杜菲
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细菌荧光酶的融合luxAB基因在肝癌细胞中的表达被引量：2
- 2001年
- 目的 探索细菌荧光酶的融合luxAB基因作为新的报告基因在肝癌细胞中表达的可行性。方法 基于PCR的位点突变技术 ,构建了含有细菌荧光酶融合AB基因的哺乳动物表达载体pcDNA3 luxAB ,通过脂质体转染 ,使其在肝癌细胞BEL740 2中稳定表达。以序列测定和PCR分别确定融合luxAB基因构建的正确性和质粒转染的成功。以MTT和生物发光法分别测定细胞群体生长曲线和细菌荧光酶发光强度。结果 构建的融合luxAB基因是单顺反子 ,与设计完全一致 ;pcDNA3 luxAB的转染对BEL740 2肝癌细胞的群体生长无显著影响 ;表达载体在BEL740 2细胞中可稳定表达 ,在细胞水平可检测到 (8.71± 1.2 1)mV/ 40 μg蛋白的细菌荧光酶发光强度。
- 茆灿泉杨树德赵玫范云霞徐枫杜菲杨华卫袁兴华黄常志
- 关键词：报告基因基因转染肝癌
- 外源人gp96基因在肿瘤细胞中的高效表达
- 2002年
- 背景与目的:从肿瘤细胞中分离出的热休克蛋白gp96制备物免疫小鼠可产生抗相应肿瘤的特异性保护性细胞毒性T细胞免疫应答,为肿瘤免疫治疗开辟了一条新的可行性途径。但通常gp96在细胞中的表达水平较低,从有限的细胞或组织中获得的gp96制备物难以满足研究的需要。因此,本研究拟为制备高质量和充足的gp96而建立高表达gp96的单克隆细胞株。方法:构建人gp96cDNA的重组表达质粒pcDNA-hgp96并将其转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆,然后用Western印迹分析单克隆细胞株的gp96表达量。结果:成功构建了人gp96的重组表达质粒,建立了稳定转染的单克隆细胞株,并筛选出一株高表达gp96的单克隆细胞。结论:成功建立了高表达gp96的单克隆细胞株,为gp96抗肿瘤免疫的研究奠定了基础。
- 岳培彬杨树德黄常志赵玫杜菲林梁余权周启兵
- 关键词：热休克蛋白GP96抗肿瘤免疫免疫应答
