梁镇和
- 作品数：16 被引量：78H指数：5
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国科学院基础性研究重大项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 易于基因产物加工和快速纯化的融合表达载体被引量：5
- 1994年
- 从Protein A基因酶切分离出编码完整的结合IgG的B、C区域(PABC)的相应DNA片段,克隆进噬菌体M13。通过人工合成寡聚核苷酸引物,突变修饰B、C区域内分别含有的羟胺裂解位点,变Asn-Gly为Asn-Ala。利用突变修饰后的PBACm编码基因片段,构建了一组含有不同阅读框架的融合蛋白表达载体。进一步分别重组克隆了含人工合成的人胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、人和牛生长激素释放因子(GRF)等基因的表达质粒,在大肠杆菌中高效表达出PABC-IGF-Ⅰ、PABC-hGRF、PABC-bGRF及其衍生型融合蛋白。经SDS-PAGE测定分析,每立升摇瓶的融合蛋白产量可达100mg以上。上述高效表达的PABC融合蛋白,通过固相亲和层析柱一步分离,获得SDS-PAGE鉴定为近均一分子量纯化的PABC融合表达产物。
- 李伯良杨新颖江智红胡明梁镇和
- 关键词：蛋白A点突变
- [B9谷氨酸，B10门冬氨酸]人胰岛素
- 本发明为一种利用蛋白质工程方法获得的人胰岛素——[B9Glu，B10Asp]人胰岛素，其特征在于B链第9位与第10位均为酸性氨基酸，[B9Glu，B10Asp]人胰岛素的受体结合能力为猪胰岛素的34.4％，体内生物活力则...
- 冯佑民梁镇和唐月华刘滨张友尚
- 文献传递
- 重组天然和新型人胰岛素及其制备方法
- 本发明提供了新型重组人胰岛素:去B1人胰岛素,[B12N]人胰岛素,[B16X]人胰岛素和[B26X]人胰岛素。它们保留了大部分的人胰岛素生物活性,而且后三种新型人胰岛素能够在较高浓度下仍以单体形式存在,从而更具速效优点...
- 冯佑民梁镇和张友尚唐月华王燕陈晖史民王琼庆郭占云刘滨朱尚权许英镐
- 文献传递
- 单链胰岛素前体在酵母中的分泌表达及其转变成人胰岛素被引量：7
- 1997年
- 将化学合成的单链猪胰岛素前体(PIP)基因和用聚合酶链反应得到的α交配因子前导顺序(αMFL)基因插入质粒pVT102-U的醇脱氢酶基因ADH1的启动子和3’终止顺序之间而生成质粒pVT102-U/αMFL-PIP.被pVT102-U/αMFL-PIP转化的酵母(Saccharomyces cerevistae)可表达单链前体并分泌到培养基中.前体在纯化后可通过胰蛋白酶的转肽作用转变成人胰岛素.纯化的人胰岛素具有全部活力并可结晶.人胰岛素的总收率为每升培养液25mg.
- 朱尚权徐明华许英镐张新堂张友尚胡红明蔡若蓉冯佑民贺潜斌唐月华刘滨梁镇和
- 关键词：人胰岛素分泌表达酵母
- 重组天然和新型人胰岛素及其制备方法
- 本发明提供了新型重组人胰岛素：去B1人胰岛素，[B12X]人胰岛素，[B16X]人胰岛素和[B26X]人胰岛素。它们保留了大部分的人胰岛素生物活性，而且后三种新型人胰岛素能够在较高浓度下仍以单体形式存在，从而更具速效优点...
- 冯佑民梁镇和张友尚唐月华王燕陈晖史民王琼庆郭占云刘滨朱尚权许英镐
- 文献传递
- 寡聚脱氧核苷酸d(G-C)_3的激光喇曼谱及其分析
- 1992年
- 用改进的固相磷酰三酯法合成了oligo-d(G-C)_3。以氩离子激光为激发光源,波长488nm.,在室温条件下,分别测定了纯化后的oligo-d(G-C)_3和其组分单体5’-dGMP和5’-dCMP的激光喇曼谱。观察到被测定的物质在300-2500cm^(-1)频率区间,各自都有其特征的谱形和喇曼峰。5’-dGMP和5’-dCMP谱中大多数特征峰在寡聚体的谱中消失,而在oligo-d(G-C)_3谱中出现了几处新的喇曼峰。经查证,峰832,851和899cm^(-1)系糖-磷酸主链的特征喇曼峰,另外几处峰与DNA的构象有关。实验结果表明oligo-d(G-C)_3在水溶液中(室温)主要以B-构象存在。
- 黄汝多戴艳姿龚立三黄德民梁镇和汤锦炎崔益本王振海刘颂豪
- 重组单链胰岛素的连接肽与其生物功能的关系被引量：4
- 2001年
- 为研究重组单链胰岛素的生物活性与连接肽之间的关系, 用基因定点突变的方法分别以二肽A-K, 七肽A-A-A-A-A-A-K和十二肽A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-K连接胰岛素的B30和A1, 得到3个单链胰岛素分子PIP, [A]5PIP和[A]10PIP. 它们的受体结合能力分别为胰岛素的0.14%, 14.3% 和11.1%, 体内生物活性与受体结合能力一致, 而它们的促生长活性分别为胰岛素的17%, 116.3%和38%. 结果表明: (ⅰ) 单链胰岛素也具有胰岛素的促代谢和促生长功能; (ⅱ) 单链胰岛素与胰岛素受体的结合能力与连接肽的长度和氨基酸组成密切相关, 其受体结合能力随连接肽的改变, 可由无到100%, 进一步说明胰岛素与其受体结合时, B链C端远离A链N端是必需的; (ⅲ) 单链胰岛素的促细胞生长能力也与连接肽长度和组成密切相关, 且比其自身的促代谢能力强.
- 黄一丁梁镇和冯佑民
- 关键词：受体结合生物活性连接肽
- [B9谷氨酸,B10门冬氨酸]人胰岛素
- 本发明为一种利用蛋白质工程方法获得的人胰岛素-[B9Glu，B10Asp]人胰岛素，其特征在于B链第9位与第10位均为酸性氨基酸，[B9Glu，B10Asp]人胰岛素的受体结合能力为猪胰岛素的34.4%，体内生物活力则与...
- 冯佑民梁镇和唐月华刘滨张友尚
- 文献传递
- 左手螺旋Z-DNA的研究:人工合成的Oligod(G—C)_n在PAGE中的异常泳动行为
- 1991年
- 为研究DNA的B,Z构象的相互转换,我们人工合成了dG-dC交替互补顺序的六聚体与十二聚体,在用PAGE法纯化过程中,发现5',3'-末端为双羟基的寡聚体的泳动速率是d(G-C)_3>d(G-C)_2>d(G-C),5'—末端带磷酸基的相应寡聚体的泳动速率则是:d~*(G-C)>d~*(G-C)_2>d~*(G-C)_3,二者行为正好相反,而5',3'—末端为双羟基的d(G-C)_5与d(G-C)_6和5'—末端带磷酸基的十聚与十二聚体在PAGE中的泳动行为是一致的。由此推测5',3'—末端为双羟基的寡聚体在PAGE中的异常行为的转折点在六聚到十聚之间。
- 黄汝多黄德民王振海梁镇和汤锦炎戴艳姿崔益本龚立三刘颂豪
- 关键词：脱氧核糖核酸PAGE
