王美亮 作品数:22 被引量:28 H指数:3 供职机构: 兰州军区兰州总医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 甘肃省自然科学基金 军队医药卫生科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
流行性出血热病毒的细胞培养 被引量:1 2001年 用灭活的流行性出血热病毒 (EHFV) L99株感染传代培养的 Vero- E6细胞 ,第 4 d5 0 %的Vero- E6细胞胞浆内可查到对 EHFV鼠血清的特异性荧光 ,第 7~ 10 d阳性细胞数达到 10 0 %.用感染第 3d的细胞培养上清大批量盲种 ,第 7~ 10 d荧光强度均达到 + + + + .电镜下病毒呈圆形或卵圆形 ,外膜为电子致密层 ,界面清楚 ,包绕着比较疏松的内浆 ,内浆中有若干个颗粒丝状结构 . 王美亮 彭静 王超美 高珊 周学良关键词:流行性出血热病毒 VERO-E6细胞 细胞培养 抗原 汉滩病毒核蛋白HLA-A*02限制性CTL表位的预测及实验鉴定 被引量:1 2006年 目的:采用人工神经网络模型及在线软件BIMAS和SYFPEITHI共同预测汉滩病毒核蛋白HLA-A)02限制的CTL表位,并对CTL表位进行实验鉴定。方法:①选取2004-11解放军第四军医大学唐都医院住院的肾综合征出血热患者1例,汉滩病毒特异性IgM抗体为阳性。无菌抽取肾综合征出血热患者外周血,分离外周血单个核细胞,液氮冻存备用。②采用JavaNNS软件模拟神经系统对信息的处理过程,建立人工神经网络模型。训练人工神经网络的9肽包括584种HLA-A)02结合肽和130种HLA-A)02非结合肽,随机数字表法分为3部分:80%为训练肽(用来训练模型,使其学习其中隐含的规律),10%为确认肽(防止训练过度,使训练在适当的时候终止),10%为试验肽(对训练好的模型进行初步的评价)。无、低、中、高亲和力9肽训练人工神经网络的输出值分别为0.1,0.4,0.6,0.8。因此,人工神经网络模型的默认阈值为0.4。此外,还应用在线软件BIMAS和SYFPEITHI,共同预测汉滩病毒核蛋白的CTL表位。③采用ELISPOT鉴定汉滩病毒核蛋白特异的HLA-A)02限制的CTL表位。结果:①人工神经网络、BIMAS和SYFPEITHI预测的准确度:3种方法预测的灵敏度分别达到0.89,0.78,0.97,特异性分别为0.90,0.87,0.20。三者共同预测到23个汉滩病毒核蛋白特异的CTL表位。②HLA-A)02限制的CTL表位的实验鉴定:在可刺激肾综合征出血热患者外周血单个核细胞产生阳性反应的3条15肽中,预测到了4个HLA-A)02限制的CTL表位。经ELISPOT实验证实,其中的2种9肽可刺激HLA-A)02阳性的肾综合征出血热患者外周血单个核细胞分泌γ干扰素。结论:肾综合征出血热患者中存在着汉滩病毒特异的CTL应答。汉滩病毒核蛋白CTL表位的有效预测,大幅度减少了合成候选9肽的数量,降低了成本。为肾综合征出血热细胞免疫应答的研究以及多肽疫苗的设计,奠定了重要基础。 王美亮 朱勇 王九平 金伯泉关键词:肾综合征出血热 钙整合素结合蛋白1慢病毒干扰载体的构建及表达 2014年 目的构建人钙整合素结合蛋白1(calcium-and integrin-binding protein 1,CIB1)基因RNA干扰慢病毒载体,获得稳定下调CIB1表达的慢病毒。方法根据CIB1的序列,设计siRNA序列,克隆入慢病毒核心质粒pGV112中,并与辅助质粒一起转染293T细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T细胞并测定病毒滴度。以CIB1干扰慢病毒感染人胶质瘤细胞SHG44后,应用Western blotting方法检测CIB1的表达。结果成功构建CIB1干扰慢病毒载体,包装后获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达6×108pfu/ml,感染细胞CIB1蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论成功构建人CIB1基因RNA干扰慢病毒,为后续CIB1生物学功能研究奠定基础。 惠玲 李晓云 王晓辉 王美亮 杨霄鹏 马明仁 桑春艳 王剑锋关键词:慢病毒 胶质瘤 RNA干扰 Lg-1诱导人胃癌细胞系BGC-823凋亡作用及机制的探讨 被引量:1 2013年 目的:研究新鬼臼毒素衍生物4β-4-脱氧-氮取代的异亮氨酸(5-FU基)-戊醇酯-4′-去甲表鬼臼(Lg-1)对人胃癌细胞系BGC-823的诱导凋亡作用及机制。方法:噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和Hoechs33258染色分别检测Lg-1对BGC-823细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测药物处理后对BGC-823细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、p21和Caspase-3表达的影响。结果:Lg-1对BGC-823细胞增殖具有明显剂量和时间依赖的抑制作用,随药物浓度增加,抑制效应增强,药物浓度为0.01、0.1、1和10μmol/L时,Lg-1对BGC-823的抑制率分别为23.5%、30.8%、32.4%和52.1%,与依托泊苷(Vp-16)处理组(3.5%、8.7%、10.9%和21.3%)比较差异有统计学意义,P均<0.01。随时间延长,抑制作用逐渐增强,12~60hLg-1处理组对BGC-823的抑制率与Vp-16处理组比较差异有统计学意义,12h抑制率分别为9.8%和8.0%,P=0.001;24h分别为11.6%和9.0%,P=0.02;36h分别为19.4%和16.2%,P=0.014;48h分别为44.1%和41.2%,P=0.048;60h分别为65.4%和50.1%,P=0.001。细胞周期检测显示,Lg-1作用12和24h后,G2/M期的细胞含量分别为39.37%和74.36%,与对照组及Vp-16组比较均明显增加,而G0/G1期细胞含量分别为20.06%和12.25%,较对照组及Vp-16组显著减少。Hoechst33258染色显示,Lg-1处理组细胞核固缩、碎裂、凋亡样改变,药物处理后Bcl-2mRNA的表达呈降低趋势,Vp-16处理组Bcl-2mRNA表达量为0.748,Lg-1处理组为0.425,而p53、Bax、p21和Caspase-3mRNA的表达呈增高趋势,Vp-16处理组mRNA表达量分别为1.074、1.232、1.818和2.9,Lg-1处理组分别为1.903、1.393、1.911和3.097,且Lg-1处理组作用优于Vp-16处理组。结论:Lg-1可抑制胃癌细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,该过程可能与其上调p53、Bax、p21、Caspase-3表达和下调Bcl-2基因的表达有关。 闫蔚 吕同德 惠玲 王美亮 贾庆华 王晓辉 马明仁关键词:胃肿瘤 鬼臼毒素 细胞周期 汉滩病毒核衣壳蛋白B细胞表位的筛选鉴定 目的:研究我国肾综合征出血患者血清抗体识别汉滩病毒核衣壳蛋白的B细胞表位,为免疫学诊断试剂和新型疫苗的研制提供基础性条件。意义:肾综合征出血热是在我国流行的一种严重的传染病,死亡率在2%~10%。致病因子主要是汉滩病毒和... 闫果林 马樱 李永明 王美亮 王久平 杨琨 金伯泉关键词:肾综合征出血热 汉滩病毒 B细胞表位 16例Turner综合征的细胞遗传学分析 被引量:3 2013年 目的分析Turner综合征不同核型的遗传学特征、临床表现及其关系。方法外周血淋巴细胞G带分析。结果 16例Turner综合征患者中单体45,X0 6例(37.50%),46,X0/46,XX嵌合体1例(6.25%),46,Xi(Xq)1例(6.25%),47,XXX 4例(25.00%),46,XY/45,X0 3例(18.75%),46,XX,del(Xq24)1例(6.25%)。结论 X染色体数目异常及结构畸变是导致Turner综合征的主要原因,多种异常核型均不同程度导致女性生长缓慢、性腺发育不良、闭经及智力低下等其他器官功能异常。 昌业伟 贾庆华 唐瑜 王晓辉 杨霄鹏 马明仁 惠玲 王美亮 哈小琴关键词:TURNER综合征 核型分析 产前诊断 G带 异体移植工程细胞对大鼠烧伤创面愈合中皮肤附属器作用 被引量:2 2011年 目的以大鼠深Ⅱ度烧伤为模型,观察工程细胞即腺病毒介导肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对烧伤创面愈合中皮肤附属器再生的作用。方法体外分离、培养雄性Wistar大鼠骨髓MSCs,转染携带HGF基因的重组腺病毒(100 pfu/cell)后备用。16只雌性Wistar大鼠复制深Ⅱ度烧伤模型,随机分为观察组与对照组各8只。在造模同时,观察组将携带HGF基因的重组腺病毒修饰的骨髓MSCs悬液,对照组将同体积磷酸盐缓冲液注射于创面真皮下。分别于细胞移植后第3,5,7,14,21天计算创口愈合率,第7,14,21天光镜下观察组织愈合及皮肤附属器情况,常规PCR法检测细胞移植后第21天创面组织中性别决定基因Sry片段。结果携带HGF基因的重组腺病毒可有效转染MSCs,修饰的MSCs移植后第7,14天,观察组创口收缩率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HE染色结果显示,第7天观察组表皮化优于对照组,第21天观察组再生表皮明显厚于对照组,并可见再生毛囊和皮脂腺。观察组雌性大鼠创面组织中扩增到Sry基因片段。结论 MSCs联合携带HGF基因的重组腺病毒异体移植可促进烧伤创面愈合修复过程中皮肤附属器的形成,且移植的细胞也参与了烧伤创面修复过程中附属器的形成。 赵曼 他维玮 哈小琴 惠玲 贾庆华 王美亮 刘国军关键词:烧伤 间充质干细胞 肝细胞生长因子 愈合 皮肤附属器 流行性出血热病毒单克隆抗体的制备及其IgM捕获ELISA的建立 1999年 用灭活的流行性出血热病毒(EHFV) 免疫小鼠获得4 株能分泌EHFV 特异性单克隆抗体(McAb) 的杂交瘤细胞.Western blot 结果表明4 株McAb 能专一地识别EHF 病毒的分子量为56kD的囊膜糖蛋白G2 .交叉实验结果表明4 株McAb 与野鼠型病毒株76118 和家鼠型病毒株L99 ,R22 等均有反应,而与流感病毒、轮状病毒等均无交叉反应,表明4 株McAb 具有较高的特异性.用6B11 McAb 组建IgM 抗体捕获ELISA 试剂盒,试测临床标本.25 例临床确诊EHF病人血清中特异性IgM 抗体全部阳性.70 例正常献血员血清全部阴性.ELISA 试验方法简单,敏感性好,可建立试剂盒应用于临床. 王美亮 陈淑清 袁湘叶 彭静 周学良 郑海金关键词:流行性出血热 单克隆抗体 IGM ELISA EHFV 汉滩病毒核蛋白CTL表位的鉴定 背景:汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)是《禁止生物武器公约》议定书核查范围--病原微生物中一种重要的病毒。研究表明CTL应答在抗病毒免疫中起着重要作用。但国际上目前仅仅鉴定出了3个HTNV特异的CTL表位... 王美亮 朱勇 王九平 方亮 杨琨 杨安钢 金伯泉文献传递 肾综合征出血热急性期汉滩病毒核蛋白特异的T细胞免疫应答与病情的关系 汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)是在我国引起肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)的主要病原体。HFRS是一种以发热、出血和急性肾功能损害为... 王美亮 王九平 朱勇 徐竹蔚 杨琨 杨安钢 金伯泉文献传递