宋晓红
- 作品数：12 被引量：37H指数：5
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诺舒治疗终末期肝病患者异常子宫出血的临床应用研究
- 目的：探讨诺舒(NovaSu re)阻抗控制子宫内膜切除治疗肝功能B、C级肝硬化失代偿期患者异常子宫出血的安全性、有效性和患者的满意率。方法：2012年6月～2014年5月,对17例肝功能B、C级肝硬化失代偿期合并异常子...
- 刘青刘继娟李秀兰宋晓红边茜柳鑫
- 关键词：肝硬化失代偿期异常子宫出血
- RNAi抑制Akt2基因表达对卵巢癌细胞系A2780放射敏感性的影响被引量：2
- 2008年
- 背景与目的:许多研究已经表明蛋白激酶B(PI3K/Akt)在肿瘤细胞恶性增殖及肿瘤对放化疗的拮抗中起着重要作用,Akt2是Akt家族成员之一。本研究应用RNAi(RNA interference,RNAi)技术抑制Akt2基因的表达,观察其对肿瘤细胞生长和放射敏感性的影响。方法:构建Akt2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,同时以转染空载体和未转染组作为对照,3组细胞命名为pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780)运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹方法比较转染前后Akt2表达的差异;四甲基偶氮唑蓝实验绘制细胞生长曲线;克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;6MV X线10Gy照射后48h收集细胞,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况。结果:与对照相比,shRNA可抑制Akt2mRNA转录和蛋白的表达,差异显著(P<0.05);pAkt2-shRNA/A2780细胞生长明显慢于pEGFP/A2780和A2780细胞;pAkt2-shRNA/A2780细胞克隆形成率明显低于pEGFP/A2780细胞和A2780细胞(P<0.05);pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780细胞凋亡率分别为(78.3±2.2)%、(41.2±1.8)%和(40.4±2.0)%,差异有显著性(P<0.05)。结论:转染针对Akt2基因shRNA真核表达载体,抑制卵巢癌细胞中Akt2基因表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性。
- 孙冬岩翁丹卉宋晓红夏曦卢运萍马丁
- 关键词：卵巢肿瘤RNA干扰细胞凋亡AKT2
- 蛋白酶体抑制剂联合紫杉醇对卵巢上皮性癌细胞药物敏感性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇单独作用及联合作用于卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞株SKOV3的效果，并对其诱导细胞凋亡的分子机制进行探讨。方法波替单抗与紫杉醇单独或联合（50nmol／L波替单抗、90nmol／L紫衫醇或50nmol／L波替单抗＋90nmol／L紫衫醇）作用于SKOV3细胞后，四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞增殖活性并计算细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，蛋白印迹法检测磷酸化蛋白激酶B（AKT）和磷酸化糖原合成酶激酶3B（GSK-3p）蛋白的表达水平。结果波替单抗与紫衫醇联合作用于SKOV3细胞，12、24、36、48及72h各时间点的细胞存活率分别为（65．2±5．8）％、（58．3±14．4）％、（35．3±5．0）％、（19．2±1．5）％和（11．4±2．5）％，与单用紫杉醇比较，细胞增殖抑制效果增强，各时间点分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。单用紫杉醇、单用波替单抗和两者联用的细胞凋亡率分别为（14．7±0．5）％、（15．1±0．8）％和（20．5±0．7）％，波替单抗与紫杉醇联用的细胞凋亡率明显增高，分别与单用紫杉醇或单用波替单抗比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。不同药物处理细胞后，磷酸化AKT和磷酸化GSK-3B蛋白的表达水平均有不同程度降低，以波替单抗与紫杉醇联用者降低最为明显[分别为（3．2±0．8）％、（19．3±0．4）％]，分别与单用紫杉醇、单用波替单抗、正常未处理细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇联用能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性；AKT／GSK-313信号通路可能在波替单抗与紫杉醇联用诱导细胞凋亡中发挥了重要作用。
- 翁丹卉栗妍孔繁飞范良生胡轶宋晓红邢辉王世宣马丁
- 关键词：肿瘤硼酸化物紫杉酚抗肿瘤联合化疗方案
- 糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%(、15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-3β表达上调;流式结果还显示,PI3K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%。结论磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。
- 宋晓红翁丹卉邢辉卢运萍王世宣马丁
- 关键词：糖原合酶激酶-3Β顺铂细胞凋亡卵巢癌
- 糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK3β)的p-GSK3β对紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用。方法:运用GSK3β特异性抑制剂氯化锂(LiCl)增加GSK3β的磷酸化水平,应用流式细胞仪和Hochest33342染色检测细胞凋亡和细胞周期,蛋白质印迹法检测GSK3β及GSK3β磷酸化水平。结果:蛋白质印迹法显示,抑制剂LiCl作用后,GSK3β磷酸化明显增加。流式结果显示,90nmol/L紫杉醇作用于OV2008细胞24h,通过亚G1峰检测其凋亡率为(29.75±1.54)%,而应用LiCl抑制剂预孵育的细胞,凋亡率为(15.23±0.95)%,差异有统计学意义,t=46.378,P=0.002。Hochest33342染色证实LiCl作用后可明显抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡形态学改变。流式结果周期分析显示,90nmol/L紫杉醇作用于OV2008细胞24h,与正常对照相比G2M(22.83±2.40)%,可见细胞呈现明显的G2M期阻滞G2M(69.68±1.48)%,而LiCl抑制剂的应用,可增强紫杉醇诱导的G2M期阻滞G2M(88.49±0.86)%,差异有统计学意义,t=20.407,P=0.003。结论:GSK3β磷酸化增加可抑制紫杉醇诱导的卵巢癌细胞的凋亡并增强其周期阻滞。
- 宋晓红翁丹卉邢辉卢运萍马丁王世宣
- 关键词：糖原合酶激酶-3Β紫杉醇细胞凋亡流式细胞术
- 三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用被引量：6
- 2008年
- 背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想。本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用。方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞。针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA。转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed。应用实时定量PCR(Real-timePCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应。结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05)。结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率。
- 翁艳洁翁丹卉夏曦宋晓红卢运萍王世宣马丁王常玉
- 关键词：RNA干扰外源基因DSRED短发卡状RNA
- 三位点GSK3β shRNA真核表达质粒的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建三位点干扰GSK3β基因的高效shRNA表达质粒载体。方法用DNA重组技术将针对人GSK3β基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pshRNA-U3中,构建shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β。脂质体介导转染人卵巢癌细胞株OV2008,流式细胞仪检测转染效率。运用实时定量PCR和Westernblot分别检测RNA水平和蛋白水平GSK3β的干扰效果。运用流式细胞仪检测紫杉醇诱导的凋亡率。结果经测序证实成功构建携带3个GSK3βshRNA的表达载体pshRNA-U3/GSK3β。RT-PCR和Westernblotting均证实重组质粒pshRNA-U3/GSK3β转染OV2008后可明显降低细胞内GSK3βmRNA丰度及GSK3β蛋白表达。FACS显示,干扰GSK3β可抵抗紫杉醇诱导的凋亡。结论成功构建了针对GSK3β的三位点shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β,并进行了初步的功能效应验证,为进一步研究GSK3β蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。
- 宋晓红翁丹卉邢辉卢运萍马丁王世宣
- 关键词：卵巢癌SHRNAGSK3Β
- 硼替佐米联合顺铂对卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞化疗敏感性的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 研究蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂作用于卵巢上皮性癌（卵巢癌）顺铂耐药细胞的效果,并探讨其诱导细胞凋亡的分子学机制.方法 实验分组：硼替佐米（50 nmol/L）＋顺铂（40μmol/L）、硼替佐米（50 nmol/L）、顺铂（40 μmol/L）、对照组（未加药物）,以未加药物和细胞,仅加培养基为空白对照（空白组）.采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组卵巢癌顺铂耐药细胞株C13细胞培养不同时间（12、24、36、48、60及72 h）后的增殖活性（以细胞存活率表示）,膜联蛋白-碘化丙啶双染色法流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;并采用蛋白印迹法检测各组细胞内凋亡抑制蛋白短亚型（cFLIPs）蛋白的表达水平,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8（caspase-8）活性检测试剂盒检测各组细胞内caspase-8的活性.结果 硼替佐米＋顺铂组细胞显示较好的抑制效果,作用12、24、36、48、60及72 h时其细胞存活率分别为（56.0±8.4）%、（44.7±7.3）%、（33.7±11.2）%、（27.6±8.0）%、（27.6±7.6）%和（28.1±2.4）%,均明显低于顺铂组各时间点（P〈0.05）.作用24 h时,顺铂、硼替佐米、硼替佐米＋顺铂组细胞凋亡率分别为（16.7±l.7）%、（23.4±2.1）%和（26.9±1.6）%,硼替佐米＋顺铂组明显高于顺铂或硼替佐米组（P〈0.05）.各药物处理组细胞内cFLIPs蛋白表达水平均不同程度下降,以硼替佐米＋顺铂组[（43.2±2.3）%]降低最为明显,分别与顺铂、硼替佐米组[分别为（75.7±3.0）%、（67.9±2.1）%]比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.顺铂、硼替佐米和硼替佐米＋顺铂组细胞内caspase-8活性分别为2.3±1.0、4.2±0.9和5.6±1.6,两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂能增强卵巢癌顺铂耐药细胞的化疗敏感性;由药物作用后cFLIPs表达的降低和caspase-8活性的增强推测。
- 粟妍翁丹卉孔繁飞范良生胡轶宋晓红邢辉王薇马丁王世宣
- 关键词：蛋白酶抑制药硼酸化物顺铂抗肿瘤联合化疗方案
- 两位点短发卡状RNA诱导AKT2基因沉默在卵巢癌细胞紫杉醇敏感性中的应用研究被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨AKT2基因在肿瘤细胞对紫杉醇敏感性中的作用。方法:分别构建2个针对同一AKT2基因不同位点的短发卡状RNA(shRNA)载体,转染人卵巢癌细胞A2780、SKOV3,荧光显微镜观察细胞内荧光蛋白的表达及转染效率,运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹(western blotting)方法比较单独转染的抑制瘤和共转染对AKT2表达的沉默效率;抑制AKT2表达后,流式细胞仪(FACS)检测肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。结果:构建的2种shRNA表达载体均可抑制AKT2 mRNA和蛋白的表达,共转染的抑制率明显高于分别单独转染的抑制率(P<0.05);FACS结果显示,共转染沉默AKT2基因后,细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:共转染针对AKT2基因不同位点的2个shRNA真核表达载体,对AKT2基因的抑制效率高于单独转染1个载体;抑制卵巢癌细胞中AKT2基因表达,能增强其对紫杉醇的敏感性。
- 宋晓红邢辉翁丹卉马晓黎卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：RNA干扰紫杉醇基因AKT2
- 真核表达Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)敏感性的影响。方法构建Survivin正义全长真核表达质粒(pcDNA3.1-Survivin),经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780,以转染pcDNA3.1空载体的A2780细胞为对照。RT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测Survivin mRNA和蛋白质的表达;MTT比色法检测紫杉醇对两组细胞存活率的影响;流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡率。结果①RT-PCR和Western blot检测提示转染pcD-NA3.1-Survivin组中Survivin mRNA和蛋白质表达明显高于空载体组。②MTT比色法和FACS检测提示转染pcD-NA3.1-Survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组,差异均有显著性意义(P<0.05)。pcDNA3.1-Survivin转染后的A2780细胞对紫杉醇的敏感性明显降低。结论卵巢癌对紫杉醇的耐药性可能与Sur-vivin基因表达有关。
- 马晓黎邢辉翁丹卉宋晓红卢运萍马丁
- 关键词：卵巢肿瘤SURVIVIN紫杉醇
