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王斯璐: 作品数：30 被引量：64H指数：5; 供职机构：温州医科大学更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技计划项目温州市科技局资助项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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SAMe对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白-谷胱甘肽共转运体系的影响: 2014年; 目的:探讨S-腺苷蛋氨酸(SAMe)对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症(ICP)孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白(MRP)-谷胱甘肽(GSH)共转运体系的影响。方法:将妊娠第13天的大鼠随机分成对照组(孕15～19天腹腔注射生理盐水)、EE(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液)组、EE+SAMe组(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液,孕17～19天腹腔注射SAMe溶液)。17-α-乙炔雌二醇诱导孕鼠发生肝内胆汁淤积,建立ICP模型,测定3组血清总胆酸(TBA)、甘胆酸(CG)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST);ELISA检测GSH,逆转录实时荧光定量PCR和免疫组化法检测MRP1、MRP2、MRP5的表达。结果:EE组的TBA、CG、ALT、AST水平显著增高,胚胎存活率显著降低(P<0.001);经SAMe治疗,TBA、CG、ALT、AST水平显著下降,增加了胚胎存活率(P<0.01)。EE组胎盘的MRP1 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05),而胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著下调(P<0.01),GSH显著下降(P<0.001);经SAMe治疗,胎盘MRP1 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05),胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著上调(P<0.05),GSH显著上升。结论:胎盘存在MRP-GSH共转运体系;SAMe可通过调节胎盘MRP-GSH共转运体系影响胆汁酸的转运,从而治疗大鼠妊娠期ICP。; 许张晔赵峰王妮梁勇王斯璐黄引平; 关键词：雌激素肝内胆汁淤积多药耐药相关蛋白谷胱甘肽

慢性乙型肝炎患者血清GP73与肝纤维化的相关性被引量：5: 2012年; 目的:探讨慢乙肝患者血清GP73与肝纤维化的相关性。方法:收集40例健康志愿者,110例慢乙肝患者进行血清GP73检测,同时病患组均进行HBeAg及肝功能等测定,并对结果进行统计。结果:1.肝纤维化各组较正常组均明显增高(P<0.01),随着纤维化的进展,肝纤维化分期组间也存在明显差别(P<0.01)。45例入院确诊为肝硬化的患者经扶正化瘀等治疗后,第7、30天复查GP73均较治疗前明显减低(P<0.05)且治疗后第30天与第7天相比也有明显差别(P<0.01)。2.所有肝硬化患者经child-pugh分级并与其GP73值进行相关分析,发现两者高度正相关(相关系数为r=0.922,P<0.01)。3.所有患者根据HBeAg阴、阳性进行分组,HBeAg(+)组GP73明显高于HBeAg(-)组(P<0.01)。结论:血清GP73的测定有助于肝纤维化病的诊断和肝损害情况的判断。; 郑建建钱琼信王斯璐丁赛丹俞富军陈必成; 关键词：肝纤维化 GP73 肝损伤酶联免疫吸附试验

同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用被引量：2: 2013年; 建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcD-NA3.1(+)连接。通过测序技术对进行克隆筛选。提取质粒并采用10倍梯度稀释(5×103～107拷贝/mL)作为BKV和CMV核酸序列的标准品,并评价其灵敏度;采用对比正常人DNA、BKV阳性质控和CMV阳性质控评价其特异性;通过对标准品DNA分别进行批内和批间各20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。对480例肾移植受者外周血样本,进行FQ-PCR检测BKV和CMV DNA拷贝数,检测FK506血药浓度,并对两者进行相关性分析。重组质粒经测序检测显示含有靶BKV和CMV核酸序列。所建立的FQ-PCR方法,其最低检测下限均为5.0×103拷贝/mL的DNA标准品。正常人DNA的BKV和CMV拷贝数检测为阴性,而阳性对照能够发现荧光值显著变化,证实为针对靶DNA的特异性扩增;重复性检测显示批内差异分别为3.44%(BKV)和2.23%(CMV),批间差异分别为4.98%(BKV)和3.76%(CMV)。肾移植患者CMV感染的阳性率为27.08%(130/480),明显高于BKV的阳性率(13.33%,64/480,P<0.05),并且感染程度与免疫抑制剂FK506用量呈正相关。建立的同时检测BKV和CMV两种病毒载量的FQ-PCR方法具有快速、重复性好、灵敏的优点,可为临床监测肾移植术后病毒感染提供技术平台。; 张纯武陈孝倩白永恒潘晓东王斯璐蔡勇夏鹏吴存造陈必成; 关键词：巨细胞病毒多瘤病毒荧光定量PCR 肾移植

古拉定对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白-谷胱甘肽共转运体系的影响被引量：2: 2014年; 目的探讨古拉定对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白-谷胱甘肽共转运体系的影响。方法用将妊娠第13 d的大鼠随机分成对照组,EE组,EE+古拉定组,17-α-乙炔雌二醇诱导建立孕鼠ICP模型,测定三组血清TBA、CG、ALT、AST;ELISA检测GSH,逆转录实时荧光定量PCR和免疫组化法检测MRP1、MRP2、MRP5的表达。结果 EE组TBA、CG、ALT、AST水平显著增高,胚胎存活率显著降低(P<0.001),经古拉定治疗,TBA、CG、ALT、AST水平显著下降,增加了胚胎存活率(P<0.01);EE组胎盘MRP1 mRNA和蛋白的表达显著上调(P<0.05),而胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著下调(P<0.01),GSH显著下降(P<0.001);经过古拉定治疗,下调胎盘MRP1,上调MRP2和MRP5mRNA和蛋白的表达(P<0.05),GSH显著上升。结论胎盘存在MRP-GSH共转运体系;古拉定可以通过调节胎盘MRP-GSH共转运体系影响胆汁酸的转运来治疗大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症。; 许张晔赵峰项慧秋梁勇王斯璐黄引平; 关键词：雌激素肝内胆汁淤积多药耐药相关蛋白谷胱甘肽

干预Hedgehog信号对肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响被引量：1: 2015年; 目的:探讨Hedgehog(HH)信号通路的活化和抑制对肾小管上皮细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为对照组、活化组(10μg/L Shh)和干预组(10μg/L Shh加5μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,细胞免疫荧光染色检测HH信号关键分子Ptch1、Smo和Gli1,以及细胞增殖标志物PCNA的表达,real-time RT-PCR检测Ptch1和Smo m RNA的表达。结果:免疫荧光染色显示,对照组细胞维持一定的增殖状态,HH信号活性较低,PCNA表达水平较低;当外源性重组蛋白Shh活化NRK-52E细胞24 h后,Smo和Gli1 m RNA和蛋白表达显著升高,Ptch1的表达显著下调,这提示Shh可激活HH信号(P<0.05)。在此过程中,PCNA表达水平显著升高,NRK-52E细胞数量增加,同时伴随细胞形态的改变;在Shh的基础上加入环杷明干预后,HH信号被抑制(P<0.05),PCNA表达下降,NRK-52E细胞增殖被抑制,出现凋亡或坏死。结论:HH信号与肾小管上皮细胞的增殖密切相关。通过药物调控HH信号的活化,可影响PCNA的表达,进而影响细胞增殖效应。; 陆红吴莲凤林成成王斯璐梁勇白永恒; 关键词：肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原

环杷明对马兜铃酸诱导的肾上皮细胞表型转化及Hedgehog通路的影响被引量：2: 2015年; 目的:探讨环杷明干预Hedgehog(HH)信号对马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞表型转化和基质累积的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为溶剂对照组、AA损伤组(分别用终浓度为1、5和10 mg/L的AA处理细胞)和环杷明干预组(10 mg/L AA基础上加入1、5和10μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,用real-time PCR检测HH信号关键分子Ptch1和Smo、表型转化相关分子α-SMA和E-cadherin、ZO-1、BMP-7和基质成分I型和III型胶原mRNA的表达;ELISA法检测Shh和TGF-β1的含量;细胞免疫荧光染色检测Ptch1、Smo、E-cadherin、α-SMA和III型胶原蛋白表达。结果:AA不仅增加了TGF-β1、α-SMA和III型胶原的表达,降低了E-cadherin和ZO-1的表达,而且诱导了Shh和Smo mRNA表达的升高和Ptch1 mRNA表达的下降,提示AA促进小管上皮细胞表型转化和胶原累积,同时也激活了HH信号通路。环杷明干预AA作用后,Smo mRNA或蛋白表达下调,Ptch1 mRNA表达升高,这说明环杷明抑制了AA诱导的HH信号通路的活化。此外,环杷明也降低TGF-β1、α-SMA、I型和III型胶原的表达,提高BMP-7、ZO-1和E-cadherin的表达,这提示环杷明抑制了AA所致的上皮细胞的表型转化和基质累积。结论:环杷明可抑制AA所致的肾小管上皮细胞表型转化和基质累积,可能是通过靶向抑制HH信号的活化来实现的。; 洪炜龙陆红吴存造林成成梁勇王斯璐陈必成白永恒; 关键词：马兜铃酸表型转化

改良通用茎环引物筛查和定量检测微小RNA方法的建立被引量：9: 2011年; 目的建立可同时筛选和定量检测成熟型miR的荧光定量PCR方法.方法改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,以建立SYBR Green PCR筛选和定量检测miR的方法（简称“改良通用茎环引物miR法”）.同时,采用10倍梯度稀释的miR-155标准品cDNA（1～109拷贝/μl）评价其灵敏度；采用熔解曲线评价其检测miR-155的特异性；通过对2×105、2×106、2×107拷贝/μl的miR-155标准品cDNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值（Ct）的变异系数（CV）评价其精密度；并与传统茎环法进行比较,计算实验所用时间和引物成本.然后,采用改良通用茎环引物miR法对植物血凝素（PHA）刺激培养0、16、24、48、72 h的人外周血T淋巴细胞内miR进行筛选（87个靶miR,经PubMed检索可能与免疫功能相关）,并用以进行miR定量检测分析.结果建立的改良通用茎环引物法的最低检测限为103拷贝/μl的miR-155 cDNA标准品；熔解曲线于80℃呈单峰,证实为针对miR-155的特异性扩增；其批内重复实验的精密度为CV＜2.5％.优化后的通用引物方法与传统方法相比较,节约引物约75％（1 917 bp比7 851 bp）,节省逆转录时间约120min（85 min比205 min）.用改良通用茎环引物法筛选T淋巴细胞中87个miR,85个miR在PHA刺激前、后的Ct无变化,而miR-150和miR-155表达量在T淋巴细胞激活前后分别发生超过10倍下降（72 h）和8倍的升高（48 h）,且差异有统计学意义（Z=-2.023,P=0.043;Z=-2.032,P=0.042）.结论建立的改良通用茎环引物miR法具有快速、重复性好、灵敏、节约引物用量和实验时间的优点,可用于T淋巴细胞的miR筛查和定量检测.; 陈必成王斯璐白永恒杨云秀蔡勇夏鹏郑少玲杨亦荣; 关键词：微小RNAS T淋巴细胞聚合酶链反应

大豆异黄酮减轻肝纤维化的实验研究: 背景大豆异黄酮主要成分染料木素是酪氨酸蛋白激酶抑制剂,对人体各脏器有显著的保护作用。对实验性的纤维化有改善作用。目的研究大豆异黄酮对培养的大鼠星形细胞的作用及研究其改善硫代乙酰胺诱导的肝纤维化模型的作用机理。方法肝星形细...; 王斯璐陈必成张行梁勇贾增荣余震; 文献传递

通用stem-loop引物方法筛查和定量检测免疫抑制患者的microRNA: 目的:　　RT-qPCR技术广泛应用于microRNA(miRNA)表达定量，其中stem-loop RT-PCR技术使用最为频繁，但是该方法耗时耗试剂，并且不利于快速筛选miRNA。因此我们欲建立一种能快速筛选和定量m...; 王斯璐; 关键词：MICRORNA T淋巴细胞免疫抑制; 文献传递

基于特定基因系统发生树与单核苷酸多态性分析技术进行多瘤病毒基因分型研究: 洪炜龙林成成白永恒潘晓东王斯璐郑少玲杨亦荣陈必成

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