武华
- 作品数：96 被引量：395H指数：13
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：农业公益性行业专项“牛羊重大疫病防控技术研究与产业化”公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛支原体研究进展被引量：17
- 2014年
- 牛支原体是牛的一种重要的病原体,可引起牛的肺炎、乳腺炎和关节炎等疾病,且由于牛支原体基因和细胞膜表面蛋白的多变性,国内外还没有非常有效的防制方法。牛支原体感染每年都会给养牛业造成严重的经济损失,因此十分有必要对牛支原体进行深入研究,开发牛支原体疫苗及诊断技术。本文从牛支原体的病原特性和变异性、牛支原体感染的诊断和防制以及牛支原体疫苗研究等方面综述国内外的研究进展,以期对今后牛支原体的研究工作提供帮助。
- 王海勇武华
- 关键词：牛支原体疫苗
- 牛副流感病毒3型核衣壳蛋白基因的真核表达被引量：2
- 2012年
- 根据牛副流感病毒3型(BPIV-3)内蒙09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064)设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出牛副流感病毒3型分离株的核衣壳蛋白(N)基因,通过NheI和NotI限制性内切酶位点亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+),获得真核重组质粒pcDNA3.1-N。采用Superfect转染试剂将重组质粒转染至BSR细胞中,转染后的BSR细胞经间接免疫荧光试验和RT-PCR方法检测,重组质粒pcDNA3.1-N在BSR细胞中能正确表达N蛋白。本研究结果为BPIV-3新型疫苗的研制奠定基础。
- 师新川温永俊王凤雪王炜王建科程世鹏武华
- 关键词：真核表达N基因
- 表达PRRSV强弱毒Nsp2的Marc-145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响被引量：2
- 2012年
- 为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-145细胞系单层,利用G418抗性筛选建立细胞系,通过PCR和RT-PCR鉴定。PRRSV感染筛选的细胞系,检测病毒TCID50。结果建立稳定表达TJ株和TJM株Nsp2基因的猴肾细胞系Marc-145-TJ Nsp2和Marc-145-TJM Nsp2;在表达PRRSV TJ株和TJM株Nsp2蛋白的Marc-145细胞上感染PRRSV病毒,在复制早期病毒时增殖速度快,即Nsp2蛋白对PRRSV复制早期有正向调控作用,并且强毒的Nsp2此作用更明显。
- 王凤雪刘准温永俊冷雪李真光武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞系
- 牛病毒性腹泻病毒BVDV-JL株的分离与鉴定被引量：22
- 2011年
- 本研究从吉林某牛场表现严重腹泻症状濒死牛的胸腺病料样品中分离一株病毒,该病毒在MDBK细胞中盲传4代无细胞病变产生,而通过RT-PCR和间接免疫荧光试验、微量血清中和试验检测表明该分离病毒株为牛病毒性腹泻病毒(BVDV),并命名为BVDV-JL。将BVDV-JL株F4代细胞培养液(107.13TCID50/mL)经鼻内喷雾人工感染3月龄～6月龄BVDV抗体阴性黄牛(6mL/头),感染牛表现连续两天体温升高,白细胞数量下降,并在感染牛的白细胞提取物及鼻拭子样品中分离到该病毒株,表明该病毒株具有致病性。BVDV-JL株的分离对进一步开展疫苗研发、流行病学调查以及致病机理等方面的研究具有重要意义。
- 张淑琴郭利冷雪张亭亭吴永旺武华
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒
- PRRSV非结构蛋白2:病毒致病性、免疫和诊断中的一个关键蛋白
- PRRS引起猪繁殖与呼吸系统疾病,是给养猪业带来重要经济损失的猪病.猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)的复制酶非结构蛋白2(Nsp2)被认为是PRRSV基因组中最易变区域.本综述讨论了PRRSV Nsp2的分子生物...
- 王凤雪宋妮陈立志程世鹏武华温永俊
- 不同毒力牛传染性鼻气管炎病毒感染MDBK细胞的差异蛋白组学被引量：1
- 2016年
- 毒力不同的中传染性鼻气管炎病毒(IBRV)株感染宿主细胞后,会产生不同的临床免疫反应,目前关于强弱IBRV毒株感染宿主细胞后的差异蛋白质组学研究尚未报道。本研究使用基于双向电泳与MALDI-TOF/MS的蛋白质组学技术,对比分析了MDBK细胞感染IBRV强毒株LN01/08与弱毒株LNM前后蛋白质组变化,共鉴定了8个差异蛋白。结果显示,丙酮酸激酶(PKM2)、肌切蛋白(SCIN)、转化生长因子(TGFBR1)及热应激蛋白90(Hsp90)在IBRV LN01/08株与IBRV LNM株感染组中表达量发生显著差异,其中PKM2和TGFBR1在IBRV LN01/08株组中高表达,Hsp90在IBRV LNM株感染组和MDBK细胞对照组中高表达,在IBRV LN01/08感染组中无表达。
- 郭利刘林娜廖鹏杨艳玲张淑琴武华程世鹏
- 鹿科经济动物抗结核病研究进展
- 动物抗病育种具有重大的经济效益，正逐渐引起动物育种专家的兴趣。随着新西兰赤鹿抗结核病育种研究的不断深入，鹿科经济动物的抗病育种也悄然兴起，本综述将重点对目前动物抗结核病育种的途径和一些抗病候选基因的研究进展进行总结，为我...
- 杨艳玲温永俊武华
- 关键词：抗病育种结核病候选基因
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析被引量：5
- 2012年
- 从天津和内蒙古猪场中分离到2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（TJ和NM1）,将TJ株经Marc-145细胞连续传代92代,得到致弱疫苗株TJM株。采用RT-PCR方法扩增TJ、NM1和TJM完整的ORF5基因片段,进行序列测定,并与其他国内外毒株的ORF5基因序列进行了比较和变异分析。结果表明：TJ株和NM1株ORF5基因与国内分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）具有较高的同源性,均为99.5%~99.8%,与欧洲型PRRSV同源性最低,分别为63.3%和63.5%。致弱疫苗株TJM与其原始毒株TJ相比有4个氨基酸发生突变（F23S,G80V,R151K,Q196R）,这些突变可能与TJ株毒力的降低有关。
- 冷雪李真光王凤雪温永俊王炜夏铭崎武华
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因
- 犬细小病毒BJ5株分离和VP2序列分析被引量：4
- 2009年
- 从北京地区疑似犬细小病毒感染的病死犬血样粪便中分离1株犬细小病毒并进行VP2基因扩增和序列分析,命名为CPV-BJ5株。应用CrFK细胞分离病毒,经2次传代后出现稳定的血凝特性(HA);免疫荧光试验表明,感染分离毒的细胞与抗CPV单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光;试验犬接种分离病毒后14d内均表现为体温升高、食欲减退、腹泻及血便等典型发病症状;序列测定结果表明分离病毒的VP2基因与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株的核苷酸相似性分别为99.2%、99.5%、99.1%、99.9%,氨基酸相似性分别为99.5%、100%、100%、99.3%;与CPV-Northern、CPV-39株的VP2基因核苷酸相似性为98.9%、98.1%,氨基酸相似性为98.8%、99.5%。表明该分离病毒与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株在基因型上同属于CPV-2a毒株。
- 王洪林谭斌陈微晶王秀东武华
- 关键词：犬细小病毒
- 猪A群轮状病毒LN-01-2013株的分离与鉴定被引量：6
- 2014年
- 将病料与等体积2.5g/L胰酶溶液混合均匀,于37℃恒温培养箱中孵育1h,分别接种于MA-104、Marc-145、ST细胞系以分离病毒并筛选该毒株最适细胞系。通过RT-PCR以及重组质粒构建对其进行分子生物学鉴定以及遗传进化分析。结果显示,成功分离出猪A群轮状病毒LN-01-2013株,MA-104细胞系为其最适细胞系。LN-01-2013株的VP4基因型与P[7]基因型同源性最高,VP7基因型与G[9]基因型同源性最高。根据A群轮状病毒最新分类方法,LN-01-2013分离株属于P[7]G[9]型。
- 张贺伟王鑫夏铭崎刘阳欣武华
