田永阳
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队“十二五”重点项目国家杰出青年科学基金更多>>
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- CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞迁移的影响及调控被引量：1
- 2015年
- [目的]研究CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)迁移的影响及其调控机制。[方法]通过boyden chamber小室检测不同浓度CXCL12(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)对大鼠OPCs迁移能力的影响,利用Western blotting实验检测相应条件下MEK1/2通路中ERK和p-ERK表达的变化;然后利用CXCR4 shRNA抑制CXCR4蛋白表达、U0126阻断MEK1/2通路,利用Western blotting实验检测相应条件下MEK1/2通路中ERK和p-ERK表达的变化,通过boyden chamber小室检测大鼠OPCs迁移能力的变化。[结果]CXCL12能够明显促进大鼠OPCs的迁移,随着胞外CXCL12浓度提高,OPCs内其特异性受体CXCR4表达逐渐增高,与0 ng/ml相比,CXCL12浓度为10 ng/ml和20 ng/ml时CXCR4蛋白相对表达明显增加,差异显著。并且明显促进MEK1/2通路蛋白ERK磷酸水平升高;抑制CXCR4蛋白表达后,CXCL12对少突胶质前体细胞迁移的促进作用受到明显抑制,并且MEK1/2通路蛋白ERK磷酸水平也受到明显抑制;用U0126阻断MEK1/2通路后,CXCL12对大鼠OPCs迁移的促进作用受到明显抑制。[结论]CXCL12/CXCR4能够通过MEK1/2通路调控大鼠OPCs的迁移,为后续深入探讨脊髓损伤治疗方法提供实验基础。
- 田永阳蒋涛阴洪唐北川任先军
- 关键词：CXCL12CXCR4少突胶质前体细胞迁移
- 京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的制备及其生物力学特性研究被引量：2
- 2014年
- 目的 构建京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架,探讨京尼平交联改性对大鼠脱细胞脊髓支架抗酶解能力、生物力学性能及细胞毒性的影响. 方法 采用化学萃取法制备大鼠脱细胞脊髓支架,再用5 g/L京尼平溶液进行化学交联改性.采用HE染色及扫描电镜观察未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的微观结构,测量基质孔径大小.分别检测交联前后大鼠脱细胞脊髓支架的孔隙率、含水率以及在2.5 g/L胰酶溶液中的失重率.在Instron生物力学测试仪上检测正常大鼠胸段脊髓、未交联及京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的极限牵张应力和弹性模量.将大鼠骨髓间充质干细胞分别在未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架浸提液中培养,采用MTT法检测细胞相对生长率,评价支架的细胞毒性. 结果 未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架拥有相似的三维网状孔隙结构,孔径大小约30 μm,孔隙率超过80％,两组间差异无统计学意义（P＞0.05）；京尼平交联支架的含水率为（229.7±12.5）％,显著低于未交联支架的（283.4±11.2）％（P＜0.05）；京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架在胰酶溶液中各时相点的失重率明显低于未交联支架（P＜0.05）,生物力学测试其极限牵张应力和弹性模量则显著增强（P＜0.05）；未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架均未观察到明显的细胞毒性. 结论 京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架拥有与未交联支架相似的结构,但生物力学性能和抗酶解能力明显增强,且无明显细胞毒性,在脊髓损伤修复的组织工程研究中具有良好的应用前景.
- 蒋涛任先军阴洪王开见周长立田永阳
- 关键词：生物力学
- 京尼平交联对大鼠脱细胞脊髓生物学特性的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨新型生物交联剂京尼平对大鼠脱细胞脊髓生物学特性的影响。方法从成年SD大鼠(体质量200～250 g,雌雄不限)获取大鼠胸段脊髓,采用化学萃取法对大鼠脊髓组织进行脱细胞处理,再用生物交联剂京尼平(5 g/L)进行化学交联。分别采用HE染色和扫描电镜观察京尼平交联前后脱细胞脊髓的微观结构,并进行孔径大小、交联率、含水量、在PBS溶液及胰酶溶液中的稳定性能检测,再将大鼠骨髓间充质干细胞分别与京尼平交联前后的脱细胞脊髓浸提液共培养,采用MTT法在体外评估该支架材料交联前后的细胞毒性情况。结果京尼平交联前后的脱细胞脊髓拥有类似的多孔结构,孔径大小约30μm,最终交联率可达90%,交联后的脱细胞脊髓含水率从(283.4±11.2)%降至(229.7±12.5)%,但其在PBS及胰蛋白酶中的稳定性得到了明显的增强。交联前后的脱细胞脊髓都未观察到明显的细胞毒性。结论京尼平交联的脱细胞脊髓部分生物学特性得到改善,为应用于脊髓损伤修复的组织工程材料提供了一种新的选择。
- 蒋涛任先军阴洪田永阳唐北川王开见
- 关键词：京尼平化学交联细胞毒性
- 慢病毒转导增强型绿色荧光蛋白对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：5
- 2013年
- [目的]研究慢病毒载体(lentiviral vectors,LVs)介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的可行性及对细胞生物学特性的影响。[方法]采用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,经Lenti-emGFP/hygro慢病毒载体转染和潮霉素药筛,镜下观察细胞形态和eGFP表达情况,MTT法检查转染前后细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞表面标记物(CD34、CD44、CD45、CD90)和eGFP,检测转染后细胞的成骨、成脂分化潜能并分别行茜素红染、油红O染色鉴定。[结果]大鼠BMSCs呈成纤维细胞样形态,漩涡样状排列,转染后细胞形态不变,并高效表达eGFP,两组细胞增殖活力一致,流式细胞仪检测显示,转染后的P3代大鼠BMSCs-eGFP的eGFP阳性率为99.97%,转染前后,两组细胞CD34和CD45阳性率低于2%,而CD44和CD90阳性率高于99%。转染后的P3代大鼠BMSCs-eGFP成骨诱导后,茜素红染色,可见呈桔红色的块状钙结节,成脂诱导后,油红O染色显示有大量红色脂质沉淀,成骨成脂诱导过程中,eGFP持续表达。[结论]Lenti-emGFP/hygro转染大鼠BMSCs并经潮霉素药筛后,eGFP可稳定高效表达,对细胞的生物学特性无明显影响,是一种较为理想的标记方法。
- 蒋涛任先军阴洪田永阳周长立王开见
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白
- CXCL12/CXCR4介导少突胶质前体细胞髓鞘化的作用及调控机制被引量：2
- 2017年
- [目的]体外条件下研究CXCL12/CXCR4介导大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)髓鞘化的作用及影响。[方法]振荡分离、差速贴壁和免疫细胞化学技术分离、培养、鉴定OPCs;Western blotting检测在不同浓度CXCL12(0、5、10、20 ng/ml)作用下,OPCs髓磷脂碱性蛋白(MBP)和髓鞘脂蛋白(PLP)的表达;CXCR4si RNA干扰CXCR4蛋白表达、LY294002抑制AKT通路活性、U0126抑制ERK通路活性,利用Western blotting检测在20ng/ml CXCL12作用下OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP的表达,并用免疫荧光标记MBP和PLP。[结果]随着细胞外CXCL12的浓度升高,CXCL12能够明显促进OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP的表达。与0 ng/ml相比,CXCL12在20 ng/ml作用后,OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达增加最明显(P<0.05);干扰CXCR4蛋白表达,抑制AKT、ERK通路活性,OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达受到抑制(P<0.05)。[结论]体外条件CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞参与轴突髓鞘化有促进作用,并且能够通过ERK和PI3K/AKT信号通路对髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达进行调控。
- 余淼蒋涛阴洪田永阳李邦银任先军
- 关键词：少突胶质前体细胞CXCL12MBPPLP髓鞘化
