王宏伟
- 作品数：33 被引量：100H指数：6
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- 相关领域：农业科学生物学哲学宗教建筑科学更多>>
- 日本乙型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验方法
- 本标准规定了日本乙型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验的技术要求。本标准适用于动物脑组织中日本乙型脑炎病毒核酸的检测。
- 王宏伟孙明王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：畜牧业家畜疾病检疫
- 文献传递
- H7N2禽流感病毒分离株研究:Ⅰ.两株鸡源H7N2禽流感病毒分离鉴定
- 采用鸡胚培养法,从病鸡组织中获得了两株分离物,均可凝集鸡红细胞;经纯化后负染作电镜观察,可见球形、外被囊膜的病毒颗粒,直径约90～100nm;经血凝抑制试验和神经氨酸酶试验鉴定为H7N2亚型禽流感病毒,分别命名为A/Ch...
- 王传彬田克恭王宏伟孙明遇秀玲金萍陈西钊
- 关键词：禽流感病毒HA1基因
- 文献传递
- 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法
- 本标准规定了猪圆环病毒(PCV)聚合酶链反应(PCR)检测方法的技术要求。 本标准适用于猪血清和组织中的猪圆环病毒检测,以及其I型(PCV-1)和Ⅱ型(PCV-2)的鉴别。
- 田克恭王宏伟孙明王传彬陈西钊
- 关键词：动物病毒兽医学脱氧核糖核酸核糖核酸
- 文献传递
- H_7N_2禽流感病毒分离株研究:Ⅱ.H_7N_2禽流感病毒对人工感染鸡的致病作用
- 将两个H7N2亚型禽流感病毒分离株经静脉分别接种SPF鸡,7天后均可从实验鸡的泄殖腔棉拭中回收到病毒,并在血清中检测到抗H7亚型禽流感病毒血凝素的抗体,抗体高峰期为接种后3至5周;测得两个分离株的SPF鸡静脉接种致病指数...
- 王传彬田克恭王宏伟遇秀玲孙明陈西钊
- 关键词：禽流感病毒H7N2
- 动物疫病监测方案与检测技术的综合应用被引量：2
- 2006年
- 加强动物疫病检测和疫情监测,是实现“预防为主”方针的基础,也是降低动物发病率和死亡率,净化动物疫病,使我国动物疫病防治工作适应当前全球经济一体化和国际动物产品市场贸易的要求。因此,在当前形势下,有效开展动物疫病检测和疫情监测工作显得尤为重要。
- 王宏伟
- 关键词：动物疫病防治工作全球经济一体化动物防疫工作监测工作疫病诊断
- 禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究被引量：6
- 2005年
- 目的 检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法 根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果 建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论 研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。
- 孙明李纯铃赵铁柱王传彬陈西钊田克恭王宏伟
- 关键词：禽流感病毒H5亚型试剂盒禽流感
- 禽流感病毒H7N2血凝素HA1基因在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的 表达H7N2亚型禽流感病毒 (AIV)HA1基因 ,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究。方法 采用RT PCR方法对H7N2亚型AIVHA1基因进行扩增 ,将PCR产物克隆于pGEM T Easy载体 ,将该基因插入pGEX 4T 2中构建HA1基因原核表达载体 ,转化BL2 1大肠杆菌后 ,在IPTG诱导下表达HA1蛋白 ,Westernblot鉴定表达HA1蛋白。电洗脱方法纯化表达HA1蛋白 ,建立间接ELISA方法 ,对感染AIVH7、H9、H5亚型AIV阳性血清进行检测。结果 成功克隆H7N2亚型AIV的HA1基因 ,其核苷酸序列长度 96 6bp ,编码 32 2个氨基酸残基。构建HA1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约 6 1× 10 3的HA1融合蛋白。Westernblot和ELISA方法鉴定表明 :表达HA1蛋白与感染H7亚型AIV鸡血清有反应 ,与H5、H9亚型AIV阳性血清没有反应。结论 本研究在大肠杆菌中成功表达了H7N2亚型AIVHA1基因蛋白 ,具有与感染H7亚型AIV阳性血清反应原性 ,不与H5和H9亚型AIV感染阳性血清发生反应。
- 多海刚赵铁柱孙明王传彬王宏伟陈西钊冉多良田克恭
- 关键词：大肠杆菌基因表达抗体检测
- 禽流感病毒分离株NS基因同源性及等位基因类型分析被引量：3
- 2005年
- 目的 克隆测定国内具有代表性的禽流感病毒 (AIV)的非结构 (NS)蛋白基因核苷酸序列 ,分析其同源性和等位基因类型 ,为进一步探索禽流感NS蛋白抗体监测方法奠定基础。方法 经RT PCR扩增了国内 3株H9N2、2株H5N1、2株H7N2亚型AIV分离株的NS蛋白基因 ,并把扩增的基因片段克隆到pGEM T载体中测序 ,将测序结果与GenBank中的核苷酸序列进行同源性比较 ,绘制基因进化树。结果 经测序获得了各AIV分离株NS基因的完整编码序列。同源性分析表明 ,3株H9亚型AIV的NS基因之间的同源性为 96 %～ 98% ;两株H5亚型AIVNS基因同源性为 91 6 % ;两株H7亚型AIV的NS基因同源性为 98 9%。H5和H9亚型分离株的NS基因之间的同源性均高于 90 % ;而H7N2亚型分离株与其它两种亚型分离株的NS基因同源性约为 6 0 %～ 70 %。在AIVNS基因系统发育进化树中 ,H5、H9亚型分离株都处于等位基因A群内 ;3株H9亚型分离株的进化关系较近 ,与香港、广东的部分H5N1病毒株起源相同 ,而 2株H5病毒的NS基因则处于不同分枝内 ;2株H7亚型分离株的NS基因都处于等位基因B群内 ,进化关系较近。结论 这 7株国内AIV分离株的NS基因之间的同源性差异较大 ,约为 6 0 %～ 99% ,且包括A。
- 王传彬孙明赵铁柱遇秀玲陈西钊王宏伟田克恭
- 关键词：NS基因序列同源性等位基因禽流感
- 动物疫病监测方案与检测技术的综合应用
- 2005年
- 王宏伟刘有昌
- 关键词：动物疫病防治工作全球经济一体化动物防疫工作监测工作疫病诊断
- H7N2禽流感病毒分离株血凝素蛋白全基因的序列分析被引量：1
- 2005年
- 为进一步分析H7N2禽流感病毒(AIV)分离株血凝素(HA)基因的特性,参照已发表序列设计了1对引物,采用RT-PCR获得了1条约1.7 kb的DNA片段,测序后进行了同源性比较、HA基因系统发育进化树分析和氨基酸编码分析.结果表明,所测的2个分离株的HA基因全长1 664 bp,编码除信号肽以外的HA蛋白的全部544个氨基酸,其中包括HA1的323个氨基酸,HA2的221个氨基酸.2个分离株HA基因核苷酸序列的同源性为99.4%;与GenBank中AIV标准株A/Afri.Star./Eng-Q/983/79(H7N1)的同源性最高,分别为99.4%和99.0%;与美国A/Chicken/NewYork/13142-5/94(H7N2)株同源性很低(仅65.0%),而与以色列、意大利H7N2 AIV的同源性较高(为96%～97%);2个分离株在HA基因进化树中均处于H7亚型AIV的欧亚群系分支内.推导氨基酸的序列分析表明,其HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为-GR-GLF-,仅包含1个碱性氨基酸(R-)残基,符合低致病力AIV的基因特征.
- 王传彬孙明田克恭金萍王宏伟遇秀玲陈西钊
- 关键词：HA基因同源性
