王国英
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
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- MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用
- 2015年
- 目的 探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞（PSCs）活化和上皮-间质转化（EMT）的调控作用.方法 用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白（desmin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物（miR-429 mimic）和无意义小分子阴性对照片段（miR-NC）分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白（vimemin）、E-钙黏蛋白（E-cad）及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果 培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的（1.369 ±0.878）、（1.518±0.041）、（0.549±0.076）倍,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的（0.423±0.038）、（0.652±0.043）、（2.235±0.045）倍,蛋白表达量是（0.683±0.053）、（0.548±0.049）、（1.548±0.038）倍,差异均有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）;TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的（0.459±0.038）、（0.525±0.029）倍,差异均有统计学意义（P ＜0.05或＜0.01）.结论 上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路。
- 徐岷王国英赵义蔡菁倪鑫刘鑫张行行张尤历
- 关键词：微RNAS胰腺星形细胞上皮-间质转化
- 长链非编码RNA UCA1对胰腺癌PANC-1细胞系侵袭转移的影响被引量：9
- 2015年
- 目的:探讨尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌PANC-1细胞系侵袭转移的影响。方法:用荧光定量PCR法检测4种胰腺癌细胞系中UCA1的表达水平,选取PANC-1细胞系,将其随机分为对照组和实验组,对照组细胞转染空载Vector,实验组细胞转染UCA1表达质粒,比较两组细胞UCA1表达水平;Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测两组细胞迁移和侵袭能力;蛋白质印迹检测两组细胞MMP14、MMP2和MMP9蛋白表达。结果:UCA1差异性表达于4种胰腺癌细胞系中;与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01),细胞中MMP14、MMP2和MMP9的蛋白表达水平均明显增加(P<0.01)。结论:上调UCA1促进胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭转移。
- 赵义张尤历张行行王国英龚爱华刘鑫徐岷
- 关键词：胰腺癌肿瘤转移长链非编码RNA
- 长链非编码核糖核酸UCA-1对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA-1)在胰腺癌细胞侵袭转移中的作用。方法采用实时荧光定量PCR检测5株胰腺癌细胞长链非编码核糖核酸UCA-1的表达;采用UCA-1表达质粒提高PaTu8988细胞的UCA-1水平,小干扰RNA用于降低BxPC-3细胞的UCA-1表达。用Transwell侵袭实验和迁移实验观察转染后的PaTu8988细胞和BxPC-3细胞的侵袭和迁移能力变化,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达。结果 UCA-1差异性表达于5株胰腺癌细胞。过表达UCA-1后,PaTu8988细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均增加,侵袭和迁移能力增强(P<0.001);而干扰UCA-1后,BxPC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低,侵袭和迁移能力减弱(P<0.001)。结论 UCA-1的高表达能增强胰腺癌细胞的体外侵袭转移能力。
- 赵义张尤历王国英张行行龚爱华葛璐李杰倪鑫刘鑫徐岷
- 关键词：胰腺癌
- 上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成
- 2015年
- 目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P<0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。
- 张尤历王国英赵义李萍刘鑫倪鑫徐岷
- 关键词：TGF-Β1纤维化
- 碱性成纤维细胞生长因子对胰腺星状细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对胰腺星状细胞(PSCs)增殖作用的影响。方法采用组织块分离法培养PSCs,通过免疫荧光检测结蛋白、神经胶质原纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴别。取培养的第2-3代PSCs,用不同浓度bFGF(5、10、20、25ng/ml)处理72h,CCK8法检测PSCs增殖情况,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白基因mRNA表达,Western blot方法检测α-SMA表达;其结果与对照组比较。结果 (1)不同浓度bFGF组的细胞增殖率明显高于对照组[(145.17±6.67)%、(152.96±7.50)%、(148.64±8.74)%和(144.83±10.06)%vs.100%](P<0.05)。(2)与对照组比较,bFGF促进Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达显著增加(P<0.05)。(3)与对照组比较,bFGF刺激PSCs后引起α-SMA表达显著增加(P<0.05)。结论 bFGF可促进PSCs增殖活化,在一定程度上可促进胰腺纤维化。
- 徐岷王国乙李萍王国英蔡菁周冰洁赵义蒋小猛顾威张尤历
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子胰腺星状细胞纤维化
- miR-15a和miR-16通过调控bcl-2蛋白的表达逆转结肠癌细胞的耐药性被引量：8
- 2014年
- 目的研究miR-15a和miR-16靶向调控bcl-2的表达对结肠癌细胞耐药性的逆转作用。方法将miR-15a和miR-16模拟物或抑制物转染结肠癌长春新碱（VCR）敏感细胞株HCT8或耐药细胞株HCT8／VCR，采用实时荧光定量PCR法检测miR-15a和miR-16的表达，Westernblot法检测bcl-2和P糖蛋白（P—gP）蛋白的表达，细胞计数盒8（CCK8）法检测不同浓度VCR对HCT8和HCTS／VCR细胞生长的抑制作用。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染miR-15a模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-15a的相对表达量分别为1．00、0．87±0．24和223．44±59．07，转染模拟物后，miR-15a的相对表达量明显升高（P〈0．001）；空白对照组、阴性对照组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-16的相对表达量分别为1．00、0．66±0．19和107．32±22．58，转染模拟物后，miR-16的相对表达量明显升高（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中bcl-2蛋白的相对表达量分别为1．00、0．97±0．02、0．51±0．06和0．65±0．03，转染模拟物后，bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．05）。而P-gp蛋白的表达在转染模拟物后没有明显变化。CCK8法检测结果显示，经1、5、25和125斗g／mlVCR处理后，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCTS／VCR细胞存活率的变化趋势基本-致，转染模拟物后，HCTS／VCR细胞的存活率明显降低（P〈0．05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞中miR．15a和miR．16的表达明显降低（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞bcl-2蛋白的表达明显上调（P〈0．05），而P-gP蛋白的表达没有明显变化。CCK8法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞的存活率明显高于空白对照�
- 徐岷周冰洁王国英王国乙翁星月蔡菁李萍陈晖蒋小猛张尤历
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤耐药性BCL-2
- 长链非编码RNA UCA1对胰腺癌细胞系侵袭转移的影响被引量：7
- 2015年
- 目的探讨尿路上皮癌相关1(UCA1)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞侵袭转移的影响。方法用荧光定量PCR检测11例胰腺癌组织和配对的癌旁组织及5种胰腺癌细胞系中UCA1的表达,通过RNA干扰技术降低胰腺癌细胞系Bx PC-3的UCA1水平,用Transwell侵袭实验和划痕实验观察Bx PC-3细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白水平。结果胰腺癌组织的UCA1水平高于相应的癌旁组织(P<0.05),UCA1差异性表达于5种胰腺癌细胞系;干扰UCA1后,Bx PC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均降低(P<0.01),侵袭能力和迁移能力明显减弱(P<0.01)。结论 UCA1在胰腺癌中高表达,下调UCA1通过降低MMP-2和MMP-9的表达减弱胰腺癌细胞系Bx PC-3的体外侵袭转移能力。
- 张尤历赵义张行行王国英龚爱华倪鑫徐岷
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移长链非编码RNA
- 蒿属香豆素对胰腺星状细胞的氧化、活化及纤维化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨中药茵陈蒿的主要成分蒿属香豆素对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)氧化、活化及细胞外基质沉积的影响。方法:分离PSCs并培养,免疫荧光法鉴定细胞,培养并传代至第3-5代后进行实验,分成空白组、丹酚酸B组、不同浓度香豆素组。分别培养24、48h后MTT法检测PSCs增殖情况。48h后通过比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化。免疫荧光、Western blot法检测各组平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原表达的情况。结果:与空白组相比,蒿属香豆素组的细胞增殖水平、MDA水平、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达明显降低,SOD水平显著增高(P<0.05)。结论:蒿属香豆素能有效降低PSCs的氧化应激水平,抑制其活化进而减轻纤维化。
- 张尤历蔡菁赵义陈晖王国英王国乙李萍周冰洁翁星月徐岷
- 关键词：氧化应激胰腺星状细胞纤维化
- 转化生长因子-β_2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用。方法组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;q RT-PCR及Western blot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况。结果免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性。TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和Col-Ⅰ表达量显著增加,呈典型活化状态;q RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β2可诱导PSCs活化及上皮间质转化。
- 张尤历李萍王国英赵义王国乙蔡菁郭柔玉刘鑫徐岷
- 关键词：转化生长因子-Β2胰腺星形细胞活化上皮间质转化
