寡核苷酸芯片(HBV-LamOligochip)。为了分析基因芯片的性能,克隆了833号HBV病人血清中HBVDNA聚合酶基因,测序证实为HBVDNA野生型(即未发生突变)。以该DNA为模板,用PCR法构建了HBV耐药相关突变体。用HBV-LamOligochip对HBV野生型DNA和人工构建DNA突变体进行了检测。结果发现,HBV-LamOligochip能有效检测出野生型DNA序列。
- 陈忠斌高玮管伟王升启
- 关键词：拉米呋啶DNA聚合酶寡核苷酸基因芯片突变体
- 丙型肝炎病毒5’NCR转基因细胞模型及在反义核酸药物筛选和评价中的应用被引量：2
- 2001年
- 为了进行以基因为靶的抗丙型肝炎病毒(HCV)药物的筛选及评价,将HCV5＇NCR-C基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入pCI-neo表达载体,通过PCR扩增、酶切反应及荧光素酶瞬间表达活性鉴定,获得HCV 5＇NCR调控荧光素酶的稳定表达质粒pHCV-neo4,将其转染HepG2细胞,经C418筛选,从150个克隆中获得一个高荧光素酶活性表达的细胞株HepG2.9706.该株细胞内HCV片段的DNA及mRNA检测均呈阳性,转基因拷贝数为140.利用该细胞株,通过脂质体介导,对3条针对HCV调控基因的反义寡核苷酸(ASODNs)即HCV363,HCV349,HCV279进行了活性评价,结果显示,三种ASODNs均具有特异性的剂量依赖性抑制活性,浓度在0.5μmol/L时,三者对HCV 5＇NCR调控荧光素酶表达抑制率分别为61％,55％及48％.该研究提示反义寡核苷酸有可能成为治疗HCV的新途径.
- 王小红王升启管伟毛秉智
- 关键词：丙型肝炎病毒反义寡核苷酸荧光素酶药物筛选药物评价
- 抑制端粒酶活性反义寡核苷酸结构及用途
- 本发明涉及一种生物工程产品及其用途,具体地说是根据编码人端粒酶hEST2蛋白质亚基基因结构设计了反义寡核苷酸序列。这类寡核苷酸与所述部分基因杂交后会阻止人端粒酶hEST2蛋白质亚基的合成,从而抑制恶性肿瘤细胞的生长。该寡...
- 王升启郑晓飞朱宝珍邢瑞云管伟孙志贤
- 文献传递
- 反义寡核苷酸药物癌泰得的定性分析方法研究被引量：3
- 2001年
- 癌泰得 (ACTCACTCAGGCCTCAGACT)为端粒酶表达抑制活性反义寡核苷酸 .为了探讨其定性检测手段 ,通过阴离子交换高效液相色谱和毛细管凝胶电泳分析方法 ,确定了该硫代寡核苷酸以及与其有关的短序列和部分未被硫代类似物的保留时间 ,并分析了不同混合物样品 .结果表明 ,阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸骨架上的差异非常敏感 ,可很好地分离长度相同的硫代和未完全硫代类似物 ,并且随未被硫代磷酸基数目增加 ,保留时间依次缩短 .阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸的长度不敏感 ,不能分离相差一个碱基的硫代寡核苷酸 .毛细管凝胶电泳可很好地分离长度相差一个碱基的硫代寡核苷酸 ,不能分离同长硫代和部分硫代寡核苷酸 .高效液相色谱结合毛细管凝胶电泳可有效地确定癌泰得的纯度和修饰程度 .
- 杨秉呼管伟王升启
- 关键词：癌泰得反义寡核苷酸端粒酶阴离子交换HPLC
- 端粒酶hEST2基因为靶的反义寡核苷酸体外抗肿瘤活性评价被引量：5
- 2002年
- 根据端粒酶在肿瘤细胞中活性较高而在正常细胞中不表达的特性,针对端粒酶催化亚基hEST2mRNA的二级结构设计了12条反义寡核苷酸,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,筛选出具有较强抗肿瘤活性的反义寡核苷酸hEST212,进一步对反义寡核苷酸进行了抗肿瘤特异性、抗瘤谱和抗肿瘤作用持续性分析.结果表明,反义寡核苷酸hEST212在体外细胞水平具有良好抗肿瘤活性,有望成为一种新型抗肿瘤候选药物;同时提示端粒酶催化亚基hEST2是研究肿瘤药物的潜在靶点.
- 王升启林莉陈忠斌林汝仙陈苏红管伟王小红
- 关键词：端粒酶反义寡核苷酸抗肿瘤活性抗肿瘤药物
- HCV 5'NCR调控抑制活性的反义寡核苷酸的筛选被引量：2
- 2000年
- 目的寻找高效特异的新型抗HCV药物,探讨针对HCV基因的硫代修饰反义寡核苷酸（S－ASODNs）最佳作用靶序列。方法参考HCV5＇NCR计算机预测的二级结构图,设计合成了15条S-ASODN、3条正义寡核苷酸及1条随机序列，采用HCV5＇NCR调控荧光素酶基因的瞬时表达系统，将S－ASODN与pHCV－neo4共转染，通过荧光素酶活性表达高低，反映S－ASODN对HCV调控基因的抑制活性。结果5条S－ASODN即HCV65、HCV279、HCV363、HCV349及HCV352在25～100nmol／L浓度范围内，对HCV调控基因具有特异性的剂量依赖性抑制活性。当浓度为100nmol／L时，这些ASODN的抑制率可达80％以上，IC_(50)值提示HCV363的抑制活性最强。通过阴性对照实验包括正义寡核苷酸、随机序列及不含HCV序列的靶载体pGL3提示ASODN仅存在轻度非特异性作用。此外，实验结果还提示不同作用靶位的ASODN之间具有一定的协同作用。结论HCV5＇NCR第二茎环结构Ⅱa、第三茎环结构Ⅲd和翻译起始区可能是ASODN作用的重要靶序列。
- 王升启王小红管伟李梦东
- 关键词：反义寡核苷酸HCV丙型肝炎
- 以胰岛素样生长因子受体1基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究被引量：9
- 2002年
- 以胰岛素样生长因子受体 - 1基因为靶筛选抗肿瘤药物 .根据IGF1RmRNA的二级结构设计了 9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化 ,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析 .结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性 ,具有剂量依赖性关系 ,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性 .
- 林莉王升启管伟杨秉呼胡小电
- 关键词：靶标反义寡核苷酸抗肿瘤IGF1R
- 肝细胞靶向pH敏脂质体介导的硫代反义寡核苷酸对HCV5′NCR基因表达的抑制作用被引量：3
- 2001年
- 反义寡核苷酸是一种阴离子大分子物质 ,细胞生物利用度较低且易被细胞溶酶体酶降解 ,为了增强反义药物在病变靶细胞内的有效浓度 ,根据受体介导的内吞作用原理 ,针对肝细胞专一性表达的去唾液酸糖蛋白受体 ,设计及制备了一种肝靶向性脂质体 ,这种脂质体同时具有pH敏性。采用竟争抑制实验及鸡红细胞溶血实验分析了其肝细胞靶向性及pH敏性 ;应用肝靶向pH敏脂质体作为药物运载工具 ,介导反义寡核苷酸HCV3 63作用于转基因细胞HepG2 .970 6细胞 ,通过荧光素酶活性检测 ,观察了硫代反义寡核苷酸对HCV 5′NCR调控功能的抑制活性。结果显示 ,不同浓度半乳糖溶液对 5 % 18 gal脂质体有一定的抑制作用 ,浓度超过 2 0mmol L时 ,达到饱和 ,最大抑制率为 3 8% ;溶血实验显示脂质体与红细胞膜融合作用有显著的pH值依赖性 ,pH <6时 ,血红素释放量明显增加 ;肝靶向pH敏性脂质体介导的HCV3 63对HepG2 .970 6细胞中HCV 5′NCR调控基因具有显著的剂量依赖性抑制作用 ,浓度为 1 0 μmol L时 ,抑制率达 86%。综上 ,所制备的脂质体具有一定的肝细胞靶向性及显著的pH敏感性 ,这种脂质体能够增强HCV特异性硫代反义寡核苷酸的细胞内抑制活性 ,这为针对肝炎病毒的反义寡核苷酸的体内活性评价提供了有用的转运体系。
- 王小红王升启文思远管伟毛秉智
- 关键词：丙型肝炎病毒反义寡核苷酸肝靶向性脂质体基因表达
- AIM-1基因为靶的反义寡核苷酸抗肿瘤活性研究被引量：1
- 2001年
- :[目的]以AIM 1基因为靶筛选抗肿瘤药物。[方法]根据AIM 1mRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化。最后对7#进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率进行分析。[结果]7#在体内外具有良好的抗肿瘤活性。[结论]AIM 1可作为肿瘤治疗的新靶点。
- 林莉王升启管伟杨秉呼胡小电
- 关键词：肿瘤反义寡核苷酸
