彭世波
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- shRNA沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨DNMT1在膀胱肿瘤形成过程中的作用机制。方法实验分为空白对照组(给予脂质体)、HK组(含无效干扰序列的质粒)及pshRNA-DNMT1组;常规培养膀胱癌T24细胞株,用脂质体Lipofectamine 2000将构建成功的重组质粒pshRNA-DNMT1转染进入T24细胞,然后进行RT-PCR、Western blot检测各组DNMT1 mRNA及蛋白质水平变化;进行MTT、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组T24细胞增殖和凋亡情况。结果重组质粒pshR-NA-DNMT1成功转染进入膀胱癌T24细胞;经RT-PCR检测pshRNA-DNMT1组DNMT1 mRNA表达减少,24、48、72h的抑制率分别是28.44%、52.48%、70.91%;转染pshRNA-DNMT1后,T24细胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分别为24.27%、57.79%、69.74%;在MTT检测中,pshRNA-DNMT1组的细胞增殖抑制率在24、48、72 h分别为(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,与空白对照组比较各时间点差异均有极显著性意义(均P<0.01);转染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1组细胞凋亡率分别为(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,与空白对照组比较差异均有极显著性意义(均P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌细胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表达,并在一定程度上抑制T24细胞的增殖和促进凋亡。
- 张士龙曾甫清彭世波董继华廖贵益汪良
- 关键词：细胞增殖膀胱肿瘤
- DNA甲基转移酶3b催化区保守序列shRNA真核表达载体构建被引量：1
- 2008年
- 目的构建针对基因DNA甲基转移酶3bmRNA催化区保守序列的shRNA真核表达载体,并对其克隆进行鉴定。方法以DNMT3bmRNA序列为靶基因设计3条shRNA和一条阴性对照HK,应用基因重组技术将其克隆到真核表达载体PGensil-1中,构建真核表达载体P-DNMT3b-shRNA1、P-DNMT3b-shRNA2、P-DNMT3b-shRNA3、P-HK。将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中,接种于LB平板后分别挑取5个单克隆菌落进行扩增,经筛选后对提取质粒进行测序鉴定。结果重组质粒经SalⅠ酶切鉴定得到大小2个基因片段,大片段约为4.55kb,小片段约为440bp,与设计相同;四组重组质粒经测序鉴定显示插入完全正确。结论成功构建了P-DNMT3b-shRNA(1、2、3)及HK真核表达载体,为下一步实验奠定了基础。
- 张士龙曾甫清朱朝辉彭世波汪良董继华
- 关键词：DNA甲基转移酶3B基因基因重组RNA干扰
- 重复肾及其合并畸形的临床诊断和手术治疗
- 目的:1.总结和探讨重复肾及其合并畸形的临床诊断方法。
2.总结重复肾及其合并畸形的手术治疗经验。
方法:回顾分析35例重复肾患者的临床资料。
结果:B超检查30例,3例漏诊,2例误诊。IV...
- 彭世波
- 关键词：重复肾合并畸形手术治疗
- 文献传递
- 携带DNMT1-shRNA真核表达载体的构建及其对DNMT1表达的影响
- 2008年
- 目的构建携带针对DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA的shRNA真核表达载体,检测重组质粒对DNMT1的沉默效应。方法以DNMT1mRNA序列为靶基因设计shRNA和阴性对照序列(HK),应用基因重组技术将其克隆到真核表达载体P-Gensil-1中,构建真核表达载体P-DNMT1-shRNA、P-HK。将重组质粒转染到大肠杆菌DH5α中,经筛选后对提取质粒测序鉴定。用构建的重组质粒转染T24细胞,进行RT-PCR和western blot检测,观察DNMT1mRNA和蛋白的变化。结果重组质粒经SacⅠ酶切得到大小两个基因片段,与设计相同,经测序显示插入完全正确;DNMT1mRNA在24h、48h和72h的抑制率为28.44%、52.48%、70.91%;其蛋白在24h、48h和72h的抑制率为24.27%、57.79%、69.74%。结论成功构建了P-DNMT1-shRNA真核表达载体并能有效沉默T24细胞中DNMT1mRNA和蛋白的表达。
- 曾甫清张士龙彭世波汪良
- 关键词：DNA甲基转移酶1RT-PCRWESTERNBLOT
- ShRNA沉默基因DNA甲基转移酶3b的表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响
- 2008年
- 目的体外研究重组质粒pshRNA-DNMT3b对膀胱癌T24细胞中DNMT3bmRNA和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响，初步探讨DNMT3b在膀胱肿瘤发生过程中的作用。方法实验分为空白对照组、HK组及pshRNA-DNMT3b组（24、48、72h）；常规培养T24细胞，用脂质体lipofectamine2000将重组质粒pshRNA-DNMT3b转染进入T24细胞，后进行RT．PCR、WesternBlot、MTY检测，观察pshRNA-DNMT3b对T24细胞中DNMT3bmRNA、蛋白质水平变化以及细胞增殖的影响。结果重组质粒pshRNA-DNMT3b成功的转染进入T24细胞；RT-PCR电泳结果用Gel-proanalyzer图像分析系统进行灰度分析，空白对照组、HK组、pshRNA-DNMT3b组（24、48、72h）条带的IOD相对比值（DNMT3／β-actin）分别是（99．56±1．24）％、（99．12±1．35）％、（75．77±1．42）％、（44．69±1．05）％和（20．52±0．89）％；Westernblot图像分析结果各组的相对比值分别是（99．43±1．28）％、（98．90±1．31）％、（67．83±1．02）％、（43．43±1．05）％和（21．92±0．89）％；在MTF检测中空白对照组和HK组之间差异无统计学意义（P〉0．05），pshRNA-DNMT3b组仅在72h后和前2组之间差异有统计学意义（P〈0．01），但抑制率仅增加0．45％左右。结论重组质粒pshRNA-DNMT3b能有效的降低膀胱癌1、24细胞中基因DNMT3bmRNA的转录及蛋白的表达，但在抑制细胞增殖上作用甚微。
- 张士龙曾甫清董继华朱朝辉廖贵益彭世波
- 关键词：RNA干扰膀胱肿瘤
- Skp2和P27^(kip1)在膀胱移行上皮细胞癌中的表达及意义被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨Skp2和P27kip1在膀胱移行上皮细胞癌(BTCC)中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法观察74例BTCC和13例正常膀胱黏膜石蜡标本中Skp2和P27kip1的表达情况,并结合临床资料分析它们的免疫活性在正常膀胱黏膜和膀胱移行上皮细胞癌上表达的差异,以及和肿瘤分级、分期、等病理参数之间的关系。结果:膀胱移行上皮细胞癌中Skp2和P27kip1阳性表达率分别为43.24%和45.95%。Skp2在BTCC中的阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜(7.69%),在BTCC中随病理分级升高而升高,但与临床分期无明显的统计学意义,复发组高于初发组,在初法或复发组及瘤体大小组没有明显的统计学意义;P27kip1在BTCC中的阳性表达率低于正常膀胱黏膜(76.92%),并随病理分级、临床分期升高而下降,在初发组高于多复发组,其他两组病理参数组则没有明显的统计学意义;Skp2与P27kip1二者在BTCC中的表达呈负相关性(r=-0.335,P=0.004)并具有统计学意义。结论:Skp2和P27kip1在膀胱移行上皮细胞癌中的表达是判断其生物学行为的重要指标之一,并可能为以后治疗肿瘤提供一个新的靶点。
- 张士龙曾甫清彭世波汪良
- 关键词：膀胱移行上皮细胞癌SKP2P27^KIP1
- 重复肾双输尿管畸形的手术治疗被引量：14
- 2007年
- 目的:探讨重复肾双输尿管畸形的手术治疗效果。方法:报告22例重复肾患者的临床资料,均经影像学检查诊断,完全性重复肾15例,不完全性重复肾7例。均给相应的手术方法治疗,共手术24次。结果:术后22例患者均康复出院。12例患者在拔除术中放置的双J管前,行B超或KUB加IVP检查,提示肾积水情况较前改善,未发现结石影及其它病变。17例获随访的患者都没有因原患的重复肾疾病而引起不适。结论:手术治疗应个体化,视肾功能、并发何种尿路畸形、病变的解剖位置,以及严重程度和尿路感染情况选择,包括对重复肾本身及并发症的处理。
- 彭世波曾甫清汪良张士龙李恒鞠文
- 关键词：诊断显像外科手术泌尿系
- 携带DNMT3b-shRNA干扰序列真核表达载体的构建及筛选
- 2009年
- 目的:构建携带针对靶基因DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b,DNMT3b)mRNA的shRNA真核表达载体,并从构建成功的重组质粒中筛选出沉默效应最强的干扰质粒。方法:以基因DNMT3bmRNA为靶序列设计三条shRNA序列,应用基因重组技术将其克隆到真核表达载体pG-ensil-1中,构建重组质粒pGensil-1-DNMT3b-shRNA1、pGensil-1-DNMT3b-shRNA2、pGensil-1-DNMT3b-shRNA3;经酶切鉴定和测序分析后,将重组质粒分别转染T_(24)细胞中,应用RT-PCR和Western-blot检测各组质粒对DNMT3bmRNA和蛋白的表达抑制情况,并筛选最有效的干扰序列。结果:各重组质粒经酶切鉴定和测序分析显示插入完全正确。RT-PCR结果经图像分析,shRNA1、shRNA2和shRNA3对DNMT3bmRNA的抑制率分别为20.44%、79.91%和54.48%;Western blot结果经图像分析,shRNA1、shRNA2和shRNA3对DNMT3b蛋白的抑制率分别为17.27%、77.74%和56.79%。结论:成功构建了质粒pGensil-1-DNMT3b-shRNA(1,2,3),并筛选出pGensil-1-DNMT3b-shRNA2为沉默效应最强的质粒。
- 张士龙曾甫清彭世波汪良
- 关键词：DNA甲基转移酶3B基因重组SHRNA
