张文杰
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体。方法体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用MluⅠ和SalⅠ进行双酶切,将AQP5全长序列克隆入pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率。Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白。结果测序结果和Western blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml。结论成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体。
- 张文杰徐勇王斌徐泽宽杨力沈历宗徐皓
- 关键词：水通道蛋白SGC7901细胞293T细胞慢病毒载体
- 水通道蛋白3与紧密连接的相关性被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接(tight junction,TJ)的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用Caco-2细胞系在体外构建肠黏膜上皮屏障,构建沉默AQP3的shRNA慢病毒载体,建立稳定转染细胞系.实验分为3组:空白对照组(BLANK)、阴性对照组(NC)、AQP3干扰组(AQP3 shRNA).Western blot验证TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达情况;并且采用免疫细胞化学法观察TJ相关蛋白的分布和结构变化.结果:RT-PCR及Western blot结果显示在Caco-2细胞系中成功沉默AQP3的表达.干扰组与对照组相比下降约75%.Western blot结果显示AQP3干扰组TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达明显降低.免疫细胞化学结果显示Caco-2细胞间Occludin以及Claudin-1主要表达在细胞膜和/或胞浆中,Occludin和Claudin-1细胞间棕褐色颗粒减少,结构变模糊.相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏.结论:靶向AQP3的shRNA技术可以引起TJ的结构变化和相关蛋白的表达分布的异常.
- 张文杰徐勇王斌徐皓
- 关键词：水通道蛋白3CACO-2
- 肿瘤大小对小肝癌患者预后评估的影响
- ＜正＞目的探讨小肝癌不同亚组的预后,并评估肿瘤大小在监测其预后中的作用。方法回顾分析了1988-2005期间SEER数据库中共9268例的小肝癌患者,通过X-rile软件计算出最理想的肿瘤大小的临床界值,并根据此界值将小...
- 张文杰孙倍成
- 文献传递
- 胃癌中水通道蛋白3的表达与淋巴结转移的关系被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白3(AQP3)在胃腺癌不同分期中的差异表达与淋巴结转移的关系。方法:采用定量PCR、Western blot法对80例不同分期的胃腺癌组织及作为对照的癌旁非肿瘤组织中AQP3 mRNA和蛋白的表达分别进行检测,并与各临床病理分期中淋巴结转移情况进行分析。结果:AQP3在胃腺癌不同分期中的差异表达影响胃癌的淋巴结转移,有淋巴结转移的T1、T2、T3、T4期(UICC,2010)肿瘤组织中AQP3的表达明显高于无淋巴结转移者。结论:胃腺癌肿瘤组织中高表达的AQP3可能对患者淋巴结转移的发生有促进作用,因此AQP3有望成为预测胃腺癌转移和评估预后的重要指标,并可能是胃癌治疗靶点之一。
- 徐勇张文杰杨力徐泽宽徐皓
- 关键词：水通道蛋白3胃腺癌淋巴结转移
