李涛
- 作品数：79 被引量：56H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 利用TAT多肽增强腺病毒对细胞感染效率的研究被引量：1
- 2005年
- 蛋白转导多肽本身或携带生物大分子能以一种不明机制的方式高效地穿过真核细胞质膜并且几乎没有组织选择性。这为生物药物研究、基因治疗等领域带来了新的希望。最近有研究表明:来源于HIV-1的TAT蛋白的蛋白转导结构域多肽可以显著地提高重组腺病毒感染细胞和实验动物的效率。在对。HeLa且和Vero-E62种具有不同病毒易感性的细胞进行重组腺病毒感染实验时发现TAT多肽可以明显地提高重组腺病毒对HeLa细胞的感染及在细胞中外源报道基因的表达,但是对Vero-E6细胞却没有效果,表明TAT多肽增强重组腺病毒的感染与靶细胞类型有关,而并不像转导现象那样没有组织差异。这为蛋白转导技术在病毒载体中的应用提供了参考,但其中涉及的蛋白转导的机制有待进一步实验研究。
- 党颖朱旭东王应雄李涛王宇新黄培堂
- 关键词：蛋白转导TAT蛋白细胞质膜感染细胞报道基因真核
- 细胞质膜蛋白质组学被引量：3
- 2006年
- 随着基于质谱的大规模蛋白质鉴定技术的建立,蛋白质组学得到迅速发展。同时由于质膜在细胞生命活动中的重要作用,质膜蛋白质组学逐渐兴起,并发展成为蛋白质组学研究中的重要组成部分。但由于膜蛋白尤其是内在膜蛋白的强疏水性、低丰度,造成蛋白质提取、分离和鉴定相对困难,使质膜蛋白质组成为蛋白质组研究中的一个技术难点。
- 李涛姜颖贺福初
- 关键词：质膜蛋白质组
- 细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用
- 本发明公开了细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用。本发明所公开的细胞通路调控分子为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MS...
- 王慧李涛刘雄刘坤宁年智
- 文献传递
- 蒽贝素或蒽贝素类化合物的一种新用途
- 本发明公开了一种蒽贝素或蒽贝素类化合物的一种新用途。所述新用途为蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备预防和/或治疗梭菌属细菌毒素中毒的药物中的应用。所述蒽贝素或蒽贝素类化合物对梭菌属神经毒素具有更广范围的抑制和拮抗作用，避免了采...
- 王慧李涛卢晓雪刘坤
- 文献传递
- 埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用
- 本发明公开了埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用。本发明公开的与EBOV病毒感染相关的血液中miRNA为hsa‑miR‑151a‑5p、hsa‑miR‑744‑5p、hsa‑miR‑423‑5p、hsa‑miR‑3...
- 王慧曹务春李涛刘雄江佳富户义邓永强刘坤宁年智
- 文献传递
- B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。
- 罗森陈芳红李涛王慧
- 关键词：肉毒毒素原核表达
- 肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证
- 2014年
- 目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。
- 李崭李涛陈芳红刘雄周育森王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌
- KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
- 2013年
- 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
- 刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧
- 关键词：细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶Β内酰胺类抗生素
- A型肉毒毒素轻链的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：4
- 2015年
- 目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,IPTG诱导目的蛋白高效表达,表达产物经Ni螯合亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论:构建了重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,原核表达获得高水平可溶性重组Bo NT/A LC,纯化得到纯度较高的蛋白质,重组Bo NT/A LC的酶活略高于A型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于Bo NT/A LC抑制剂高通量体外检测方法研究。
- 罗森齐芬芳宫路路刘昊李涛王慧
- 关键词：原核表达
- 融合蛋白SAmB及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白SAmB及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白，命名为SAmB，包括处于N端的II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白和处于C端的I型志贺毒素的B亚单位蛋白；上述II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白是将...
- 王慧蔡昆李涛侯晓军王琴高翔
